Bioenergetiikka ja proteiiniaineenvaihdunta satunnaisessa amyotrofisessa lateraaliskleroosissa (Fibro-ALS)
JOHDANTO: Amyotrofinen lateraaliskleroosi (ALS) on aivojen ja selkäytimen motoristen hermosolujen rappeuttava sairaus. Taudin patofysiologiset mekanismit ovat edelleen tuntemattomia. Keskimääräinen ALS-tauti alkaa noin 60 vuoden iässä ja potilaiden keskimääräinen eloonjäämisikä on noin 2 vuotta. Sairaus on vastuussa progressiivisesta halvauksesta, joka johtaa kuolemaan hengitysvajeeseen. Ainoa saatavilla oleva hoito on rilutsoli, jonka tehokkuus taudin etenemiseen on erittäin vaatimaton. ALS on kolmas neurodegeneratiivinen sairaus, jota sairastaa 6 000 henkilöä Ranskassa ja 150 000 ihmistä maailmassa. Taudin esiintymiseen osallistuneiden päähenkilöiden joukossa mitokondrioiden häiriöt ja proteiinien kerääntyminen näyttävät olevan keskeisiä elementtejä.
TAVOITTEET: Tarkoittaa energia- ja proteiiniaineenvaihdunnan merkitystä ALS:n satunnaisissa muodoissa, tunnistaa taudin mahdolliset biomarkkerit ja testata uusia hoitomuotoja.
MENETELMÄT: Tutkijat tutkivat solujen kasvua, bioenergetiikkaa, mitokondrioiden dynamiikkaa, vapaiden radikaalien tuotantoa, sytoplasmisten inkluusioiden läsnäoloa, sytoskeleton rakennetta ja stressivastetta satunnaisista ALS-potilaista saaduissa primaarisissa ihofibroblasteissa. Tutkimus suoritetaan kolmen vuoden ajan 3 keskuksessa, jotka ovat erikoistuneet motorisiin hermosoluihin, mitokondrioiden aineenvaihduntaan ja hermosolujen sytoskeletoon.
NÄKYMÄT: Jos tutkijat onnistuvat tunnistamaan eroja ALS-fibroblastien ja kontrollien välillä, tulokset ovat avaintekijöitä vahvistamaan hypoteesia systeemisestä sairaudesta, johon liittyy tärkeä metabolinen osallistuminen, määrittelemään paremmin ALS:n patofysiologisia mekanismeja, löytämään mahdollisia biomarkkereita ja testaamaan uusia terapioita.
Tutkimuksen yleiskatsaus
Tila
Interventio / Hoito
Yksityiskohtainen kuvaus
Tutkijat tutkivat fibroblasteja, jotka ovat peräisin satunnaisista ALS-potilaista.
Kerätään kliiniset parametrit, kuten sukupuoli, ikä, alkamisikä, kliininen esitys, sähköfysiologiset ja hengitysparametrit, hoidot.
Potilaiden ja kontrollien fibroblasteja monistetaan ja viljellään ihobiopsioista.
Primääriset fibroblastisoluviljelmät johdetaan ihobiopsioista, jotka on otettu kontrollihenkilöiltä ja potilailta kirjallisen suostumuksen saatuaan. Monistukset suoritetaan siirrostuksesta 1 - 6, jolloin solun kylmäsäilytykseen jää aikaa 10 näytteelle solulinjaa kohden. Kaikki kokeet suoritetaan soluilla, joilla on samanlainen siirtoluku, välillä 6-25, jotta vältetään vanhenemisesta johtuvia artefakteja.
Kunkin linjan solujen kasvua seurataan IncuCyte ZOOM® -järjestelmällä (Essen Biosciences), mikroskoopilla, joka sijaitsee soluhautomossa, ja verkkoon kytketyllä ulkoisen ohjaimen kiintolevyllä, joka kerää ja käsittelee kuvatietoja. Solujen kasvu lasketaan automaattisesti kullakin aikapisteellä käyttämällä suhteellista solutiheyttä (miehitetyn alueen suhde hankittujen alueiden kokonaispinta-alaan).
Fibroblastien hengitysparametreja seurataan tarkasti korkearesoluutioisella oksigrafilla (OROBOROS). Mitokondrioiden hengitysketjun kunkin kompleksin entsymaattinen aktiivisuus mitataan spektrometrisesti ja mitokondrioiden kalvopotentiaalia tutkitaan fluoresenssimikroskopialla (TMRM-koetin). Tutkijat tutkivat myös mitokondriodynamiikkaa ja mitokondrioverkoston arkkitehtuuria fluoresenssimikroskopialla ja superresoluutiomikroskopialla (SRM, Roper). Vapaiden radikaalien tuotantoa arvioidaan oksidatiiviselle stressille herkillä koettimilla. Lopuksi suoritetaan metabolominen tutkimus (massaspektrometria QTRAP LC/MS/MS 5500 ABSciex) solujen metaboliittien tarkkaan karakterisoimiseksi ja niiden aineenvaihduntaprofiilin arvioimiseksi.
Tutkijat etsivät proteiiniinkluusioita (välimuotofilamentit, TDP43, FUS, ubikitiini) immunofluoresenssitekniikalla. Proteiiniaineenvaihdunnan tutkimiseksi suoritetaan Western Blots. Sytoskeleton arkkitehtuuria analysoidaan SRM- ja fluoresenssimikroskopialla, ja tutkijat yrittävät transfektoida fibroblasteja neurofilamenttien ilmentämiseksi ja tutkia seurauksia sytoskeletiin ja proteiinien aineenvaihduntaan.
Tutkijat tutkivat solujen vastetta stressiin (hypoksia SCI-tive Dual, nälkä) ja vanhenemiseen (korkeat kulkumäärät).
Opintotyyppi
Ilmoittautuminen (Odotettu)
Vaihe
- Varhainen vaihe 1
Osallistumiskriteerit
Kelpoisuusvaatimukset
Opintokelpoiset iät
Hyväksyy terveitä vapaaehtoisia
Sukupuolet, jotka voivat opiskella
Kuvaus
Sisällyttämiskriteerit :
- vapaasti allekirjoitettu kirjallinen suostumus
- 18-80-vuotiaat
- El Escorial Criteria määrittelee ALS
- normaali neurologinen tutkimus
Poissulkemiskriteerit:
- samanaikainen sairaus tai hoito, joka voi vaikuttaa aineenvaihduntaan
- epäilty erotusdiagnoosi, varhaiset ja myöhäiset muodot (<6 kuukautta > 3 vuotta)
- ALS:ää ei ole määritelty El Escorial Criteriassa
- osallistumissuostumuksen peruuttaminen
Opintosuunnitelma
Miten tutkimus on suunniteltu?
Suunnittelun yksityiskohdat
- Ensisijainen käyttötarkoitus: Perustiede
- Jako: Ei satunnaistettu
- Inventiomalli: Rinnakkaistehtävä
- Naamiointi: Ei mitään (avoin tarra)
Aseet ja interventiot
Osallistujaryhmä / Arm |
Interventio / Hoito |
|---|---|
|
Muut: Potilaat
El Escorial Criteria määrittelee ALS.
|
|
|
Muut: Säätimet
Oireettomat kohteet normaalilla tutkimuksella.
|
Mitä tutkimuksessa mitataan?
Ensisijaiset tulostoimenpiteet
Tulosmittaus |
Toimenpiteen kuvaus |
Aikaikkuna |
|---|---|---|
|
Fibroblastien kasvun kinetiikka
Aikaikkuna: 24 tuntia
|
Fibroblastilinjojen kasvunopeudet
|
24 tuntia
|
Toissijaiset tulostoimenpiteet
Tulosmittaus |
Toimenpiteen kuvaus |
Aikaikkuna |
|---|---|---|
|
Mitokondrioiden aineenvaihdunta
Aikaikkuna: 24 tuntia
|
fibroblastien hengitysparametreja tutkitaan tarkasti oksigrafialla, menetelmällä, jossa mitataan fibroblastien hapenkulutusnopeuksia eri aineenvaihduntavaiheissa
|
24 tuntia
|
|
Proteiiniaineenvaihdunta
Aikaikkuna: 24 tuntia
|
Kohdeproteiinin intrasytoplasman inkluusiota etsitään.
|
24 tuntia
|
|
stressi vanhenemisessa vastaus
Aikaikkuna: 24 tuntia
|
Solulinjojen stressin aiheuttamaa vastausta hypoksiaan ja ravitsemuspuutteeseen tutkitaan.
|
24 tuntia
|
Yhteistyökumppanit ja tutkijat
Sponsori
Opintojen ennätyspäivät
Opi tärkeimmät päivämäärät
Opiskelun aloitus
Ensisijainen valmistuminen (Odotettu)
Opintojen valmistuminen (Odotettu)
Opintoihin ilmoittautumispäivät
Ensimmäinen lähetetty
Ensimmäinen toimitettu, joka täytti QC-kriteerit
Ensimmäinen Lähetetty (Arvio)
Tutkimustietojen päivitykset
Viimeisin päivitys julkaistu (Arvio)
Viimeisin lähetetty päivitys, joka täytti QC-kriteerit
Viimeksi vahvistettu
Lisää tietoa
Tähän tutkimukseen liittyvät termit
Muita asiaankuuluvia MeSH-ehtoja
Muut tutkimustunnusnumerot
- 2016/36
Nämä tiedot haettiin suoraan verkkosivustolta clinicaltrials.gov ilman muutoksia. Jos sinulla on pyyntöjä muuttaa, poistaa tai päivittää tutkimustietojasi, ota yhteyttä register@clinicaltrials.gov. Heti kun muutos on otettu käyttöön osoitteessa clinicaltrials.gov, se päivitetään automaattisesti myös verkkosivustollemme .
Kliiniset tutkimukset Ihon biopsia
-
Centre Hospitalier Universitaire de NiceRekrytointi
-
Assistance Publique Hopitaux De MarseilleAktiivinen, ei rekrytointiEi-pienisoluiset keuhkosyöpäpotilaatRanska
-
Aquyre Bioscience, IncBoston University; Fox Chase Cancer Center; Johnson & JohnsonRekrytointi
-
Center for Innovation and Research OrganizationKeskeytetty
-
Northwestern UniversityValmis
-
Pusan National University Yangsan HospitalValmis
-
NeoDynamics ABRekrytointiRintasyöpäYhdistynyt kuningaskunta
-
Owlstone LtdValmisKeuhkosyöpäYhdistynyt kuningaskunta
-
Melanoma and Skin Cancer Trials LimitedMonash UniversityValmisIhosyöpä | Melanooma (iho)Australia