산발성 근위축성 측삭 경화증에서 생체 에너지 및 단백질 대사 (Fibro-ALS)
소개: 근위축성 측삭 경화증(ALS)은 뇌와 척수의 운동 뉴런의 퇴행성 질환입니다. 질병의 병태생리학적 기전은 아직 알려지지 않았습니다. ALS의 평균 발병 연령은 약 60세이며 환자의 평균 생존 기간은 약 2년입니다. 이 질병은 호흡 부전으로 인한 사망에 이르는 진행성 마비의 원인이 됩니다. 이용 가능한 유일한 치료법은 Riluzole이며, 질병의 진행에 대해 매우 완만한 효율성을 보입니다. ALS는 프랑스에서 6000명, 세계에서 150,000명에게 영향을 미치는 세 번째 신경퇴행성 질환입니다. 질병 발생에 관여하는 주역 중 미토콘드리아 교란과 단백질 축적이 핵심 요소인 것으로 보입니다.
목표: ALS의 산발적 형태에서 에너지 및 단백질 대사의 의미를 정확히 파악하고, 질병의 잠재적인 바이오마커를 식별하고, 새로운 치료법을 테스트합니다.
방법: 조사관은 산발성 ALS 환자에게서 얻은 1차 피부 섬유아세포에서 세포 성장, 생체 에너지학, 미토콘드리아 역학, 자유 라디칼 생성, 세포질 내포물의 존재, 세포골격 구조 및 스트레스 반응을 연구할 것입니다. 이 연구는 운동 신경 질환, 미토콘드리아 대사 및 신경 세포 골격을 각각 전문으로 하는 3개의 센터에서 3년에 걸쳐 수행될 것입니다.
전망: 조사관이 ALS 섬유아세포와 대조군 사이의 차이를 식별하는 데 성공하면, 그 결과는 중요한 대사 참여가 있는 전신 질환의 가설을 강화하고, ALS 병리생리학적 메커니즘을 더 잘 정의하고, 잠재적인 바이오마커를 찾고, 새로운 테스트를 위한 핵심 요소가 될 것입니다. 요법.
연구 개요
상세 설명
연구자들은 산발성 ALS 환자에서 유래한 섬유아세포를 연구할 것입니다.
성별, 연령, 발병 연령, 임상 증상, 전기생리학 및 호흡 매개변수, 치료와 같은 임상 매개변수가 수집됩니다.
환자 및 제어 유래 섬유아세포는 피부 생검으로부터 증폭되고 배양될 것입니다.
1차 섬유아세포 세포 배양은 서면 동의를 얻은 후 대조군과 환자로부터 얻은 피부 생검에서 파생됩니다. 계대 1에서 6까지 증폭을 수행하여 세포주당 10개 샘플의 세포 동결 보존 시간을 허용합니다. 모든 실험은 노화로 인한 인공물을 피하기 위해 6에서 25까지의 유사한 계대 번호를 가진 세포에서 수행됩니다.
각 라인의 세포 성장은 IncuCyte ZOOM® 시스템(Essen Biosciences), 세포 인큐베이터에 있는 현미경 갠트리, 이미지 데이터를 수집하고 처리하는 네트워크 외부 컨트롤러 하드 드라이브로 모니터링됩니다. 세포 성장은 상대 세포 밀도(획득한 영역의 총 면적에 대한 점유 면적의 비율)를 사용하여 각 시점에서 자동으로 계산됩니다.
섬유아세포의 호흡 매개변수는 고해상도 산소 그래프(OROBOROS)로 정밀하게 모니터링됩니다. 미토콘드리아 호흡 사슬의 각 복합체의 효소 활성을 분광법으로 측정하고 미토콘드리아 막 전위를 형광 현미경(TMRM 프로브)으로 연구합니다. 연구자들은 또한 형광 현미경과 초고해상도 현미경(SRM, Roper)으로 미토콘드리아 역학과 미토콘드리아 네트워크의 구조를 연구할 것입니다. 자유 라디칼의 생산은 산화 스트레스에 민감한 프로브로 추정됩니다. 마지막으로 대사 연구(질량 분석 QTRAP LC/MS/MS 5500 ABSciex)를 수행하여 세포의 대사 산물을 정확하게 특성화하고 대사 프로필을 평가합니다.
조사관은 면역 형광 기법으로 단백질 내포물(중간 필라멘트, TDP43, FUS, 유비퀴틴)을 검색합니다. Western Blots는 단백질 대사를 연구하기 위해 수행됩니다. 세포골격의 구조는 SRM 및 형광 현미경으로 분석될 것이며 조사관은 신경미세섬유를 발현하고 세포골격 및 단백질 대사에 대한 결과를 연구하기 위해 섬유아세포를 형질감염시키려고 시도할 것입니다.
연구자들은 스트레스(hypoxia SCI-tive Dual, 기아) 및 노화(높은 계대 수)에 대한 세포의 반응을 연구할 것입니다.
연구 유형
등록 (예상)
단계
- 초기 1단계
참여기준
자격 기준
공부할 수 있는 나이
건강한 자원 봉사자를 받아들입니다
연구 대상 성별
설명
포함 기준 :
- 무료 서명 서면 동의
- 18세에서 80세 사이
- El Escorial Criteria에 의해 정의된 ALS
- 정상적인 신경학적 검사
제외 기준:
- 대사에 영향을 미치기 쉬운 동반 질환 또는 치료
- 감별 진단이 의심됨, 초기 및 후기 형태(<6개월 > 3년)
- El Escorial Criteria에 의해 정의되지 않은 ALS
- 참여 동의 철회
공부 계획
연구는 어떻게 설계됩니까?
디자인 세부사항
- 주 목적: 기초 과학
- 할당: 무작위화되지 않음
- 중재 모델: 병렬 할당
- 마스킹: 없음(오픈 라벨)
무기와 개입
참가자 그룹 / 팔 |
개입 / 치료 |
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다른: 환자
El Escorial Criteria에 의해 정의된 ALS.
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다른: 통제 수단
정상 검사를 받은 무증상 피험자.
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연구는 무엇을 측정합니까?
주요 결과 측정
결과 측정 |
측정값 설명 |
기간 |
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섬유아세포 성장의 동역학
기간: 24 시간
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섬유아세포 라인의 성장률
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24 시간
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2차 결과 측정
결과 측정 |
측정값 설명 |
기간 |
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미토콘드리아 대사
기간: 24 시간
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섬유아세포의 호흡 매개변수는 다양한 대사 단계에서 섬유아세포의 산소 소비율을 측정하는 방법인 옥시그래피로 정밀하게 연구됩니다.
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24 시간
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단백질 대사
기간: 24 시간
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표적 단백질의 세포질내 포함의 존재를 찾을 것이다.
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24 시간
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노화의 스트레스 답변
기간: 24 시간
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저산소증과 영양 부족 상태에서 세포주의 스트레스로 인한 답을 연구할 것입니다.
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24 시간
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공동 작업자 및 조사자
연구 기록 날짜
연구 주요 날짜
연구 시작
기본 완료 (예상)
연구 완료 (예상)
연구 등록 날짜
최초 제출
QC 기준을 충족하는 최초 제출
처음 게시됨 (추정)
연구 기록 업데이트
마지막 업데이트 게시됨 (추정)
QC 기준을 충족하는 마지막 업데이트 제출
마지막으로 확인됨
추가 정보
이 연구와 관련된 용어
추가 관련 MeSH 약관
기타 연구 ID 번호
- 2016/36
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