Bioenergética e Metabolismo Proteico na Esclerose Lateral Amiotrófica Esporádica (Fibro-ALS)
INTRODUÇÃO: A Esclerose Lateral Amiotrófica (ELA) é uma doença degenerativa dos neurônios motores do cérebro e da medula espinhal. Os mecanismos fisiopatológicos da doença permanecem desconhecidos. A idade média de início da ELA é de cerca de 60 anos e a sobrevida média dos pacientes é de cerca de 2 anos. A doença é responsável por uma paralisia progressiva que leva à morte por insuficiência respiratória. O único tratamento disponível é o Riluzol, com eficiência muito modesta na progressão da doença. ALS é a terceira doença neurodegenerativa, afetando 6.000 pessoas na França, 150.000 no mundo. Entre os protagonistas envolvidos na ocorrência da doença, as perturbações mitocondriais e os acúmulos de proteínas parecem ser elementos centrais.
OBJETIVOS: Precisar a implicação do metabolismo energético e proteico nas formas esporádicas da ELA, identificar potenciais biomarcadores da doença e testar novas terapias.
MÉTODOS: Os pesquisadores estudarão crescimento celular, bioenergética, dinâmica mitocondrial, produção de radicais livres, presença de inclusões citoplasmáticas, estrutura do citoesqueleto e resposta ao estresse em fibroblastos primários da pele obtidos de pacientes com ELA esporádica. O estudo será realizado durante um período de três anos em 3 centros especializados respectivamente em doenças do neurônio motor, metabolismo mitocondrial e citoesqueleto neuronal.
PERSPECTIVAS: Se os investigadores conseguirem identificar diferenças entre fibroblastos de ELA e controles, os resultados serão elementos-chave para reforçar a hipótese de uma doença sistêmica com importante participação metabólica, para melhor definir os mecanismos fisiopatológicos da ELA, encontrar potenciais biomarcadores e testar novos terapias.
Visão geral do estudo
Status
Condições
Intervenção / Tratamento
Descrição detalhada
Os investigadores estudarão fibroblastos derivados de pacientes com ELA esporádica.
Serão coletados parâmetros clínicos como sexo, idade, idade de início, apresentação clínica, parâmetros eletrofisiológicos e respiratórios, tratamentos.
Fibroblastos derivados de pacientes e controles serão amplificados e cultivados a partir de biópsias de pele.
Culturas primárias de células de fibroblastos serão derivadas de biópsias de pele obtidas de indivíduos controle e dos pacientes após obtenção de consentimento por escrito. Amplificações serão realizadas, da passagem 1 a 6, permitindo o tempo para criopreservação celular de 10 amostras por linha celular. Todos os experimentos serão conduzidos em células com números de passagem semelhantes, variando de 6 a 25, para evitar artefatos devido à senescência.
O crescimento celular de cada linha será monitorado com o sistema IncuCyte ZOOM® (Essen Biosciences), um pórtico de microscópio que reside em uma incubadora de células e um disco rígido controlador externo em rede que coleta e processa dados de imagem. O crescimento celular será calculado automaticamente em cada ponto de tempo usando a densidade celular relativa (razão da área ocupada para a área total das regiões adquiridas).
Os parâmetros respiratórios dos fibroblastos serão monitorados precisamente com um oxígrafo de alta resolução (OROBOROS). A atividade enzimática de cada complexo da cadeia respiratória mitocondrial será medida por espectrometria, e o potencial de membrana mitocondrial será estudado com microscopia de fluorescência (sonda TMRM). Os investigadores também estudarão a dinâmica mitocondrial e a arquitetura da rede mitocondrial com microscopia de fluorescência e microscopia de super-resolução (SRM, Roper). A produção de radicais livres será estimada com sondas sensíveis ao estresse oxidativo. Finalmente, um estudo metabolômico (espectrometria de massa QTRAP LC/MS/MS 5500 ABSciex) será realizado para caracterizar precisamente os metabólitos nas células e avaliar seu perfil metabólico.
Os investigadores irão procurar inclusões de proteínas (filamentos intermediários, TDP43, FUS, ubiquitina) com técnicas de imunofluorescência. Western Blots serão realizados para estudar o metabolismo das proteínas. A arquitetura do citoesqueleto será analisada em SRM e microscopia de fluorescência, e os pesquisadores tentarão transfectar fibroblastos para expressar Neurofilamentos e estudar as consequências no citoesqueleto e no metabolismo de proteínas.
Os investigadores estudarão a resposta das células ao estresse (hipóxia SCI-tive Dual, fome) e à senescência (altos números de passagem).
Tipo de estudo
Inscrição (Antecipado)
Estágio
- Fase inicial 1
Critérios de participação
Critérios de elegibilidade
Idades elegíveis para estudo
Aceita Voluntários Saudáveis
Gêneros Elegíveis para o Estudo
Descrição
Critério de inclusão :
- um livre assinado um consentimento por escrito
- com idade entre 18 e 80 anos
- ELA definida pelos Critérios El Escorial
- exame neurológico normal
Critério de exclusão:
- comorbidade ou tratamento suscetível a impacto no metabolismo
- diagnóstico diferencial suspeita, formas precoce e tardia (< 6 meses > 3 anos)
- ELA não definida pelos Critérios El Escorial
- retirada do consentimento para participar
Plano de estudo
Como o estudo é projetado?
Detalhes do projeto
- Finalidade Principal: Ciência básica
- Alocação: Não randomizado
- Modelo Intervencional: Atribuição Paralela
- Mascaramento: Nenhum (rótulo aberto)
Armas e Intervenções
Grupo de Participantes / Braço |
Intervenção / Tratamento |
|---|---|
|
Outro: Pacientes
ELA definida pelos Critérios El Escorial.
|
|
|
Outro: Controles
Indivíduos assintomáticos com exame normal.
|
O que o estudo está medindo?
Medidas de resultados primários
Medida de resultado |
Descrição da medida |
Prazo |
|---|---|---|
|
Cinética do crescimento de fibroblastos
Prazo: 24 horas
|
As taxas de crescimento das linhas de fibroblastos
|
24 horas
|
Medidas de resultados secundários
Medida de resultado |
Descrição da medida |
Prazo |
|---|---|---|
|
Metabolismo mitocondrial
Prazo: 24 horas
|
os parâmetros respiratórios dos fibroblastos serão estudados com precisão por oxigrafia, método que consiste em medir as taxas de consumo de oxigênio dos fibroblastos em diferentes fases metabólicas
|
24 horas
|
|
Metabolismo protéico
Prazo: 24 horas
|
Será buscada a presença de inclusão intracitoplasmática de proteína alvo.
|
24 horas
|
|
estresse na resposta da senescência
Prazo: 24 horas
|
será estudada a resposta devido ao estresse das linhagens celulares em hipóxia e carência nutricional.
|
24 horas
|
Colaboradores e Investigadores
Patrocinador
Datas de registro do estudo
Datas Principais do Estudo
Início do estudo
Conclusão Primária (Antecipado)
Conclusão do estudo (Antecipado)
Datas de inscrição no estudo
Enviado pela primeira vez
Enviado pela primeira vez que atendeu aos critérios de CQ
Primeira postagem (Estimativa)
Atualizações de registro de estudo
Última Atualização Postada (Estimativa)
Última atualização enviada que atendeu aos critérios de controle de qualidade
Última verificação
Mais Informações
Termos relacionados a este estudo
Termos MeSH relevantes adicionais
Outros números de identificação do estudo
- 2016/36
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