抗原の多様性が制限された環境における免疫およびマイクロバイオームの変化の影響に対する対策 (ICELAND-TWO) (ICELAND-2)

実験コンセプト

これは、ボランティアが新しい栄養補助食品粉末（小袋、1011 CFU Bifidobacterium longum 1714（Alimentary 11 Health、コーク、アイルランド）またはプラセボを含む）を 1 日 1 回、朝に摂取することになる、二重結合の制御されたパイロット研究です。年間を通して朝食付き。 介入は、到着時にすべての参加者に対して開始されます (個別開始)。 この研究デザインを使用して、身長適応に対するプロバイオティクスの利点も研究できます。

実験のコンセプトは、生体サンプル (唾液、血液、便) の収集と、いくつかの紙と鉛筆、および記録データのみに基づいています。 これにより、プロジェクトが CONCORDIA 乗組員の日常活動に干渉することは最小限に抑えられます。 女性と男性の両方の参加者が含まれます。

1. CONCORDIA 滞在前に 1 回の血液、1 回の唾液、1 回の糞便サンプル、および同時に 1 回の紙と鉛筆によるデータ収集 (滞在の 2 ～ 3 か月前 - T Zero、BDC)
2. CONCORDIA 滞在中の 3 つの血液と唾液サンプル (1 か月目、4 か月目、9 か月目、T0、T4 および T9 に対応)、および毎月の便サンプル採取 (1 か月目から 9 か月目、T1 から 9 か月目)、およびアンケート データ (紙と鉛筆のデータおよび/またはオンライン)。
3. CONCORDIA滞在後、血液1回、唾液1回、便1回のサンプル、および紙と鉛筆によるデータ収集を同時に1回（滞在後3〜6か月-T12）

唾液サンプリング: 標準的な唾液サンプリング キット (Oragene-DNA - OG-500、DNA Genotec、オタワ、オンタリオ州、カナダ) を使用します (図 2 を参照)。

糞便サンプリング: 標準的な糞便サンプリング キット (Sarstedt) を使用して (図 3 を参照)、各糞便から 3 つの小さなサンプルを取り出し、別々の容器に保管します。

糞便キャッチャー: 紙ベースの便収集補助具 (さまざまな言語で印刷された説明書付き (FecesCatcher®) (図 4)

採血: 採血は、2 本の 5 ml ヘパリン化チューブ (細胞採取用に合計 10 ml) と、1 回の採血につき 5 ml の乾燥チューブ 1 本で行われます。 血液を処理するための十分な数の分離チューブとクライオチューブも提供されます。

手順の概要

唾液採取：CONCORDIA 滞在前であればいつでも実施できますが、最も簡単なのは出発前の乗務員ミーティング中です。 唾液サンプリングは、4か月目と9か月目、およびCONCORDIA滞在後に繰り返されます。 唾液サンプルは前処理を必要とせず、残りの時間は室温で保存できます。

出発前のミーティングでは、食生活（排便などの胃腸症状を含む）に関する 1 時間のインタビューを行う必要があります。 紙と鉛筆のテスト（1時間）も収集されます。 これには、食物頻度アンケート（FFQ）、胃腸症状評価尺度（GSRS）、および以前の病気、薬物摂取、および治療に関連する構造化されたアンケートが含まれます。 FFQ と GSRS は、採血と同時にコンコルディアで評価されます。

便のサンプリングと簡単な健康状態の評価: サンプリング (3 つのアリコート、エンドウ豆のサイズ、別々の容器に) は、参加している各 CONCORDIA 乗組員の裁量で毎月 1 回行うことができますが、毎回ほぼ同じ日に行うことが優先されます。 乗組員間の調整されたサンプリングは必要ありませんが、その日はサンプリング キット/日記に記載する必要があります。 これは、ESA MD によって監督され、文書化される必要があります。 便のサンプリングに加えて、参加者は、視覚的アナログ尺度で気分、ストレス、社会的完全性を評価するよう求められます。 さらに、ESA MD はすべての参加者に情報を提供します。 この措置は、RCT の結果として必要です。

食事の記録: ESA MD は、可能であれば定期的に食事/食品/食品の状態の写真を撮るよう求められます。 最も重要なことは、MD が食事の標準化された写真を撮る必要があることです (採便の前の最後の 3 日間と採便の日の写真。 カメラとストレージ デバイスは、イタリアのアオスタにある MD に渡されました。

代替的および／または追加的に、料理人は自分の料理活動を記録する。

T - 採便の 3 日前:

ESA MDが朝食、昼食、夕食の写真を撮影（2ユーロ硬貨参考）

T - 採便の 2 日前:

ESA MDが朝食、昼食、夕食の写真を撮影（2ユーロ硬貨参考）

T - 採便の 1 日前:

ESA MDが朝食、昼食、夕食の写真を撮影（2ユーロ硬貨参考）

採便日数：

ESA MDが朝食、昼食、夕食の写真を撮影（2ユーロ硬貨参考）

糞便サンプルの前処理は必要ありません。サンプルは-50°Cで保存されます。

採血: 免疫検査のための採血は、1 回の瀉血で行う必要があり、CONCORDIA スタッフのプログラムされた健康診断の際に行うことができます。 採血は、2 本の 5 ml ヘパリン チューブ (細胞採取用に合計 10 ml) と、血清用の 5 ml の乾燥チューブ 1 本で行う必要があります。

血液サンプルの前処理 (ESA 調査担当医師が実施)

同種の免疫機能には生きた細胞が必要であり、その後蘇生できるように保存状態で凍結保存する必要があります。 これは、収集後の迅速な処理 (4 ～ 6 時間以内)、急速凍結、および -40°C 未満での保存培地 (DMSO を含む) を意味します。

血球の保存: ヘパリンナトリウムを含む Vacutainer® CPT™ 細胞調製チューブは、細胞調製を簡素化するために提供されています (図 5、左)。 CPT™ チューブには、フィコール (密度バッファー) と遠心分離用のゲルが直接含まれています。 血液は、通常のバキュテナー チューブのようにゲルの上部に集められます。 遠心分離により、赤血球、顆粒球 (ゲルの下に移動) が、単核細胞および上部に留まっている血漿から分離されます。 単核細胞は滅菌ハンクスバッファー (付属) で洗浄し、ペレットを凍結バッファー (付属) に再懸濁し、少なくとも 40°C 未満で直接凍結する必要があります。