Ellenintézkedés az immunrendszer és a mikrobiom változásainak hatásaira korlátozott ANTigéndiverzitású környezetben (IZLAND-TWO) (ICELAND-2)

KÍSÉRLETI FOGALOM

Ez egy kettős kötésű, ellenőrzött kísérleti vizsgálat, amelyben az önkéntesek naponta egyszer kapnak egy új táplálék-kiegészítő port (1011 CFU Bifidobacterium longum 1714-et (Alimentary 11 Health, Cork, Írország) tartalmazó tasak vagy placebót), amelyet reggel kell bevenni. reggelivel egész évben. A beavatkozás minden résztvevő számára az érkezéskor kezdődik (egyéni rajt). Ezzel a vizsgálati tervvel a probiotikumnak a magassághoz való alkalmazkodásra gyakorolt ​​előnyei is tanulmányozhatók.

A kísérleti koncepció csak biominták (nyál, vér, széklet) és néhány papír-ceruza és dokumentum adatgyűjtésen alapul. Ezáltal a projekt minimálisan befolyásolja a CONCORDIA legénységének napi tevékenységét. Női és férfi résztvevők egyaránt szerepelnek.

1. Egy vér-, egy nyál- és egy székletminta a CONCORDIA-tartózkodás előtt, valamint egyidejű papír-ceruza adatgyűjtés (-2-3 hónappal a tartózkodás előtt - T Zero, BDC)
2. Három vér- és egy nyálminta (1. hónap, 4. és 9. hónap, amely megfelel a T0-nak, T4-nek és T9-nek) a CONCORDIA-tartózkodás alatt, valamint havi székletminta (1-9. hónap, T1-T9. hónap), valamint kérdőív adatok (papír-ceruza adatok és/vagy online).
3. Egy vér-, egy nyál- és egy székletminta a CONCORDIA tartózkodás után, valamint egyidejű papír-ceruza adatfelvétel (a tartózkodás után 3-6 hónappal - T12)

Nyálmintavétel: szabványos nyál-mintavevő készletet (Oragene-DNA - OG-500, DNA Genotec, Ottawa, ON, Kanada) használnak (lásd a 2. ábrát).

Székletmintavétel: szabványos széklet-mintavevő készletet (Sarstedt) használnak (lásd a 3. ábrát), hogy minden székletből 3 kis mintát vegyenek, és elkülönített tartályokban tárolják.

Székletgyűjtő: Papír alapú székletgyűjtési segédeszköz (változó nyelven nyomtatott utasításokkal (FecesCatcher®) (4. ábra)

Vérmintavétel: Vérvételenként két 5 ml-es heparinizált csőben (összesen 10 ml a sejtgyűjtéshez) és egy szárított 5 ml-es csőben történik a vérvétel. Megfelelő számú elválasztó csövet és kriocsöveket is biztosítanak a vér feldolgozásához.

ELJÁRÁS VÁZLATA

Nyálmintavétel: a CONCORDIA tartózkodás előtt bármikor elvégezhető, legegyszerűbben az indulás előtti személyzeti értekezleten. A nyálmintavétel megismétlődik a 4. és 9. hónapban, valamint a CONCORDIA tartózkodás után. A nyálminták nem igényelnek előfeldolgozást, és a fennmaradó ideig szobahőmérsékleten tárolhatók.

Az indulás előtti megbeszélés során egy 1 órás interjút kell készíteni a táplálkozási szokásokkal kapcsolatban (beleértve a gyomor-bélrendszeri tüneteket, például a székletürítést). A papír-ceruza teszteket (1 óra) is gyűjtjük. Ez magában foglalja az Élelmiszer-gyakorisági Kérdőívet (FFQ), a gyomor-bélrendszeri tünetek értékelési skáláját (GSRS), valamint a korábbi betegségekre, gyógyszerbevitelre és orvosi kezelésekre vonatkozó strukturált kérdőívet. Az FFQ-t és a GSRS-t a vérmintavétellel egy időben értékelik a Concordiában.

Székletmintavétel és rövid közérzetfelmérés: A mintavétel (három alikvot, borsó nagyságú, külön tartályokban) minden résztvevő CONCORDIA személyzeti tag belátása szerint havonta egyszer, de előnyösen a hónapok körülbelül azonos napján történhet. A személyzet tagjai között nincs szükség összehangolt mintavételre, de a napot fel kell tüntetni a mintavételi készleteken/naplón. Ezt az ESA MD-nek kell felügyelnie és dokumentálnia. A székletmintavétel mellett a résztvevőket arra kérik, hogy vizuális analóg skálán értékeljék a hangulatot, a stresszt és a szociális integritást. Ezenkívül az ESA MD minden résztvevő számára biztosítja az információkat. Erre az intézkedésre az RCT eredményeként van szükség.

Élelmiszer-nyilvántartás: Az ESA MD-t felkérik, hogy lehetőség szerint rendszeresen készítsen képeket az ételekről/ételekről/étel állapotáról. A legfontosabb, hogy az orvosnak szabványosított fényképeket kell készítenie az étkezésekről (a székletmintavétel előtti utolsó három napról és a napokról). A kamerát és a tárolóeszközöket az olaszországi Aosta városában lévő MD-nek adták át.

Alternatív megoldásként és/vagy emellett a szakács rögzíti főzési tevékenységeit.

T - 3 nappal a székletmintavétel előtt:

Az ESA MD lefényképezi (referencia 2 eurós érmével) a reggelit, az ebédet és a vacsorát

T - 2 nappal a székletmintavétel előtt:

Az ESA MD lefényképezi (referencia 2 eurós érmével) a reggelit, az ebédet és a vacsorát

T - 1 nappal a székletmintavétel előtt:

Az ESA MD lefényképezi (referencia 2 eurós érmével) a reggelit, az ebédet és a vacsorát

A székletmintavétel napjai:

Az ESA MD lefényképezi (referencia 2 eurós érmével) a reggelit, az ebédet és a vacsorát

A székletminták előfeldolgozása nem szükséges, a mintákat -50°C-on tároljuk.

Vérvétel: Az immunvizsgálathoz szükséges vérvételt egyszeri flebotómiával kell elvégezni, és a CONCORDIA munkatársainak programozott egészségügyi ellenőrzésekor is elvégezhető. A vérvételt két 5 ml-es heparinizált csőben (sejtgyűjtéshez összesen 10 ml), a szérumhoz pedig egy 5 ml-es szárított csőben kell végezni.

A vérminta előfeldolgozása (az ESA vizsgálóorvosának kell elvégeznie)

A rokon immunfunkciókhoz élő sejtekre van szükség, amelyeket le kell fagyasztani és tartósító körülmények között kell tárolni, hogy ezután újraéleszthetőek legyenek. Ez gyors feldolgozást jelent begyűjtés után (4-6 órán belül), gyors fagyasztást és -40°C alatti tartósítóközegben (DMSO-val).

Vérsejttárolás: A sejtek előkészítésének egyszerűsítése érdekében a Vacutainer® CPT™ sejt-előkészítő csövek nátrium-heparint tartalmaznak (5. ábra, bal). A CPT™ csövek közvetlenül tartalmaznak ficollt (sűrűségi puffert) és centrifugálásra kész gélt. A vért a gél tetején gyűjtik a szokásos vakutainer csövekhez hasonlóan. A centrifugálás elválasztja a vörösvértesteket, a granulocitákat (a gél alatt haladva) a mononukleáris sejtektől, és a plazmát, amely a tetején marad. A mononukleáris sejteket steril Hanks-pufferben (mellékelve) kell mosni, a pelletet pedig fagyasztópufferben (mellékelve) újra szuszpendálni, és közvetlenül legalább 40 °C alatt kell lefagyasztani.