Et modmål for virkningerne af immun- og mikrobiomændringer i miljøer med begrænset antigendiversitet (ISLAND-TO) (ICELAND-2)

EKSPERIMENT KONCEPT

Dette er en dobbeltbinding, kontrolleret pilotundersøgelse, hvor frivillige vil modtage et nyt kosttilskudspulver (pose, indeholdende 1011 CFU Bifidobacterium longum 1714 (Alimentary 11 Health, Cork, Irland) eller placebo) en gang hver dag, som skal tages om morgenen. med morgenmad hele året. Interventionen starter for hver deltager ved ankomsten (individuel start). Ved at bruge dette undersøgelsesdesign kan fordelene ved probiotikaet på højdetilpasning også studeres.

Det eksperimentelle koncept er kun baseret på indsamling af bioprøver (spyt, blod, afføring) og nogle papir-blyant- og dokumentardata. Derved er projektets indblanding i CONCORDIA-besætningens daglige aktiviteter minimal. Både kvindelige og mandlige deltagere er inkluderet.

1. Én blod-, én spyt- og én afføringsprøve før CONCORDIA-opholdet, foruden indsamling af papir-blyant-data én gang på samme tid (-2 til 3 måneder før opholdet – T Zero, BDC)
2. Tre blod- samt spytprøver (måned 1, måned 4 og 9, svarende til T0, T4 og T9) under CONCORDIA-opholdet, samt månedlig indsamling af afføringsprøver (måned 1 til 9, T1 til T9), plus spørgeskemadata (papir-blyantdata og/eller online).
3. Én blod-, én spyt- og én afføringsprøve efter CONCORDIA-opholdet, foruden indsamling af papir-blyant-data én gang på samme tid (3 til 6 måneder efter opholdet - T12)

Spytprøvetagning: et standard spytprøvetagningssæt (Oragene-DNA - OG-500, DNA Genotec, Ottawa, ON, Canada) vil blive brugt (se figur 2).

Prøveudtagning af afføring: Et standardprøvesæt til afføring (Sarstedt) vil blive brugt (se figur 3) til at hente 3 små prøver fra hver afføring og opbevares i adskilte beholdere.

Feces Catcher: Papirbaseret afføringsindsamlingshjælp (med instruktion trykt i variabelt sprog (FecesCatcher®) (Figur 4)

Blodprøvetagning: Blodprøvetagning vil blive udført i to 5 ml hepariniserede rør (i alt 10 ml til celleopsamling) og et tørret rør på 5 ml pr. blodprøve. Et passende antal adskillelsesrør og kryorør til behandling af blod vil også blive tilvejebragt.

PROCEDURE OVERSIGT

Spytprøvetagning: kan foretages når som helst før CONCORDIA-opholdet, lettest under besætningsmødet før afgang. Spytprøvetagning vil blive gentaget i måned 4 og 9 samt efter CONCORDIA ophold. Spytprøver behøver ingen forbehandling og kan opbevares ved stuetemperatur i den resterende tid.

Under mødet før afrejsen skal der foretages en 1-times samtale relateret til ernæringsvaner (inklusive mave-tarmsymptomer som afføring). Papir-blyant-tests (1 time) vil også blive indsamlet. Dette vil omfatte Food Frequency Questionnaire (FFQ), den gastrointestinale symptomvurderingsskala (GSRS) og et struktureret spørgeskema relateret til tidligere sygdomme, medicinindtag og medicinske behandlinger. FFQ og GSRS vil blive vurderet i Concordia på samme tidspunkt som blodprøvetagningen udføres.

Prøveudtagning af afføring og kort trivselsvurdering: Prøveudtagning (tre portioner, på størrelse med ærter, i separate beholdere) kan foretages efter eget valg af hvert deltagende CONCORDIA-besætningsmedlem en gang hver måned, men fortrinsvis på cirka samme dag i måneden hver gang. Der kræves ingen koordineret prøveudtagning mellem besætningsmedlemmer, men dagen bør noteres på prøvetagningssættene/dagbogen. Dette bør overvåges og dokumenteres af ESA's MD. Sammen med afføringsprøven vil deltagerne blive bedt om at vurdere humør, stress og social integritet på en visuel analog skala. Derudover vil ESA's MD give oplysningerne til hver deltager. Denne foranstaltning er nødvendig som resultat for RCT.

Madoptegnelser: ESA's MD bliver bedt om at tage billeder af måltider/mad/fødevarer regelmæssigt, hvis det er muligt. Det vigtigste er, at lægen skal tage standardiserede billeder af måltiderne (af de sidste tre dage forud for og dagene for afføringsprøven. Kameraet og lagerenhederne er blevet udleveret til MD i Aosta, Italien.

Alternativt og/eller derudover vil kokken registrere sine madlavningsaktiviteter.

T - 3 dage før afføringsprøvetagning:

ESA MD tager billede (med en reference 2 euro mønt) af morgenmadsmåltid, frokostmåltid og middagsmåltid

T - 2 dage før afføringsprøvetagning:

ESA MD tager billede (med en reference 2 euro mønt) af morgenmadsmåltid, frokostmåltid og middagsmåltid

T - 1 dage før afføringsprøvetagning:

ESA MD tager billede (med en reference 2 euro mønt) af morgenmadsmåltid, frokostmåltid og middagsmåltid

Dage med afføringsprøvetagning:

ESA MD tager billede (med en reference 2 euro mønt) af morgenmadsmåltid, frokostmåltid og middagsmåltid

Forbehandling af afføringsprøver er ikke nødvendig, prøver opbevares ved -50°C.

Blodprøvetagning: Blodudtagning til immuntest skal udføres ved en enkelt flebotomi og kan udføres på tidspunktet for programmerede helbredstjek af CONCORDIA-personalet. Blodprøvetagning skal udføres i to 5 ml hepariniserede rør (i alt 10 ml til celleopsamling), og et tørret rør på 5 ml til serum.

Forbehandling af blodprøven (udføres af ESA investigator-lægen)

Til beslægtede immunfunktioner er levende celler nødvendige, og de skal fryses og opbevares under bevarende forhold, så de kan genoplives derefter. Det betyder hurtig behandling efter opsamling (inden for 4-6 timer), hurtig nedfrysning og i konserveringsmedium (med DMSO) under -40°C.

Opbevaring af blodceller: Vacutainer® CPT™ cellepræparationsrør med natriumheparin leveres for at forenkle celleforberedelse (figur 5, venstre). CPT™-rør indeholder direkte ficoll (densitetsbuffer) og en gel klar til centrifugering. Blodet opsamles på toppen af ​​gelen som sædvanlige vacutainerrør. Centrifugering vil adskille røde blodlegemer, granulocytter (går under gelen) fra mononukleære celler og plasma, der bliver på toppen. Mononukleære celler skal vaskes i steril Hanks-buffer (medfølger), og pelleten skal resuspenderes i frysebuffer (medfølger) og direkte frosset ved mindst 40°C.