Una contromisura per gli effetti dei cambiamenti immunitari e del microbioma in ambienti con diversità antigenica limitata (ISLANDA-DUE) (ICELAND-2)

CONCETTO DI ESPERIMENTO

Questo è uno studio pilota controllato a doppio legame in cui i volontari riceveranno un nuovo integratore nutrizionale in polvere (bustina, contenente 1011 CFU Bifidobacterium longum 1714 (Alimentary 11 Health, Cork, Irlanda) o placebo) una volta al giorno, da assumere al mattino con colazione tutto l'anno. L'intervento inizia per ogni partecipante all'arrivo (inizio individuale). Utilizzando questo disegno di studio, è possibile studiare anche i benefici del probiotico sull'adattamento all'altezza.

Il concetto sperimentale si basa sulla raccolta di campioni biologici (saliva, sangue, feci) e solo alcuni dati carta-matita e documentari. In tal modo, l'interferenza del progetto con le attività quotidiane dell'equipaggio CONCORDIA è minima. Sono inclusi sia i partecipanti di sesso femminile che quelli di sesso maschile.

1. Un campione di sangue, uno di saliva e uno di feci prima della degenza CONCORDIA, oltre alla raccolta dati carta-matita una volta alla volta (da -2 a 3 mesi prima della degenza - T Zero, BDC)
2. Tre campioni di sangue e di saliva (mese 1, mesi 4 e 9, corrispondenti a T0, T4 e T9) durante il soggiorno CONCORDIA, nonché prelievo mensile di campioni di feci (mesi 1 a 9, T1 a T9), più dati del questionario (dati carta-matita e/o online).
3. Un campione di sangue, un campione di saliva e uno di feci dopo la degenza CONCORDIA, oltre alla raccolta dati carta-matita una sola volta (da 3 a 6 mesi dopo la degenza - T12)

Campionamento della saliva: verrà utilizzato un kit standard per il campionamento della saliva (Oragene-DNA - OG-500, DNA Genotec, Ottawa, ON, Canada) (vedi Figura 2).

Campionamento delle feci: verrà utilizzato un kit standard per il campionamento delle feci (Sarstedt) (vedi Figura 3) per recuperare 3 piccoli campioni da ogni feci e conservati in contenitori separati.

Feces Catcher: aiuto per la raccolta delle feci su carta (con istruzioni stampate in un linguaggio variabile (FecesCatcher®) (Figura 4)

Prelievo di sangue: la raccolta del sangue verrà eseguita in due provette eparinizzate da 5 ml (totale 10 ml per la raccolta delle cellule) e una provetta essiccata da 5 ml per prelievo di sangue. Sarà inoltre fornito un numero adeguato di provette di separazione e criotubi per il trattamento del sangue.

SCHEMA DELLA PROCEDURA

Prelievo saliva: può essere effettuato in qualsiasi momento prima del soggiorno CONCORDIA, più semplice durante la riunione dell'equipaggio prima della partenza. Il campionamento della saliva verrà ripetuto al mese 4 e 9 e dopo il soggiorno CONCORDIA. I campioni di saliva non necessitano di alcuna pre-elaborazione e possono essere conservati a temperatura ambiente per il tempo rimanente.

Durante l'incontro pre-partenza, dovrebbe essere fatto un colloquio di 1 ora relativo alle abitudini nutrizionali (compresi i sintomi gastrointestinali come i movimenti intestinali). Verranno raccolte anche prove carta-matita (1 ora). Ciò includerà il Food Frequency Questionnaire (FFQ), la scala di valutazione dei sintomi gastrointestinali (GSRS) e un questionario strutturato relativo a malattie pregresse, assunzione di farmaci e trattamenti medici. Il FFQ e il GSRS saranno valutati in Concordia nello stesso momento in cui viene eseguito il prelievo di sangue.

Campionamento delle feci e breve valutazione del benessere: il campionamento (tre aliquote, della dimensione di un pisello, in contenitori separati) può essere effettuato a discrezione di ciascun membro dell'equipaggio CONCORDIA partecipante una volta al mese, ma preferibilmente ogni volta all'incirca nello stesso giorno del mese. Non è necessario un campionamento coordinato tra i membri dell'equipaggio, ma il giorno deve essere annotato sui kit/diario di campionamento. Ciò dovrebbe essere supervisionato e documentato dall'ESA MD. Insieme al campionamento delle feci, ai partecipanti verrà chiesto di valutare su una scala analogica visiva l'umore, lo stress e l'integrità sociale. Inoltre, l'ESA MD fornirà le informazioni per ogni partecipante. Questa misura è necessaria come risultato per l'RCT.

Registri alimentari: Il MD dell'ESA è invitato a scattare regolarmente foto di pasti/alimenti/condizioni alimentari, se possibile. Soprattutto, il medico dovrebbe scattare foto standardizzate dei pasti (degli ultimi tre giorni prima e dei giorni del campionamento delle feci. La fotocamera e i dispositivi di memorizzazione sono stati consegnati all'MD di Aosta, Italia.

In alternativa e/o in aggiunta il cuoco registrerà le sue attività culinarie.

T - 3 giorni prima del prelievo delle feci:

ESA MD scatta foto (con una moneta da 2 euro di riferimento) della colazione, del pranzo e della cena

T - 2 giorni prima del prelievo delle feci:

ESA MD scatta foto (con una moneta da 2 euro di riferimento) della colazione, del pranzo e della cena

T - 1 giorni prima del prelievo delle feci:

ESA MD scatta foto (con una moneta da 2 euro di riferimento) della colazione, del pranzo e della cena

Giorni di campionamento delle feci:

ESA MD scatta foto (con una moneta da 2 euro di riferimento) della colazione, del pranzo e della cena

Non è necessaria la pre-elaborazione dei campioni di feci, i campioni vengono conservati a -50°C.

Prelievo di sangue: Il prelievo di sangue per i test immunitari deve essere effettuato con un unico prelievo, e può essere effettuato in occasione dei controlli sanitari programmati del personale della CONCORDIA. La raccolta del sangue deve essere eseguita in due provette eparinizzate da 5 ml (totale 10 ml per la raccolta delle cellule) e una provetta essiccata da 5 ml per il siero.

Pre-trattamento del campione di sangue (a cura del medico sperimentatore dell'ESA)

Per le funzioni immunitarie affini, le cellule vive sono necessarie e devono essere congelate e conservate in condizioni di conservazione in modo che possano essere rianimate in seguito. Ciò significa lavorazione rapida dopo la raccolta (entro 4-6 ore), congelamento rapido e in mezzo di conservazione (con DMSO) al di sotto di -40°C.

Conservazione delle cellule del sangue: le provette per la preparazione delle cellule Vacutainer® CPT™ con eparina sodica vengono fornite per semplificare la preparazione delle cellule (Figura 5, a sinistra). Le provette CPT™ contengono direttamente ficoll (tampone di densità) e un gel pronto per la centrifugazione. Il sangue viene raccolto sulla parte superiore del gel come le normali provette vacutainer. La centrifugazione separerà i globuli rossi, i granulociti (che vanno al di sotto del gel) dalle cellule mononucleate e il plasma che rimane in alto. Le cellule mononucleate devono essere lavate in tampone sterile Hanks (fornito) e il pellet risospeso in tampone di congelamento (fornito) e congelato direttamente almeno al di sotto di 40°C.