En motåtgärd för effekterna av immun- och mikrobiomförändringar i miljöer med begränsad antigenmångfald (ICELAND-TWO) (ICELAND-2)

EXPERIMENT KONCEPT

Detta är en dubbelbindande, kontrollerad pilotstudie där frivilliga kommer att få ett nytt näringstillskottspulver (påse innehållande 1011 CFU Bifidobacterium longum 1714 (Alimentary 11 Health, Cork, Ireland) eller placebo) en gång varje dag, som ska tas på morgonen med frukost hela året. Interventionen startar för varje deltagare vid ankomst (individuell start). Med hjälp av denna studiedesign kan fördelarna med probiotika på höjdanpassning också studeras.

Det experimentella konceptet är baserat på insamling av bioprover (saliv, blod, avföring) och endast vissa pappers-penna- och dokumentärdata. Därmed är projektets inblandning i CONCORDIA-besättningens dagliga aktiviteter minimal. Både kvinnliga och manliga deltagare ingår.

1. Ett blod-, ett saliv- och ett avföringsprov före CONCORDIA-vistelsen, förutom insamling av pappers-pennadata en gång samtidigt (-2 till 3 månader före vistelsen - T Zero, BDC)
2. Tre blod- samt ett salivprov (månad 1, månad 4 och 9, motsvarande T0, T4 och T9) under CONCORDIA-vistelsen, samt månatlig insamling av avföringsprov (månad 1 till 9, T1 till T9), plus frågeformulärdata (papper-pennadata och/eller online).
3. Ett blod-, ett saliv- och ett avföringsprov efter CONCORDIA-vistelsen, förutom pappers-penna-datainsamling en gång samtidigt (3 till 6 månader efter vistelsen - T12)

Salivprovtagning: en standardsats för salivprovtagning (Oragene-DNA - OG-500, DNA Genotec, Ottawa, ON, Kanada) kommer att användas (se figur 2).

Provtagning av avföring: ett standardprovtagningskit (Sarstedt) kommer att användas (se figur 3) för att hämta 3 små prover från varje avföring och förvaras i separata behållare.

Feces Catcher: Pappersbaserat avföringshjälpmedel (med instruktion tryckt på variabelt språk (FecesCatcher®) (Figur 4)

Blodprovtagning: Blodtagning kommer att utföras i två 5 ml hepariniserade rör (totalt 10 ml för cellinsamling) och ett torkat rör på 5 ml per blodprov. Ett tillräckligt antal separationsrör och kryorör för behandling av blod kommer också att tillhandahållas.

PROCEDURSKISS

Salivprovtagning: kan göras när som helst före CONCORDIA-vistelsen, enklast under besättningsmötet före avgång. Salivprovtagning kommer att upprepas vid månad 4 och 9 samt efter CONCORDIA-vistelse. Salivprover behöver ingen förbearbetning och kan förvaras i rumstemperatur under den återstående tiden.

Under mötet före avresan bör en 1-timmes intervju relaterad till näringsvanor (inklusive gastrointestinala symtom som tarmrörelser) göras. Papper-blyertsprov (1 timme) kommer också att samlas in. Detta kommer att inkludera Food Frequency Questionnaire (FFQ), den gastrointestinala symptombedömningsskalan (GSRS) och ett strukturerat frågeformulär relaterat till tidigare sjukdomar, läkemedelsintag och medicinska behandlingar. FFQ och GSRS kommer att bedömas i Concordia samtidigt som blodprovstagningen görs.

Provtagning av avföring och kort välbefinnandebedömning: Provtagning (tre alikvoter, i ärtstorlek, i separata behållare) kan göras efter eget gottfinnande av varje deltagande CONCORDIA-besättningsmedlem en gång i månaden, men helst på ungefär samma dag i månaden varje gång. Ingen samordnad provtagning mellan besättningsmedlemmar behövs, men dagen bör noteras i provtagningssatserna/dagboken. Detta bör övervakas och dokumenteras av ESA:s VD. Tillsammans med avföringsprovtagningen kommer deltagarna att bli ombedda att bedöma humör, stress och social integritet på en visuell analog skala. Dessutom kommer ESA:s VD att tillhandahålla informationen för varje deltagare. Denna åtgärd behövs som resultat för RCT.

Matjournaler: ESA MD uppmanas att ta bilder av måltider/mat/mat tillstånd regelbundet om möjligt. Det viktigaste är att läkaren ska ta standardiserade bilder av måltiderna (av de senaste tre dagarna före och dagarna för avföringsprovtagningen. Kameran och lagringsenheterna har delats ut till MD i Aosta, Italien.

Alternativt och/eller dessutom kommer kocken att registrera sina matlagningsaktiviteter.

T - 3 dagar före avföringsprovtagning:

ESA MD tar foto (med ett referensmynt på 2 euro) av frukostmåltid, lunchmåltid och middagsmåltid

T - 2 dagar före avföringsprovtagning:

ESA MD tar foto (med ett referensmynt på 2 euro) av frukostmåltid, lunchmåltid och middagsmåltid

T - 1 dygn före avföringsprovtagning:

ESA MD tar foto (med ett referensmynt på 2 euro) av frukostmåltid, lunchmåltid och middagsmåltid

Dagar av avföringsprovtagning:

ESA MD tar foto (med ett referensmynt på 2 euro) av frukostmåltid, lunchmåltid och middagsmåltid

Förbehandling av avföringsprover behövs inte, prover förvaras vid -50°C.

Blodprovtagning: Blodborttagning för immuntestning måste utföras av en enda flebotomi och kan utföras vid tidpunkten för programmerade hälsokontroller av CONCORDIAs personal. Bloduppsamling måste utföras i två 5 ml hepariniserade rör (totalt 10 ml för celluppsamling), och ett torkat rör på 5 ml för serum.

Förbehandling av blodprovet (som ska utföras av ESA-utredarens läkare)

För besläktade immunfunktioner behövs levande celler och måste frysas och förvaras under bevarande förhållanden så att de kan återupplivas efter det. Detta innebär snabb bearbetning efter uppsamling (inom 4-6 timmar), snabb frysning och i konserveringsmedium (med DMSO) under -40°C.

Förvaring av blodceller: Vacutainer® CPT™ cellberedningsrör med natriumheparin tillhandahålls för att förenkla cellberedning (Figur 5, vänster). CPT™-rör innehåller direkt ficoll (densitetsbuffert) och en gel redo för centrifugering. Blodet samlas på toppen av gelén som vanliga vacutainerrör. Centrifugering kommer att separera röda blodkroppar, granulocyter (som går under gelén) från mononukleära celler och plasma som stannar på toppen. Mononukleära celler behöver tvättas i steril Hanks-buffert (medföljer) och pelleten återsuspenderas i frysbuffert (medföljer) och direktfryst vid minst 40°C.