Uma contramedida para os efeitos das alterações imunológicas e do microbioma em ambientes com diversidade limitada de antígenos (ICELAND-TWO) (ICELAND-2)

EXPERIMENTO CONCEITO

Este é um estudo piloto controlado e duplo em que os voluntários receberão um novo suplemento nutricional em pó (sachê, contendo 1011 CFU Bifidobacterium longum 1714 (Alimentary 11 Health, Cork, Irlanda) ou placebo) uma vez por dia, para ser tomado pela manhã com café da manhã durante todo o ano. A intervenção começa para cada participante na chegada (início individual). Usando este desenho de estudo, os benefícios do probiótico na adaptação à altura também podem ser estudados.

O conceito experimental baseia-se na recolha de bioamostras (saliva, sangue, fezes) e apenas alguns dados documentais e papel-lápis. Assim, a interferência do projeto nas atividades diárias da tripulação do CONCORDIA é mínima. Ambos, participantes do sexo feminino e masculino estão incluídos.

1. Uma amostra de sangue, uma de saliva e uma de fezes antes da internação no CONCORDIA, além da coleta de dados com papel-lápis uma vez ao mesmo tempo (-2 a 3 meses anteriores à internação - T Zero, BDC)
2. Três amostras de sangue e uma de saliva (mês 1, meses 4 e 9, correspondentes a T0, T4 e T9) durante a estadia no CONCORDIA, bem como coleta mensal de amostras de fezes (meses 1 a 9, T1 a T9), mais dados do questionário (dados de papel-lápis e/ou online).
3. Uma amostra de sangue, uma de saliva e uma de fezes após a internação CONCORDIA, além da coleta de dados com papel-lápis uma vez ao mesmo tempo (3 a 6 meses após a internação - T12)

Amostragem de saliva: será utilizado um kit de amostragem de saliva padrão (Oragene-DNA - OG-500, DNA Genotec, Ottawa, ON, Canadá) (ver Figura 2).

Amostragem de fezes: um kit de amostragem de fezes padrão (Sarstedt) será usado (ver Figura 3) para coletar 3 pequenas amostras de cada fezes e armazenadas em recipientes separados.

Feces Catcher: Auxiliar de coleta de fezes em papel (com instruções impressas em linguagem variável (FecesCatcher®) (Figura 4)

Coleta de sangue: A coleta de sangue será realizada em dois tubos heparinizados de 5 ml (total 10 ml para coleta de células) e um tubo seco de 5 ml por amostra de sangue. Também será fornecido um número adequado de tubos de separação e criotubos para processamento de sangue.

ESBOÇO DO PROCEDIMENTO

Amostragem de saliva: pode ser feita a qualquer momento antes da estadia no CONCORDIA, mais facilmente durante a reunião da tripulação antes da partida. A amostragem de saliva será repetida no mês 4 e 9, bem como após a permanência no CONCORDIA. As amostras de saliva não precisam de nenhum pré-processamento e podem ser armazenadas em temperatura ambiente pelo tempo restante.

Durante a reunião antes da partida, deve ser feita uma entrevista de 1 hora relacionada aos hábitos nutricionais (incluindo sintomas gastrointestinais, como evacuações). Testes de papel-lápis (1 hora) também serão coletados. Isso incluirá o Questionário de Frequência Alimentar (FFQ), a escala de classificação de sintomas gastrointestinais (GSRS) e um questionário estruturado relacionado a doenças anteriores, ingestão de medicamentos e tratamentos médicos. O QFA e o GSRS serão avaliados em Concórdia no mesmo horário da coleta de sangue.

Amostragem de fezes e avaliação curta de bem-estar: A amostragem (três alíquotas, tamanho de ervilha, em recipientes separados) pode ser feita a critério de cada membro da equipe CONCORDIA participante uma vez por mês, mas preferencialmente aproximadamente no mesmo dia dos meses de cada vez. Nenhuma amostragem coordenada entre os membros da tripulação é necessária, mas o dia deve ser anotado nos kits/diário de amostragem. Isso deve ser supervisionado e documentado pelo MD da ESA. Juntamente com a amostragem de fezes, os participantes serão solicitados a avaliar humor, estresse e integridade social em uma escala visual analógica. Além disso, o ESA MD fornecerá as informações para cada participante. Esta medida é necessária como resultado para o RCT.

Registros alimentares: O ESA MD é solicitado a tirar fotos de refeições/alimentos/condição dos alimentos regularmente, se possível. Mais importante ainda, o MD deve tirar fotos padronizadas das refeições (dos últimos três dias antes e dos dias da amostragem de fezes. A câmera e os dispositivos de armazenamento foram entregues ao MD em Aosta, Itália.

Alternativamente e/ou além disso, o cozinheiro registrará suas atividades culinárias.

T - 3 dias antes da coleta de fezes:

ESA MD tira fotografia (com referência a uma moeda de 2 euros) do pequeno-almoço, almoço e jantar

T - 2 dias antes da coleta de fezes:

ESA MD tira fotografia (com referência a uma moeda de 2 euros) do pequeno-almoço, almoço e jantar

T - 1 dias antes da coleta de fezes:

ESA MD tira fotografia (com referência a uma moeda de 2 euros) do pequeno-almoço, almoço e jantar

Dias de amostragem de fezes:

ESA MD tira fotografia (com referência a uma moeda de 2 euros) do pequeno-almoço, almoço e jantar

O pré-processamento das amostras de fezes não é necessário, as amostras são armazenadas a -50°C.

Coleta de sangue: A coleta de sangue para testes imunológicos deve ser realizada por uma única flebotomia, podendo ser realizada no momento dos exames de saúde programados da equipe do CONCORDIA. A coleta de sangue deve ser realizada em dois tubos heparinizados de 5 ml (total 10 ml para coleta de células) e um tubo seco de 5 ml para soro.

Pré-processamento da Amostra de Sangue (a ser realizado pelo médico investigador da ESA)

Para funções imunes cognatas, células vivas são necessárias e devem ser congeladas e armazenadas em condições de preservação para que possam ser ressuscitadas depois disso. Isso significa processamento rápido após a coleta (dentro de 4-6 horas), congelamento rápido e meio de preservação (com DMSO) abaixo de -40°C.

Armazenamento de células sanguíneas: Os tubos de preparação de células Vacutainer® CPT™ com heparina sódica são fornecidos para simplificar a preparação de células (Figura 5, à esquerda). Os tubos CPT™ contêm diretamente ficoll (tampão de densidade) e um gel pronto para centrifugação. O sangue é coletado no topo do gel como tubos vacutainer usuais. A centrifugação separará os glóbulos vermelhos, os granulócitos (que vão abaixo do gel) das células mononucleares e o plasma que fica no topo. Células mononucleares precisam ser lavadas em tampão Hanks estéril (fornecido) e o pellet ressuspenso em tampão de congelamento (fornecido) e congelado diretamente pelo menos abaixo de 40°C.