Przeciwdziałanie skutkom zmian odporności i mikrobiomu w środowiskach o ograniczonej różnorodności antygenów (ISLANDIA-TWO) (ICELAND-2)

KONCEPCJA EKSPERYMENTU

Jest to kontrolowane badanie pilotażowe z podwójnym wiązaniem, w którym ochotnicy będą otrzymywać nowy suplement diety w proszku (saszetka zawierająca 1011 CFU Bifidobacterium longum 1714 (Alimentary 11 Health, Cork, Irlandia) lub placebo) raz dziennie, przyjmowany rano ze śniadaniem przez cały rok. Interwencja rozpoczyna się dla każdego uczestnika w dniu przyjazdu (start indywidualny). Korzystając z tego projektu badania, można również zbadać korzyści probiotyku w zakresie dostosowania wzrostu.

Koncepcja eksperymentalna opiera się na pobraniu biopróbek (śliny, krwi, kału) oraz jedynie niektórych danych papierowo-ołówkowych i dokumentacyjnych. Tym samym ingerencja projektu w codzienną pracę załogi CONCORDIA jest minimalna. Uwzględnia się zarówno uczestników płci żeńskiej, jak i męskiej.

1. Jedna próbka krwi, jedna próbka śliny i jedna próbka kału przed pobytem w CONCORDIA, oprócz jednorazowego pobrania danych papier-ołówek (-2 do 3 miesięcy przed pobytem - T Zero, BDC)
2. Trzy próbki krwi i śliny (miesiąc 1, miesiąc 4 i 9, odpowiadające T0, T4 i T9) podczas pobytu w CONCORDIA oraz comiesięczne pobieranie próbek kału (miesiące 1 do 9, T1 do T9), plus dane z kwestionariusza (dane papierowe i/lub online).
3. Jedna próbka krwi, jedna próbka śliny i jedna próbka kału po pobycie w CONCORDIA, oprócz jednorazowego pobrania danych papier-ołówek (3 do 6 miesięcy po pobycie - T12)

Pobieranie próbek śliny: zostanie użyty standardowy zestaw do pobierania próbek śliny (Oragene-DNA - OG-500, DNA Genotec, Ottawa, ON, Kanada) (patrz ryc. 2).

Pobieranie próbek stolca: zostanie użyty standardowy zestaw do pobierania próbek kału (Sarstedt) (patrz Ryc. 3) do pobrania 3 małych próbek z każdego stolca, które będą przechowywane w oddzielnych pojemnikach.

Łapacz kału: Papierowy pomocnik do zbierania kału (z nadrukowaną instrukcją w różnych językach (FecesCatcher®) (Rysunek 4)

Pobieranie krwi: Pobieranie krwi zostanie przeprowadzone w dwóch heparynizowanych probówkach o pojemności 5 ml (łącznie 10 ml na pobranie komórek) i jednej suszonej probówce o pojemności 5 ml na próbkę krwi. Zostanie również zapewniona odpowiednia liczba probówek separacyjnych i krioprobówek do przetwarzania krwi.

ZARYS PROCEDURY

Pobranie śliny: można wykonać w dowolnym momencie przed pobytem w CONCORDII, najłatwiej podczas przedodlotowego zebrania załogi. Pobieranie śliny zostanie powtórzone w 4 i 9 miesiącu, a także po pobycie w CONCORDIA. Próbki śliny nie wymagają wstępnej obróbki i mogą być przechowywane w temperaturze pokojowej przez pozostały czas.

Podczas spotkania przed wyjazdem należy przeprowadzić 1-godzinny wywiad dotyczący nawyków żywieniowych (w tym objawów żołądkowo-jelitowych, takich jak wypróżnienia). Zostaną również zebrane testy papier-ołówek (1 godzina). Obejmuje to Kwestionariusz Częstotliwości Żywności (FFQ), skalę oceny objawów żołądkowo-jelitowych (GSRS) oraz ustrukturyzowany kwestionariusz dotyczący wcześniejszych chorób, przyjmowania leków i leczenia. FFQ i GSRS zostaną ocenione w Concordia w tym samym czasie, w którym pobierane jest pobieranie krwi.

Pobieranie próbek stolca i krótka ocena dobrostanu: Pobieranie próbek (trzy porcje wielkości ziarnka grochu w oddzielnych pojemnikach) można pobierać według uznania każdego uczestniczącego członka załogi CONCORDIA raz w miesiącu, ale najlepiej za każdym razem mniej więcej tego samego dnia miesiąca. Nie jest wymagane skoordynowane pobieranie próbek przez członków załogi, ale dzień należy odnotować w zestawach do pobierania próbek/dzienniku. Powinno to być nadzorowane i dokumentowane przez MD ESA. Wraz z pobieraniem kału uczestnicy zostaną poproszeni o ocenę nastroju, stresu i integralności społecznej na wizualnej skali analogowej. Dodatkowo, ESA MD udzieli informacji każdemu uczestnikowi. Ten środek jest potrzebny jako wynik RCT.

Dokumentacja żywności: Lekarz medycyny ESA jest proszony o regularne robienie zdjęć posiłków/żywności/stanu żywności, jeśli to możliwe. Co najważniejsze, lekarz powinien wykonać standardowe zdjęcia posiłków (z ostatnich trzech dni poprzedzających iz dni, w których pobrano próbkę kału). Aparat i urządzenia do przechowywania zostały przekazane lekarzowi medycyny w Aoście we Włoszech.

Alternatywnie i/lub dodatkowo kucharz będzie rejestrował swoje czynności związane z gotowaniem.

T - 3 dni przed pobraniem kału:

ESA MD robi zdjęcie (z monetą referencyjną 2 euro) śniadania, obiadu i kolacji

T - 2 dni przed pobraniem kału:

ESA MD robi zdjęcie (z monetą referencyjną 2 euro) śniadania, obiadu i kolacji

T - 1 dzień przed pobraniem kału:

ESA MD robi zdjęcie (z monetą referencyjną 2 euro) śniadania, obiadu i kolacji

Dni pobrania kału:

ESA MD robi zdjęcie (z monetą referencyjną 2 euro) śniadania, obiadu i kolacji

Nie jest wymagana wstępna obróbka próbek kału, próbki są przechowywane w temperaturze -50°C.

Pobieranie krwi: Pobieranie krwi do testów immunologicznych musi być wykonywane przez pojedyncze upuszczenie krwi i może być wykonywane w czasie zaprogramowanych kontroli stanu zdrowia personelu CONCORDIA. Pobieranie krwi należy przeprowadzić w dwóch heparynizowanych probówkach o pojemności 5 ml (łącznie 10 ml na pobranie komórek) i jednej wysuszonej probówce o pojemności 5 ml na surowicę.

Wstępne przetwarzanie próbki krwi (do wykonania przez lekarza prowadzącego badanie ESA)

Do pokrewnych funkcji odpornościowych potrzebne są żywe komórki, które należy zamrozić i przechowywać w odpowiednich warunkach, aby można je było później reanimować. Oznacza to szybką obróbkę po pobraniu (w ciągu 4-6 godzin), szybkie zamrożenie iw środku konserwującym (z DMSO) poniżej -40°C.

Przechowywanie krwinek: Probówki Vacutainer® CPT™ Cell Preparation z heparyną sodową są dostarczane w celu uproszczenia przygotowania komórek (Rysunek 5, po lewej). Probówki CPT™ bezpośrednio zawierają ficoll (bufor gęstości) i żel gotowy do wirowania. Krew zbiera się na wierzchu żelu, jak zwykłe probówki vacutainer. Wirowanie oddzieli krwinki czerwone, granulocyty (schodzące pod żelem) od komórek jednojądrzastych i pozostanie na wierzchu osocze. Komórki jednojądrzaste należy przemyć w sterylnym buforze Hanksa (w zestawie), a osad ponownie zawiesić w buforze do zamrażania (w zestawie) i bezpośrednio zamrozić w temperaturze co najmniej poniżej 40°C.