Protiopatření pro účinky změn imunity a mikrobiomu v prostředí s omezenou rozmanitostí antigenu (ISLAND-TWO) (ICELAND-2)

KONCEPCE EXPERIMENTU

Jedná se o dvojitě vázanou, kontrolovanou pilotní studii, kde dobrovolníci dostanou nový doplněk výživy v prášku (sáček obsahující 1011 CFU Bifidobacterium longum 1714 (Alimentary 11 Health, Cork, Irsko) jednou denně, který se bude užívat ráno. se snídaní po celý rok. Zásah začíná pro každého účastníka při příjezdu (individuální start). Pomocí tohoto designu studie lze také studovat přínosy probiotik na adaptaci na výšku.

Experimentální koncept je založen pouze na odběru biovzorků (slin, krve, stolice) a některých papírových a dokumentačních dat. Zasahování projektu do každodenních činností posádky CONCORDIA je tak minimální. Zahrnuty jsou jak ženy, tak muži.

1. Jeden vzorek krve, jeden slin a jeden vzorek stolice před pobytem CONCORDIA, kromě sběru dat papír-tužka jednou ve stejnou dobu (-2 až 3 měsíce před pobytem - T Zero, BDC)
2. Tři odběry krve a slin (1. měsíc, 4. a 9. měsíc, odpovídající T0, T4 a T9) během pobytu CONCORDIA, dále měsíční odběr vzorků stolice (1. až 9. měsíc, T1 až T9), plus údaje z dotazníku (údaje z papírové tužky a/nebo online).
3. Jeden vzorek krve, jeden slin a jeden vzorek stolice po pobytu CONCORDIA, kromě sběru dat papír-tužka jedenkrát současně (3 až 6 měsíců po pobytu - T12)

Odběr vzorků slin: bude použita standardní souprava pro odběr slin (Oragene-DNA - OG-500, DNA Genotec, Ottawa, ON, Kanada) (viz obrázek 2).

Odběr vzorků stolice: standardní souprava pro odběr vzorků stolice (Sarstedt) se použije (viz obrázek 3) k odebrání 3 malých vzorků z každé stolice a uloží se do oddělených nádob.

Feces Catcher: Pomůcka pro sběr stolice na bázi papíru (s instrukcemi vytištěnými ve variabilním jazyce (FecesCatcher®) (obrázek 4)

Odběr krve: Odběr krve bude proveden do dvou 5 ml heparinizovaných zkumavek (celkem 10 ml pro odběr buněk) a jedné vysušené 5 ml zkumavky na odběr krve. Rovněž bude poskytnut odpovídající počet separačních zkumavek a kryozkumavek pro zpracování krve.

PŘEHLED POSTUPU

Odběr slin: lze provést kdykoli před pobytem CONCORDIA, nejsnáze během porady posádky před odletem. Odběr slin bude opakován ve 4. a 9. měsíci a také po pobytu CONCORDIA. Vzorky slin nevyžadují žádné předběžné zpracování a mohou být po zbývající dobu skladovány při pokojové teplotě.

Během schůzky před odjezdem by měl být proveden 1-hodinový rozhovor týkající se výživových návyků (včetně gastrointestinálních příznaků, jako jsou pohyby střev). Budou se sbírat i testy papír-tužka (1 hodina). To bude zahrnovat Food Frequency Questionnaire (FFQ), stupnici hodnocení gastrointestinálních symptomů (GSRS) a strukturovaný dotazník týkající se předchozích onemocnění, příjmu léků a léčebných postupů. FFQ a GSRS budou hodnoceny v Concordia ve stejnou dobu jako odběr krve.

Odběr vzorků stolice a krátké vyhodnocení zdravotního stavu: Odběr vzorků (tři alikvoty o velikosti hrášku, v samostatných nádobách) lze provádět podle uvážení každého zúčastněného člena posádky CONCORDIA jednou za měsíc, ale přednostně pokaždé přibližně ve stejný den v měsíci. Není potřeba žádný koordinovaný odběr vzorků mezi členy posádky, ale den by měl být zaznamenán v soupravách pro odběr vzorků/deníku. To by mělo být pod dohledem a dokumentováno MD ESA. Spolu s odběrem vzorků stolice budou účastníci požádáni, aby na vizuální analogové škále ohodnotili náladu, stres a sociální integritu. Kromě toho ESA MD poskytne informace pro každého účastníka. Toto opatření je potřebné jako výsledek pro RCT.

Záznamy o jídle: MD ESA je požádáno, aby pokud možno pravidelně pořizoval snímky jídel/jídel/potravin. A co je nejdůležitější, lékař by měl pořizovat standardizované fotografie jídel (za poslední tři dny před odběrem a dny odběru vzorků stolice). Fotoaparát a úložná zařízení byly předány MD v italské Aostě.

Případně a/nebo navíc bude kuchař zaznamenávat své kuchařské aktivity.

T - 3 dny před odběrem vzorků stolice:

ESA MD vyfotografuje (s referenční 2 eurovou mincí) snídani, oběd a večeři

T - 2 dny před odběrem vzorků stolice:

ESA MD vyfotografuje (s referenční 2 eurovou mincí) snídani, oběd a večeři

T - 1 den před odběrem vzorků stolice:

ESA MD vyfotografuje (s referenční 2 eurovou mincí) snídani, oběd a večeři

Dny odběru vzorků stolice:

ESA MD vyfotografuje (s referenční 2 eurovou mincí) snídani, oběd a večeři

Předzpracování vzorků stolice není nutné, vzorky se skladují při -50°C.

Odběr krve: Odběr krve pro testování imunity musí být proveden jednou flebotomií a může být proveden v době naprogramovaných zdravotních kontrol pracovníky CONCORDIA. Odběr krve musí být proveden do dvou 5 ml heparinizovaných zkumavek (celkem 10 ml pro odběr buněk) a jedné vysušené 5 ml zkumavky pro sérum.

Předzpracování vzorku krve (provede vyšetřující lékař ESA)

Pro příbuznou imunitní funkci jsou potřebné živé buňky a musí být zmraženy a skladovány v konzervačních podmínkách, aby mohly být poté resuscitovány. To znamená rychlé zpracování po odběru (do 4-6 hodin), rychlé zmrazení a v konzervačním médiu (s DMSO) pod -40°C.

Skladování krevních buněk: Zkumavky pro přípravu buněk Vacutainer® CPT™ s heparinem sodným jsou dodávány pro zjednodušení přípravy buněk (obrázek 5, vlevo). Zkumavky CPT™ přímo obsahují ficoll (hustotní pufr) a gel připravený k centrifugaci. Krev se odebírá na vršku gelu jako obvyklé zkumavky pro vakuum. Centrifugace oddělí červené krvinky, granulocyty (jdoucí pod gel) od mononukleárních buněk a plazmy, která zůstane nahoře. Mononukleární buňky potřebují promytí ve sterilním Hanksově pufru (přiložen) a peletu resuspendovat v mrazicím pufru (přiložen) a přímo zmrazit alespoň pod 40 °C.