Een tegenmaatregel voor de effecten van immuun- en microbioomveranderingen in omgevingen met beperkte ANtigen-diversiteit (IJSLAND-TWO) (ICELAND-2)

EXPERIMENTENCONCEPT

Dit is een gecontroleerde pilotstudie met dubbele binding waarbij vrijwilligers eenmaal per dag een nieuw voedingssupplementpoeder (zakje met 1011 CFU Bifidobacterium longum 1714 (Alimentary 11 Health, Cork, Ierland) of placebo) krijgen, in te nemen in de ochtend met ontbijthet hele jaar door. De interventie start voor elke deelnemer bij aankomst (individuele start). Met behulp van deze onderzoeksopzet kunnen ook de voordelen van het probioticum op hoogteaanpassing worden bestudeerd.

Het experimentele concept is alleen gebaseerd op het verzamelen van biosamples (speeksel, bloed, ontlasting) en enkele papier-potlood- en documentairegegevens. Daardoor is de interferentie van het project met de dagelijkse activiteiten van de CONCORDIA-crew minimaal. Zowel vrouwelijke als mannelijke deelnemers zijn inbegrepen.

1. Eén bloed-, één speeksel- en één ontlastingsmonster voorafgaand aan het CONCORDIA-verblijf, naast een eenmalige gegevensverzameling met papier-potlood (-2 tot 3 maanden voorafgaand aan het verblijf - T Zero, BDC)
2. Drie bloed- en speekselmonsters (maand 1, maand 4 en 9, overeenkomend met T0, T4 en T9) tijdens het CONCORDIA-verblijf, evenals maandelijkse afname van ontlastingsmonsters (maanden 1 tot 9, T1 tot T9), plus vragenlijstgegevens (papier-potloodgegevens en/of online).
3. Eén bloed-, één speeksel- en één ontlastingsmonster na het CONCORDIA-verblijf, naast een eenmalige gegevensverzameling met papier-potlood (3 tot 6 maanden na het verblijf - T12)

Speekselbemonstering: er wordt een standaard speekselbemonsteringsset (Oragene-DNA - OG-500, DNA Genotec, Ottawa, ON, Canada) gebruikt (zie afbeelding 2).

Ontlastingsbemonstering: er zal een standaard ontlastingsbemonsteringsset (Sarstedt) worden gebruikt (zie figuur 3) om 3 kleine monsters uit elke ontlasting te halen en in aparte containers te bewaren.

Feces Catcher: hulpmiddel voor het verzamelen van ontlasting op papierbasis (met instructies in variabele taal gedrukt (FecesCatcher®) (Afbeelding 4)

Bloedafname: De bloedafname wordt uitgevoerd in twee gehepariniseerde buisjes van 5 ml (totaal 10 ml voor celafname) en één gedroogde buis van 5 ml per bloedafname. Er wordt ook gezorgd voor een voldoende aantal scheidingsbuizen en cryobuisjes voor de verwerking van bloed.

PROCEDUREOVERZICHT

Speekselafname: kan op elk moment voorafgaand aan het CONCORDIA-verblijf worden gedaan, het gemakkelijkst tijdens de bemanningsvergadering vóór vertrek. Speekselafname wordt herhaald op maand 4 en 9, evenals na het CONCORDIA-verblijf. Speekselmonsters hebben geen voorbewerking nodig en kunnen de resterende tijd bij kamertemperatuur worden bewaard.

Tijdens het gesprek vóór vertrek moet een interview van 1 uur worden gehouden over voedingsgewoonten (inclusief gastro-intestinale symptomen zoals stoelgang). Papier-potloodtoetsen (1 uur) worden ook verzameld. Dit omvat de Food Frequency Questionnaire (FFQ), de gastro-intestinale symptoombeoordelingsschaal (GSRS) en een gestructureerde vragenlijst met betrekking tot eerdere ziekten, medicijngebruik en medische behandelingen. De FFQ en de GSRS worden in Concordia beoordeeld op dezelfde momenten als de bloedafname.

Ontlastingsbemonstering en korte welzijnsbeoordeling: Bemonstering (drie porties, ter grootte van een erwt, in afzonderlijke containers) kan naar goeddunken van elk deelnemend CONCORDIA-bemanningslid eenmaal per maand worden gedaan, maar bij voorkeur elke keer op ongeveer dezelfde dag van de maand. Er is geen gecoördineerde bemonstering tussen bemanningsleden nodig, maar de dag moet worden genoteerd op de bemonsteringskits/dagboek. Dit moet worden gecontroleerd en gedocumenteerd door de ESA MD. Samen met de ontlastingsbemonstering wordt de deelnemers gevraagd stemming, stress en sociale integriteit op een visueel analoge schaal te beoordelen. Bovendien zal de ESA MD de informatie voor elke deelnemer verstrekken. Deze maat is nodig als uitkomst voor de RCT.

Voedselregistratie: De ESA MD wordt gevraagd om indien mogelijk regelmatig foto's te maken van maaltijden/voedsel/voedseltoestand. Het belangrijkste is dat de arts gestandaardiseerde foto's moet maken van de maaltijden (van de laatste drie dagen voorafgaand aan de en de dagen van de ontlastingsafname. De camera en opslagapparaten zijn uitgedeeld aan de MD in Aosta, Italië.

Als alternatief en/of daarnaast legt de kok zijn kookactiviteiten vast.

T - 3 dagen voor ontlastingsafname:

ESA MD maakt foto (met referentiemunt van 2 euro) van ontbijtmaaltijd, lunchmaaltijd en dinermaaltijd

T - 2 dagen voor afname ontlasting:

ESA MD maakt foto (met referentiemunt van 2 euro) van ontbijtmaaltijd, lunchmaaltijd en dinermaaltijd

T - 1 dagen voor afname ontlasting:

ESA MD maakt foto (met referentiemunt van 2 euro) van ontbijtmaaltijd, lunchmaaltijd en dinermaaltijd

Dagen ontlastingsafname:

ESA MD maakt foto (met referentiemunt van 2 euro) van ontbijtmaaltijd, lunchmaaltijd en dinermaaltijd

Voorbewerking van ontlastingsmonsters is niet nodig, monsters worden bewaard bij -50°C.

Bloedafname: bloedafname voor immuuntesten moet worden uitgevoerd door middel van een enkele aderlaten en kan worden uitgevoerd op het moment van geprogrammeerde gezondheidscontroles door het CONCORDIA-personeel. Bloedafname moet worden uitgevoerd in twee gehepariniseerde buisjes van 5 ml (totaal 10 ml voor celafname) en één gedroogde buis van 5 ml voor serum.

Voorbewerking van het bloedmonster (uit te voeren door de ESA-onderzoeksarts)

Voor verwante immuunfuncties zijn levende cellen nodig en deze moeten worden ingevroren en bewaard onder bewarende omstandigheden, zodat ze daarna kunnen worden gereanimeerd. Dit betekent snelle verwerking na verzameling (binnen 4-6 uur), snel invriezen en in een bewaarmedium (met DMSO) onder -40°C.

Opslag van bloedcellen: Vacutainer® CPT™-buisjes voor celvoorbereiding met natriumheparine worden meegeleverd om celvoorbereiding te vereenvoudigen (Afbeelding 5, links). CPT™-buisjes bevatten direct ficoll (densiteitsbuffer) en een gel die klaar is voor centrifugeren. Het bloed wordt op de bovenkant van de gel verzameld zoals bij gebruikelijke vacutainerbuizen. Centrifugatie scheidt rode bloedcellen, granulocyten (die onder de gel gaan) van mononucleaire cellen en plasma blijft bovenop. Mononucleaire cellen moeten worden gewassen in steriele Hanks-buffer (meegeleverd) en de pellet moet opnieuw worden gesuspendeerd in vriesbuffer (meegeleverd) en direct worden ingevroren op ten minste minder dan 40°C.