抗抗原多样性有限的环境中免疫和微生物组变化影响的对策 (ICELAND-TWO) (ICELAND-2)

实验概念

这是一项双重对照试验性研究，志愿者将每天接受一次新型营养补充粉（小袋，内含 1011 CFU 长双歧杆菌 1714（Alimentary 11 Health，爱尔兰科克）或安慰剂），在早上服用全年含早餐。 干预在每个参与者到达时开始（个人开始）。 使用此研究设计，还可以研究益生菌对身高适应的益处。

实验概念仅基于生物样本（唾液、血液、粪便）和一些纸笔和文件数据的收集。 因此，该项目对 CONCORDIA 船员日常活动的干扰最小。 包括女性和男性参与者。

1. CONCORDIA 入住前的一份血液、一份唾液和一份粪便样本，此外还同时收集了一次纸笔数据（入住前 -2 至 3 个月 - T 零，BDC）
2. 在 CONCORDIA 逗留期间的三个血液和一个唾液样本（第 1 个月、第 4 个月和第 9 个月，对应于 T0、T4 和 T9），以及每月收集的粪便样本（第 1 至 9 个月，T1 至 T9），加上问卷数据（纸笔数据和/或在线）。
3. CONCORDIA 入住后一份血液、一份唾液和一份粪便样本，此外还同时收集一次纸笔数据（入住后 3 至 6 个月 - T12）

唾液采样：将使用标准唾液采样套件（Oragene-DNA - OG-500，DNA Genotec，加拿大安大略省渥太华）（见图 2）。

粪便采样：将使用标准粪便采样套件（Sarstedt）（见图 3）从每个粪便中取出 3 个小样本，并存放在单独的容器中。

Feces Catcher：纸质粪便收集辅助工具（带有以可变语言印制的说明 (FecesCatcher®)（图 4）

采血：采血​​将在两个 5 ml 肝素化试管（总共 10 ml 用于细胞收集）和一个 5 ml 干燥试管中进行，每次采血。 还将提供足够数量的用于血液处理的分离管和冷冻管。

程序大纲

唾液采样：可以在入住 CONCORDIA 之前的任何时间进行，最简单的做法是在出发前的船员会议期间进行。 唾液采样将在第 4 个月和第 9 个月以及在 CONCORDIA 停留后重复进行。 唾液样本不需要任何预处理，可以在室温下储存剩余时间。

在行前会议期间，应进行与营养习惯（包括排便等胃肠道症状）相关的 1 小时面谈。 纸笔测试（1 小时）也将被收集。 这将包括食物频率问卷 (FFQ)、胃肠道症状评定量表 (GSRS) 以及与既往疾病、药物摄入和药物治疗相关的结构化问卷。 FFQ 和 GSRS 将在进行血液采样的同时在 Concordia 进行评估。

粪便取样和短期健康评估：每个参与的 CONCORDIA 船员可自行决定每月一次取样（三个等分试样，豌豆大小，在单独的容器中），但最好每次大约在每月的同一天进行。 船员之间不需要协调取样，但应在取样工具包/日记上注明日期。 这应该由 ESA MD 监督和记录。 除了粪便取样，参与者还将被要求在视觉模拟量表上对情绪、压力和社会诚信进行评分。 此外，ESA MD 将为每个参与者提供信息。 该措施需要作为 RCT 的结果。

食物记录：如果可能，ESA MD 被要求定期拍摄膳食/食物/食物状况的照片。 最重要的是，MD 应该拍摄标准化的膳食照片（在大便取样前的最后三天和大便取样的日子）。 相机和存储设备已交给意大利奥斯塔的医学博士。

备选地和/或此外，厨师将记录他的烹饪活动。

T - 粪便取样前 3 天：

ESA MD 拍摄早餐、午餐和晚餐的照片（参考 2 欧元硬币）

T - 粪便取样前 2 天：

ESA MD 拍摄早餐、午餐和晚餐的照片（参考 2 欧元硬币）

T - 粪便取样前 1 天：

ESA MD 拍摄早餐、午餐和晚餐的照片（参考 2 欧元硬币）

粪便取样天数：

ESA MD 拍摄早餐、午餐和晚餐的照片（参考 2 欧元硬币）

不需要对粪便样本进行预处理，样本在-50°C 下保存。

血液采样：用于免疫检测的血液抽取必须通过单次静脉切开术进行，并且可以在 CONCORDIA 工作人员进行程序化健康检查时进行。 采血必须在两个 5 ml 肝素化试管（总共 10 ml 用于细胞收集）和一个 5 ml 干燥试管中用于血清。

血液样本的预处理（由 ESA 调查医师执行）

对于同源免疫功能，需要活细胞并且必须将其冷冻并储存在保存条件下，以便之后可以复苏。 这意味着收集后的快速处理（4-6 小时内）、快速冷冻和在 -40°C 以下的保存介质（含 DMSO）中。

血细胞储存：提供含肝素钠的 Vacutainer® CPT™ 细胞制备管以简化细胞制备（图 5，左）。 CPT™ 管直接包含 ficoll（密度缓冲液）和准备离心的凝胶。 血液像通常的真空采血管一样收集在凝胶的顶部。 离心会将红细胞、粒细胞（在凝胶下方）与单核细胞和留在顶部的血浆分开。 单核细胞需要在无菌 Hanks 缓冲液（已提供）中洗涤，然后将沉淀物重新悬浮在冷冻缓冲液（已提供）中并直接冷冻至少低于 40°C。