Et motmål for effektene av immun- og mikrobiomendringer i miljøer med begrenset antigenmangfold (ISLAND-TO) (ICELAND-2)

EKSPERIMENT KONSEPT

Dette er en dobbeltbinding, kontrollert pilotstudie der frivillige vil motta et nytt kosttilskuddspulver (pose, inneholdende 1011 CFU Bifidobacterium longum 1714 (Alimentary 11 Health, Cork, Ireland) eller placebo) en gang hver dag, som skal tas om morgenen med frokost hele året. Intervensjonen starter for hver deltaker ved ankomst (individuell start). Ved å bruke dette studiedesignet kan fordelene med probiotika på høydetilpasning også studeres.

Det eksperimentelle konseptet er kun basert på innsamling av bioprøver (spytt, blod, avføring) og enkelte papir-blyant- og dokumentardata. Derved er prosjektets innblanding i de daglige aktivitetene til CONCORDIA-mannskapet minimal. Både kvinnelige og mannlige deltakere er inkludert.

1. Én blod-, én spytt- og én avføringsprøve før CONCORDIA-oppholdet, i tillegg til innsamling av papir-blyant-data én gang på samme tid (-2 til 3 måneder før oppholdet – T Zero, BDC)
2. Tre blodprøver samt en spyttprøve (måned 1, måned 4 og 9, tilsvarende T0, T4 og T9) under CONCORDIA-oppholdet, samt månedlig innsamling av avføringsprøver (måned 1 til 9, T1 til T9), pluss spørreskjemadata (papir-blyantdata og/eller online).
3. Én blod-, én spytt- og én avføringsprøve etter CONCORDIA-oppholdet, i tillegg til innsamling av papir-blyant-data én gang på samme tid (3 til 6 måneder etter oppholdet - T12)

Spyttprøvetaking: et standard spyttprøvetakingssett (Oragene-DNA - OG-500, DNA Genotec, Ottawa, ON, Canada) vil bli brukt (se figur 2).

Avføringsprøvetaking: et standard avføringsprøvetakingssett (Sarstedt) vil bli brukt (se figur 3) for å hente 3 små prøver fra hver avføring, og lagres i separate beholdere.

Feces Catcher: Papirbasert avføringshjelp (med instruksjoner trykt på variabelt språk (FecesCatcher®) (Figur 4)

Blodprøvetaking: Blodprøvetaking vil bli utført i to 5 ml hepariniserte rør (totalt 10 ml for celleinnsamling) og ett tørket rør på 5 ml per blodprøve. Et tilstrekkelig antall separasjonsrør og kryorør for behandling av blod vil også bli gitt.

PROSEDYRE OVERSIGT

Spyttprøvetaking: kan gjøres når som helst før CONCORDIA-oppholdet, lettest under mannskapsmøtet før avgang. Spyttprøvetaking vil bli gjentatt i måned 4 og 9 samt etter CONCORDIA-opphold. Spyttprøver trenger ingen forbehandling og kan oppbevares i romtemperatur resten av tiden.

Under møtet før avreise bør det gjøres et 1-times intervju relatert til ernæringsvaner (inkludert gastrointestinale symptomer som avføring). Papir-blyantprøver (1 time) vil også bli samlet inn. Dette vil inkludere Food Frequency Questionnaire (FFQ), den gastrointestinale symptomvurderingsskalaen (GSRS) og et strukturert spørreskjema relatert til tidligere sykdommer, legemiddelinntak og medisinske behandlinger. FFQ og GSRS vil bli vurdert i Concordia samtidig som blodprøven utføres.

Avføringsprøvetaking og kort trivselsvurdering: Prøvetaking (tre alikvoter, ertestørrelse, i separate beholdere) kan gjøres etter eget skjønn av hvert deltakende CONCORDIA-besetningsmedlem en gang hver måned, men fortrinnsvis på omtrent samme dag i månedene hver gang. Ingen koordinert prøvetaking mellom besetningsmedlemmer er nødvendig, men dagen bør noteres på prøvetakingssettene/dagboken. Dette bør overvåkes og dokumenteres av ESA MD. Sammen med avføringsprøven vil deltakerne bli bedt om å vurdere stemning, stress og sosial integritet på en visuell analog skala. I tillegg vil ESA MD gi informasjonen for hver deltaker. Dette tiltaket er nødvendig som resultat for RCT.

Matregistrering: ESA MD blir bedt om å ta bilder av måltider/mat/mattilstand med jevne mellomrom hvis mulig. Viktigst av alt, bør legen ta standardiserte bilder av måltidene (av de siste tre dagene før og dagene av avføringsprøven. Kameraet og lagringsenhetene er delt ut til MD i Aosta, Italia.

Alternativt og/eller i tillegg vil kokken registrere sine matlagingsaktiviteter.

T - 3 dager før avføringsprøvetaking:

ESA MD tar bilde (med en referanse på 2 euro mynt) av frokostmåltid, lunsjmåltid og middagsmåltid

T - 2 dager før avføringsprøvetaking:

ESA MD tar bilde (med en referanse på 2 euro mynt) av frokostmåltid, lunsjmåltid og middagsmåltid

T - 1 dager før avføringsprøvetaking:

ESA MD tar bilde (med en referanse på 2 euro mynt) av frokostmåltid, lunsjmåltid og middagsmåltid

Dager med avføringsprøvetaking:

ESA MD tar bilde (med en referanse på 2 euro mynt) av frokostmåltid, lunsjmåltid og middagsmåltid

Forbehandling av avføringsprøver er ikke nødvendig, prøver oppbevares ved -50°C.

Blodprøvetaking: Bloduttak for immuntesting må utføres ved en enkelt flebotomi, og kan utføres på tidspunktet for programmerte helsesjekker av CONCORDIA-personalet. Blodprøvetaking må utføres i to 5 ml hepariniserte rør (totalt 10 ml for celleinnsamling), og ett tørket rør på 5 ml for serum.

Forbehandling av blodprøven (utføres av ESA-forskerlegen)

For beslektede immunfunksjoner er levende celler nødvendig og må fryses og lagres under bevarende forhold slik at de kan gjenopplives etter det. Dette betyr rask behandling etter innsamling (innen 4-6 timer), hurtigfrysing og i konserveringsmedium (med DMSO) under -40°C.

Oppbevaring av blodceller: Vacutainer® CPT™ celleforberedelsesrør med natriumheparin leveres for å forenkle celleforberedelse (Figur 5, venstre). CPT™-rør inneholder direkte ficoll (densitetsbuffer) og en gel klar for sentrifugering. Blodet samles på toppen av gelen som vanlige vacutainer-rør. Sentrifugering vil skille røde blodceller, granulocytter (som går under gelen) fra mononukleære celler og plasma som blir værende på toppen. Mononukleære celler trenger vask i steril Hanks-buffer (følger med) og pelleten resuspenderes i frysebuffer (følger med) og fryses direkte ved minst 40°C.