本態性血小板血症における動脈機能とアテローム性動脈硬化症

1. 患者および対照被験者

   患者は、2011 年から 2014 年の間に JAK2 V617F 陽性 ET と診断された、スロベニアのリュブリャナ大学医療センターの血液学科のデータベースから選択されます。 JAK2 陽性の ET 患者は 124 人で、そのうち 61 人は臨床的に明らかなアテローム性動脈硬化性血管疾患 (心筋梗塞、狭心症、末梢動脈疾患、大動脈疾患、一過性脳虚血発作、または虚血性脳卒中) の既往歴がありませんでした。 臨床的に明らかな心血管疾患のない JAK2 V617F 陽性 ET 患者 40 人 (男性 14 人、女性 26 人) がインフォームド コンセントに署名し、最初の検査のために 2014 年から 2015 年に研究に登録され、そのうち 36 人 (男性 12 人、女性 24 人) が期待されています。 2018-19年も参加予定。

   対照群は、リュブリャナ大学医療センターの健康な従業員とその親戚の中から選ばれました。 これは、年齢と性別の分布、および心血管疾患の古典的な危険因子について患者グループと一致しています。 1次試験には42名（男性16名、女性26名）が参加し、2次試験には少なくとも38名（男性14名、女性24名）が参加する見込みです。

2. ベースライン測定

   各参加者は、心血管疾患の家族歴、個人の病歴、喫煙状況、および投薬に関するアンケートに記入します。 身長、体重、胴囲、収縮期および拡張期血圧の測定を含む身体検査が行われます。 血液は、全血球数、電解質、血清脂質、肝機能検査、尿素、クレアチニン、および炎症マーカーの実験室分析のためにサンプリングされます。

   冠状動脈性心疾患 (CHD) および一般的な心血管疾患 (CVD) の 10 年リスクは、フラミンガムのリスク方程式を使用して計算されます。

3. JAK2 V617F/G1849T アレル負荷

   ipsogen JAK2 MutaQuant Kit, Qiagen (ZDA) (Ref: No. 673523) は、患者および対照被験者の末梢血から抽出されたゲノム DNA 中の JAK2 V617F/G1849T アレルの検出および定量化に使用されます。 SNP 特異的プライマーは、PCR 産物を定量化するリアルタイム qPCR 装置で検出される JAK2 V617F 対立遺伝子を選択的に増幅します。 JAK2 V617F 対立遺伝子負荷を計算し、JAK2 レコード全体の JAK2 V617F 変異対立遺伝子のパーセンテージとして表します。 分析は、すべてのサンプルについてリュブリャナ大学医療センターの血液学科の研究室で行われます。

4. 頸動脈超音波検査

   頭蓋外頸動脈の検査には、超音波装置アロカ プロサウンド α7 (日立アロカ メディカル株式会社、日本) を、5 ～ 13 MHz の周波数で動作する線形血管プローブと共に使用します。 両側の総頚動脈、内頚動脈、外頚動脈を検査します。 各検査では、測定が 2 回行われ、その平均値が計算されます。 超音波検査は、すべての参加者の両方の訪問で同じ超音波検査技師によって行われます。

   内膜 - 中膜の厚さは、両側の総頸動脈の球根の 2 cm 近位で測定されます。 アテローム性動脈硬化性プラークの頭蓋外頸動脈のスクリーニングが実行され、限局性病変のプラーク定義で、少なくとも 50% の内膜 - 中膜の厚さを超えるか、2 つの直交投影で少なくとも 1.5​​ mm の絶対厚さに達します。 ロッテルダム研究の方法論に従って、アテローム硬化性プラークの採点を行う。 両側の頭蓋外頸動脈床（総頸動脈と球根、内頸動脈と外頸動脈に分かれる）の各セグメントに少なくとも1つのプラークが存在する場合、1点を獲得します。 したがって、頸動脈プラーク スコアは 0 (プラークの不在) から 6 (両側のすべてのセグメントにプラークが存在) の範囲です。

   総頸動脈のエコー追跡を使用して、β-stiffness index と脈波速度で表される動脈硬化を評価します。 測定は、両側の球根から 2 cm 近位の総頸動脈で行われます。 β-剛性指数は次のように計算されます: β = ln (P_max / P_min) / [(D_max - D_min / D_min)]、P_max = 収縮期血圧、P_min = 拡張期血圧; D_max = 最大動脈径および D_min = 最小動脈径。 脈波伝播速度 (PWV) は次のように計算されます: PWV = √ ((β x P_min) / 2ρ)); ρ = 1050 kg/m³。

5. デジタル動脈の内皮機能の評価

   デジタル動脈の内皮機能は、EndoPat 2000、Itamar Medical REF、Caesarea、Israel、ソフトウェア バージョン 3.3.x を使用したデジタル プレチモグラフィーによって測定されます。 反応性充血指数 (RHI) および増強指数 (AI) として表されます。 動脈緊張の変化は、上腕動脈の標準的な 5 分間の閉塞によって誘発される下流の充血応答を作成することによって誘発されます (動脈血圧より 60 mmHg まで膨張した血圧カフを使用)。 カフが解放されると、血流の急増により、反応性充血として現れる内皮依存性血流媒介性拡張 (FMD) が引き起こされます。 閉塞後と閉塞前の比率は、ＥｎｄｏＰＡＴソフトウェアによって計算され、Ａ）が決定される。 結果は、心拍数 75/min に正規化されています。

6. 冠動脈カルシウム負荷の測定

   冠状動脈のカルシウム負荷は、Ｂｉｏｇｒａｐｈ Ｍ １２８列ＰＥＴ－ＣＴスキャナー（Ｓｉｅｍｅｎｓ、Ｅｒｌａｎｇｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）で測定される。 スキャンは心臓の基部から頂点まで行われます。 シーケンシャル プロスペクティブ ECG トリガーによる非造影プロトコルが使用されます。 回転時間は 0.33 秒、管電圧 120 kV、CARE Dose 4D、スライス厚 3 mm、スライス オーバーラップなし。 後処理は Syngo Leonardo ワークステーションで行われます。 冠状動脈のカルシウム負荷は、Agatston スコアとして表されます。 すべての研究対象のデータセットの評価は 3 回行われ、平均値がさらなる分析に使用されます。

7. 統計分析

データのすべてのセットは、正規五分位プロットを使用して分布の正規性についてテストされ、相関係数が計算され、0.05 の α エラー確率で正規分布の拒否を保証する臨界値についてチェックされます。

正規分布データは平均値と標準偏差として表示されますが、非正規分布データは中央値と第 1 四分位と第 3 四分位の間の範囲として表示されます。

1 回目と 2 回目の検査での ET の被験者と対照被験者との差は、離散変数のカイ 2 乗検定、正規分布の連続変数の検定、独立したサンプルのスチューデントの t 検定による検定、および非正規分布の連続検定の検定によって検定されます。独立したサンプルのマンホイットニー検定による変数。 < 0.05 の P 値は、多重比較の補正により有意と見なされます。

4 年間の観察期間における血管機能と形態の変化をログランク検定により 2 群間で比較する。 < 0.05 の P 値は有意と見なされます。

血管機能/形態のパラメーターと JAK2 V617F 対立遺伝子負荷との間の関連性は、ピアソン相関係数によって評価されます。