Артериальная функция и атеросклероз при эссенциальной тромбоцитемии

1. Пациенты и контрольные субъекты

   Пациенты выбраны из базы данных отделения гематологии Университетского медицинского центра Любляны, Словения, у которых в период с 2011 по 2014 год был диагностирован JAK2 V617F-положительный ЭТ. Было 124 JAK2-положительных пациента с ЭТ, среди которых 61 не имел в анамнезе клинически выраженного атеросклеротического заболевания сосудов (инфаркт миокарда, стенокардия, заболевание периферических артерий, заболевание аорты, транзиторная ишемическая атака или ишемический инсульт). 40 пациентов (14 мужчин и 26 женщин) с JAK2 V617F-положительной ЭТ без клинически выраженных сердечно-сосудистых заболеваний подписали информированное согласие и были включены в исследование в 2014 - 2015 гг. для первого обследования и 36 (12 мужчин и 24 женщины) из них ожидаются участвовать также в 2018-19.

   Контрольную группу отбирают среди здоровых сотрудников Университетского медицинского центра Любляны и их родственников. Он соответствует группе пациентов по половозрастному распределению и классическим факторам риска сердечно-сосудистых заболеваний. В первом обследовании приняли участие 42 человека (16 мужчин и 26 женщин), и ожидается, что не менее 38 человек (14 мужчин и 24 женщины) примут участие во втором обследовании.

2. Базовые измерения

   Каждый участник заполнит анкету о семейном анамнезе сердечно-сосудистых заболеваний, личной истории болезни, статусе курения и принимаемых лекарствах. Будет проведен медицинский осмотр, включая измерение роста, веса, окружности талии, систолического и диастолического артериального давления. Будет взят образец крови для лабораторного анализа общего количества клеток крови, электролитов, липидов сыворотки, функциональных тестов печени, мочевины, креатинина и маркеров воспаления.

   10-летний риск ишемической болезни сердца (ИБС) и общих сердечно-сосудистых заболеваний (ССЗ) будет рассчитан с использованием уравнения риска Фремингема.

3. Аллельная нагрузка JAK2 V617F/G1849T

   Набор ipsogen JAK2 MutaQuant, Qiagen (ZDA) (Ref: No. 673523) будет использоваться для обнаружения и количественного определения аллеля JAK2 V617F/G1849T в геномной ДНК, выделенной из периферической крови пациентов, а также контрольных субъектов. Специфичный для SNP праймер избирательно амплифицирует аллель JAK2 V617F, который обнаруживается с помощью прибора количественной ПЦР в реальном времени, который количественно определяет продукты ПЦР. Аллельная нагрузка JAK2 V617F будет рассчитана и выражена как процент мутантных аллелей JAK2 V617F по всей записи JAK2. Анализ всех образцов будет проводиться в лаборатории отделения гематологии Университетского медицинского центра Любляны.

4. Ультразвуковое исследование сонных артерий

   Для исследования экстракраниальных сонных артерий будет использоваться ультразвуковой аппарат Aloka Prosound α7 (Hitachi Aloka Medical, Ltd., Япония) с линейным сосудистым датчиком, работающим на частоте 5-13 МГц. Будут исследованы общие, внутренние и наружные сонные артерии с обеих сторон. При каждом обследовании измерения будут проводиться дважды, и будут рассчитаны их средние значения. Ультразвуковое исследование будет проводиться одним и тем же врачом УЗИ во время обоих посещений всех участников.

   Толщина интима-медиа будет измеряться на 2 см проксимальнее луковицы общей сонной артерии с обеих сторон. Будет проведен скрининг экстракраниальных сонных артерий на наличие атеросклеротических бляшек с определением бляшки очагового поражения, превышающей толщину интима-медиа не менее чем на 50% или достигающей абсолютной толщины не менее 1,5 мм в двух ортогональных проекциях. Оценка атеросклеротических бляшек проводится в соответствии с методологией Роттердамского исследования. Наличие хотя бы одной бляшки в каждом сегменте экстракраниального русла сонной артерии (делится на общую сонную артерию и луковицу, внутреннюю сонную артерию и наружную сонную артерию) с обеих сторон оценивается в 1 балл. Таким образом, оценка каротидных бляшек варьируется от 0 (отсутствие бляшек) до 6 (бляшки присутствуют во всех сегментах с обеих сторон).

   Эхо-трекинг общей сонной артерии будет использоваться для оценки артериальной жесткости, выраженной индексом β-жесткости и скоростью пульсовой волны. Измерения будут проводиться на общей сонной артерии на 2 см проксимальнее луковицы с обеих сторон. Индекс жесткости β будет рассчитываться как: β = ln (P_max / P_min) / [(D_max - D_min / D_min)], где P_max = систолическое артериальное давление, P_min = диастолическое давление; D_max = максимальный диаметр артерии и D_min = минимальный диаметр артерии. Скорость пульсовой волны (СРПВ) будет рассчитываться как: СРПВ = √ ((β x P_min) / 2ρ)); ρ = 1050 кг/м³.

5. Оценка эндотелиальной функции пальцевых артерий

   Эндотелиальная функция пальцевых артерий будет измеряться с помощью цифровой плетимографии с EndoPat 2000, Itamar Medical REF, Кейсария, Израиль, версия программного обеспечения 3.3.x. и выражается как индекс реактивной гиперемии (RHI) и индекс увеличения (AI). Изменения тонуса артерий вызываются созданием нижестоящей гиперемической реакции, вызванной стандартной 5-минутной окклюзией плечевой артерии (с использованием манжеты для измерения артериального давления, накачанной на 60 мм рт. ст. выше артериального давления). При снятии манжеты всплеск кровотока вызывает эндотелийзависимую дилатацию, опосредованную потоком (FMD), которая проявляется в виде реактивной гиперемии. С помощью программного обеспечения EndoPAT рассчитывают отношение пост-окклюзии к до-окклюзии и определяют и А). Результаты нормированы на частоту сердечных сокращений 75/мин.

6. Измерение кальциевой нагрузки коронарных артерий

   Кальциевая нагрузка коронарных артерий измеряется с помощью ПЭТ-КТ сканера Biograph M 128-рядного (Siemens, Эрланген, Германия). Сканирование проводится от основания к верхушке сердца. Используется бесконтрастный протокол с последовательной проспективной триггерной ЭКГ. Время вращения 0,33 с, напряжение на трубке 120 кВ, CARE Dose 4D и толщина среза 3 мм, без перекрытия срезов. Постобработка производится на рабочей станции Syngo Leonardo. Коронарная кальциевая нагрузка выражается в виде шкалы Агатстона. Оценка набора данных каждого субъекта исследования проводится трижды, и среднее значение используется для дальнейшего анализа.

7. статистический анализ

Все наборы данных будут проверяться на нормальность распределения с использованием графика нормального квинтиля, вычисляя коэффициент корреляции и проверяя его на критическое значение, которое гарантирует отказ от нормального распределения с вероятностью α-ошибки 0,05.

Нормально распределенные данные будут представлены как среднее значение и стандартное отклонение, а ненормально распределенные данные будут представлены как медиана и диапазон между 1-м и 3-м квартилем.

Различия между испытуемыми с ЭТ и контрольными испытуемыми при первом и втором обследовании будут проверяться критерием хи-квадрат для дискретных переменных, для нормально распределенных непрерывных переменных - парным критерием Стьюдента для независимых выборок и для ненормально распределенных непрерывных переменных. переменных по критерию Манна-Уитни для независимых выборок. Значения P <0,05 будут считаться значимыми с поправкой на множественные сравнения.

Изменения сосудистой функции и морфологии в течение 4-летнего периода наблюдения будут сравниваться между двумя группами с помощью логарифмического рангового теста. P-значения <0,05 будут считаться значимыми.

Связь между параметрами функции/морфологии сосудов и аллельной нагрузкой JAK2 V617F будет оцениваться с помощью коэффициента корреляции Пирсона.