Arterielle Funktion und Atherosklerose bei essentieller Thrombozythämie

1. Patienten und Kontrollpersonen

   Aus der Datenbank der Abteilung für Hämatologie des Universitätsklinikums Ljubljana, Slowenien, werden Patienten ausgewählt, bei denen zwischen 2011 und 2014 ein JAK2-V617F-positiver ET diagnostiziert wurde. Es gab 124 JAK2-positive ET-Patienten, von denen 61 keine persönliche Vorgeschichte einer klinisch manifesten atherosklerotischen Gefäßerkrankung (Myokardinfarkt, Angina pectoris, periphere arterielle Verschlusskrankheit, Aortenerkrankung, transitorische ischämische Attacke oder ischämischer Schlaganfall) hatten. 40 Patienten (14 männlich und 26 weiblich) mit JAK2 V617F positivem ET ohne klinisch erkennbare kardiovaskuläre Erkrankung haben die Einverständniserklärung unterzeichnet und wurden 2014 - 2015 für die erste Untersuchung in die Studie aufgenommen, von denen 36 (12 männlich und 24 weiblich) erwartet werden auch 2018-19 teilnehmen.

   Die Kontrollgruppe wird aus gesunden Mitarbeitern des Universitätsklinikums Ljubljana und ihren Angehörigen ausgewählt. Es wird mit der Patientengruppe nach Alters- und Geschlechtsverteilung und klassischen Risikofaktoren für Herz-Kreislauf-Erkrankungen abgeglichen. 42 Personen (16 männlich und 26 weiblich) haben an der ersten Prüfung teilgenommen, und mindestens 38 (14 männlich und 24 weiblich) Probanden werden voraussichtlich an der zweiten Prüfung teilnehmen.

2. Basismessungen

   Jeder Teilnehmer füllt einen Fragebogen über die familiäre Vorgeschichte von Herz-Kreislauf-Erkrankungen, die persönliche Krankengeschichte, den Raucherstatus und Medikamente aus. Eine körperliche Untersuchung wird durchgeführt, einschließlich Messungen von Größe, Gewicht, Taillenumfang, systolischem und diastolischem Blutdruck. Blut wird für die Laboranalyse des vollständigen Blutbildes, der Elektrolyte, der Serumlipide, der Leberfunktionstests, des Harnstoffs, des Kreatinins und der Entzündungsmarker entnommen.

   Das 10-Jahres-Risiko einer koronaren Herzkrankheit (KHK) und einer allgemeinen kardiovaskulären Erkrankung (CVD) wird anhand der Framingham-Risikogleichung berechnet.

3. JAK2 V617F/G1849T-Allelbelastung

   Das ipsogen JAK2 MutaQuant Kit, Qiagen (ZDA) (Ref: No. 673523) wird zum Nachweis und zur Quantifizierung des JAK2 V617F/G1849T-Allels in genomischer DNA verwendet, die aus peripherem Blut von Patienten und Kontrollpersonen extrahiert wurde. Ein SNP-spezifischer Primer amplifiziert selektiv das JAK2 V617F-Allel, das mit einem Echtzeit-qPCR-Instrument nachgewiesen wird, das die PCR-Produkte quantifiziert. Die JAK2-V617F-Allellast wird berechnet und als Prozentsatz der JAK2-V617F-mutierten Allele im gesamten JAK2-Datensatz ausgedrückt. Die Analyse wird für alle Proben im Labor der Abteilung für Hämatologie des Universitätsklinikums Ljubljana durchgeführt.

4. Ultraschalluntersuchung der Halsschlagader

   Zur Untersuchung der extrakraniellen Halsschlagadern wird ein Ultraschallgerät Aloka Prosound α7 (Hitachi Aloka Medical, Ltd., Japan) mit einer linearen Gefäßsonde verwendet, die mit einer Frequenz von 5-13 MHz arbeitet. Die gemeinsame, innere und äußere Halsschlagader auf beiden Seiten werden untersucht. Bei jeder Untersuchung werden die Messungen zweimal durchgeführt und ihre Durchschnittswerte berechnet. Die Ultraschalluntersuchung wird bei beiden Besuchen aller Teilnehmer vom selben Ultraschallarzt durchgeführt.

   Die Intima-Media-Dicke wird 2 cm proximal zum Bulbus der Arteria carotis communis auf beiden Seiten gemessen. Es wird ein Screening der extrakraniellen Halsschlagadern auf atherosklerotische Plaques durchgeführt, wobei die Plaquedefinition eine fokale Läsion ist, die die Intima-Media-Dicke um mindestens 50 % überschreitet oder eine absolute Dicke von mindestens 1,5 mm in zwei orthogonalen Projektionen erreicht. Die Bewertung atherosklerotischer Plaques erfolgt nach der Methodik der Rotterdam-Studie. Das Vorhandensein von mindestens einer Plaque in jedem Segment des extrakraniellen Halsschlagaderbetts (unterteilt in die gemeinsame Halsschlagader und den Bulbus, die innere Halsschlagader und die äußere Halsschlagader) auf beiden Seiten wird mit 1 Punkt bewertet. Somit reicht der Carotis-Plaque-Score von 0 (Fehlen von Plaques) bis 6 (Plaques in allen Segmenten auf beiden Seiten vorhanden).

   Echo-Tracking der gemeinsamen Halsschlagader wird verwendet, um die arterielle Steifigkeit, ausgedrückt durch den β-Steifigkeitsindex und die Pulswellengeschwindigkeit, zu beurteilen. Die Messungen werden an der Arteria carotis communis 2 cm proximal zum Bulbus auf beiden Seiten durchgeführt. Der β-Steifigkeitsindex wird wie folgt berechnet: β = ln (P_max / P_min) / [(D_max - D_min / D_min)], wobei P_max = der systolische Blutdruck, P_min = der diastolische Druck; D_max = der maximale Arteriendurchmesser und D_min = der minimale Arteriendurchmesser. Die Pulswellengeschwindigkeit (PWV) wird wie folgt berechnet: PWV = √ ((β x P_min) / 2ρ)); ρ = 1050 kg/m³.

5. Bewertung der Endothelfunktion der digitalen Arterien

   Die Endothelfunktion der digitalen Arterien wird durch digitale Plethymographie mit EndoPat 2000, Itamar Medical REF, Caesarea, Israel, Softwareversion 3.3.x gemessen und ausgedrückt als Reactive Hyperemia Index (RHI) und Augmentation Index (AI). Veränderungen des arteriellen Tonus werden durch Erzeugen einer nachgeschalteten hyperämischen Reaktion ausgelöst, die durch einen standardmäßigen 5-minütigen Verschluss der Brachialarterie induziert wird (unter Verwendung einer Blutdruckmanschette, die auf 60 mmHg über dem arteriellen Blutdruck aufgepumpt ist). Wenn die Manschette gelöst wird, verursacht der Anstieg des Blutflusses eine Endothel-abhängige flussvermittelte Dilatation (FMD), die sich als reaktive Hyperämie manifestiert. Ein Post-Okklusions-zu-Prä-Okklusionsverhältnis wird durch die EndoPAT-Software berechnet und die und A) werden bestimmt. Die Ergebnisse sind auf eine Herzfrequenz von 75/min normiert.

6. Messung der Calciumbelastung der Koronararterie

   Die Kalkbelastung der Koronararterien wird mit einem Biograph M 128-Zeilen-PET-CT-Scanner (Siemens, Erlangen, Deutschland) gemessen. Das Scannen erfolgt von der Basis bis zur Herzspitze. Es wird ein kontrastfreies Protokoll mit sequentieller prospektiver EKG-Triggerung verwendet. Die Rotationszeit beträgt 0,33 Sek., bei einer Röhrenspannung von 120 kV, CARE Dose 4D und einer Schichtdicke von 3 mm, ohne Schichtüberlappung. Die Nachbearbeitung erfolgt auf der Workstation Syngo Leonardo. Die koronare Kalziumbelastung wird als Agatston-Score ausgedrückt. Die Auswertung des Datensatzes jeder Studienperson erfolgt dreimal und der Mittelwert wird für die weitere Analyse verwendet.

7. statistische Analyse

Alle Datensätze werden unter Verwendung des Normal-Quintil-Diagramms auf Normalverteilung getestet, wobei der Korrelationskoeffizient berechnet und auf den kritischen Wert überprüft wird, der eine Ablehnung der Normalverteilung mit einer α-Fehlerwahrscheinlichkeit von 0,05 rechtfertigen würde.

Normalverteilte Daten werden als Mittelwert und Standardabweichung dargestellt, während nicht normalverteilte Daten als Median dargestellt werden und zwischen dem 1. und 3. Quartil liegen.

Unterschiede zwischen Probanden mit ET und Kontrollprobanden bei der ersten und zweiten Untersuchung werden durch den Chi-Quadrat-Test für diskrete Variablen, für normalverteilte kontinuierliche Variablen durch den gepaarten Student's t-Test für unabhängige Stichproben und für nicht-normalverteilte kontinuierliche Variablen getestet Variablen durch den Mann-Whitney-Test für unabhängige Stichproben. P-Werte von < 0,05 werden mit einer Korrektur für Mehrfachvergleiche als signifikant angesehen.

Veränderungen der Gefäßfunktion und -morphologie im 4-jährigen Beobachtungszeitraum werden zwischen den beiden Gruppen durch den Log-Rank-Test verglichen. P-Werte von < 0,05 werden als signifikant angesehen.

Der Zusammenhang zwischen den Parametern Gefäßfunktion/Morphologie und der JAK2-V617F-Allellast wird durch den Pearson-Korrelationskoeffizienten bewertet.