Arteriële functie en atherosclerose bij essentiële trombocytemie

1. Patiënten en controlepersonen

   Patiënten worden geselecteerd uit de database van de afdeling Hematologie van het Universitair Medisch Centrum Ljubljana, Slovenië, bij wie tussen 2011 en 2014 de diagnose JAK2 V617F-positieve ET werd gesteld. Er waren 124 JAK2-positieve ET-patiënten, waarvan er 61 geen persoonlijke voorgeschiedenis hadden van klinisch manifeste atherosclerotische vasculaire ziekte (myocardinfarct, angina pectoris, perifere arteriële ziekte, aortaziekte, voorbijgaande ischemische aanval of ischemische beroerte). 40 patiënten (14 mannen en 26 vrouwen) met JAK2 V617F-positieve ET zonder klinisch duidelijke cardiovasculaire aandoening ondertekenden de geïnformeerde toestemming en werden in 2014 - 2015 voor het eerste onderzoek ingeschreven in de studie en 36 (12 mannen en 24 vrouwen) van hen worden verwacht om ook deel te nemen aan 2018-19.

   De controlegroep wordt gekozen uit gezonde medewerkers van het Universitair Medisch Centrum Ljubljana en hun familieleden. Het wordt gematcht met de patiëntengroep voor leeftijds- en geslachtsverdeling en klassieke risicofactoren voor hart- en vaatziekten. 42 personen (16 mannen en 26 vrouwen) namen deel aan het eerste onderzoek en er wordt verwacht dat ten minste 38 (14 mannen en 24 vrouwen) proefpersonen deelnemen aan het tweede onderzoek.

2. Basislijnmetingen

   Elke deelnemer vult een vragenlijst in over familiegeschiedenis van hart- en vaatziekten, persoonlijke medische geschiedenis, rookstatus en medicijnen. Er wordt een lichamelijk onderzoek uitgevoerd, inclusief metingen van lengte, gewicht, middelomtrek, systolische en diastolische bloeddruk. Bloed zal worden bemonsterd voor laboratoriumanalyse van het volledige aantal bloedcellen, elektrolyten, serumlipiden, leverfunctietesten, ureum, creatinine en ontstekingsmarkers.

   Het 10-jaarsrisico op coronaire hartziekte (CHD) en algemene cardiovasculaire ziekte (CVD) wordt berekend met behulp van de Framingham-risicovergelijking.

3. JAK2 V617F/G1849T allelbelasting

   De ipsogen JAK2 MutaQuant Kit, Qiagen (ZDA) (ref: nr. 673523) zal worden gebruikt voor de detectie en kwantificering van het JAK2 V617F/G1849T-allel in genomisch DNA dat is geëxtraheerd uit perifeer bloed van patiënten en controlepersonen. Een SNP-specifieke primer versterkt selectief het JAK2 V617F-allel dat wordt gedetecteerd met een real-time qPCR-instrument dat de PCR-producten kwantificeert. De JAK2 V617F-allellast wordt berekend en uitgedrukt als het percentage JAK2 V617F-gemuteerde allelen in het hele JAK2-record. Alle monsters worden geanalyseerd in het laboratorium van de afdeling Hematologie van het Universitair Medisch Centrum Ljubljana.

4. Echografie van de halsslagader

   Voor onderzoek van de extracraniale halsslagaders zal een ultrageluidapparaat Aloka Prosound α7 (Hitachi Aloka Medical, Ltd., Japan) worden gebruikt met een lineaire vasculaire sonde die werkt op een frequentie van 5-13 MHz. De gemeenschappelijke, interne en externe halsslagaders aan beide zijden worden onderzocht. Bij elk onderzoek worden de metingen twee keer uitgevoerd en worden de gemiddelde waarden berekend. Het echografisch onderzoek wordt bij beide bezoeken van alle deelnemers door dezelfde echoscopist uitgevoerd.

   De dikte van de intima-media wordt aan beide zijden 2 cm proximaal van de bol van de halsslagader gemeten. Screening van de extracraniale halsslagaders op atherosclerotische plaques zal worden uitgevoerd, met een plaquedefinitie van een focale laesie die de dikte van de intima-media voor ten minste 50% overschrijdt of een absolute dikte van ten minste 1,5 mm bereikt in twee orthogonale projecties. Het scoren van atherosclerotische plaques gebeurt volgens de methodiek uit de Rotterdam Studie. De aanwezigheid van ten minste één plaque in elk segment van het extracraniale halsslagaderbed (verdeeld in de gemeenschappelijke halsslagader en de bulbus, de interne halsslagader en de externe halsslagader) aan beide zijden wordt gescoord met 1 punt. De plaquescore van de halsslagader varieert dus van 0 (afwezigheid van plaques) tot 6 (plaques aanwezig in alle segmenten aan beide zijden).

   Echo-tracking van de arteria carotis communis zal gebruikt worden om de arteriële stijfheid te beoordelen uitgedrukt door de β-stijfheidsindex en de pulsgolfsnelheid. Metingen worden gedaan aan de gemeenschappelijke halsslagader, 2 cm proximaal van de bol aan beide zijden. De β-stijfheidsindex wordt berekend als: β = ln (P_max / P_min) / [(D_max - D_min / D_min)], waarbij P_max = de systolische bloeddruk, P_min = de diastolische druk; D_max = de maximale arteriële diameter en D_min = de minimale arteriële diameter. Pulsgolfsnelheid (PWV) wordt berekend als: PWV = √ ((β x P_min) / 2ρ)); ρ = 1050 kg/m³.

5. Beoordeling van de endotheliale functie van de digitale slagaders

   Endotheliale functie van de digitale slagaders zal worden gemeten door middel van digitale plethymografie met EndoPat 2000, Itamar Medical REF, Caesarea, Israël, softwareversie 3.3.x en uitgedrukt als de Reactive Hyperaemia Index (RHI) en de Augmentation Index (AI). Veranderingen in arteriële tonus worden uitgelokt door een stroomafwaartse hyperemische respons te creëren die wordt geïnduceerd door een standaard 5 minuten durende occlusie van de arteria brachialis (met behulp van een bloeddrukmanchet, opgeblazen tot 60 mmHg boven de arteriële bloeddruk). Wanneer de manchet wordt losgelaten, veroorzaakt de toename van de bloedstroom endotheelafhankelijke stroomgemedieerde dilatatie (FMD), die zich manifesteert als reactieve hyperemie. Een verhouding tussen post-occlusie en pre-occlusie wordt berekend door de EndoPAT-software en de en A) worden bepaald. De resultaten zijn genormaliseerd naar een hartslag van 75/min.

6. Meting van de calciumbelasting van de kransslagader

   De calciumbelasting van kransslagaders wordt gemeten met een Biograph M 128-rij PET-CT-scanner (Siemens, Erlangen, Duitsland). Er wordt gescand van de basis tot de top van het hart. Er wordt een niet-contrastprotocol met sequentiële prospectieve ECG-triggering gebruikt. De rotatietijd is 0,33 sec, met een buisspanning van 120 kV, CARE Dose 4D en plakdikte 3 mm, zonder plakoverlap. De nabewerking gebeurt op het werkstation van Syngo Leonardo. De coronaire calciumbelasting wordt uitgedrukt als de Agatston-score. Evaluatie van de dataset van elke proefpersoon wordt drie keer gedaan en de gemiddelde waarde wordt gebruikt voor verdere analyse.

7. statistische analyse

Alle gegevenssets worden getest op normaliteit van de verdeling met behulp van de normaal-kwintielgrafiek, waarbij de correlatiecoëfficiënt wordt berekend en deze wordt gecontroleerd op de kritieke waarde die de verwerping van de normale verdeling met een α-foutkans van 0,05 zou rechtvaardigen.

Normaal verdeelde gegevens worden gepresenteerd als gemiddelde en standaarddeviatie, terwijl niet-normaal verdeelde gegevens worden gepresenteerd als mediaan en bereik tussen het 1e en 3e kwartiel.

Verschillen tussen proefpersonen met ET en controlepersonen bij het eerste en tweede onderzoek worden getest met de chikwadraattoets voor discrete variabelen, voor normaal verdeelde continue variabelen met de gepaarde Student's t-toets voor onafhankelijke steekproeven, en voor niet-normaal verdeelde continue variabelen. variabelen door de Mann-Whitney-test voor onafhankelijke steekproeven. P-waarden van < 0,05 worden als significant beschouwd met een correctie voor meerdere vergelijkingen.

Veranderingen in vasculaire functie en morfologie in de observatieperiode van 4 jaar zullen tussen de twee groepen worden vergeleken door middel van de log-ranktest. P-waarden van < 0,05 worden als significant beschouwd.

De associatie tussen de parameters vasculaire functie/morfologie en de JAK2 V617F-allelbelasting zal worden beoordeeld door de Pearson-correlatiecoëfficiënt.