Arteriell funksjon og aterosklerose ved essensiell trombocytemi

1. Pasienter og kontrollpersoner

   Pasienter er valgt fra databasen til Institutt for hematologi ved University Medical Center Ljubljana, Slovenia, som ble diagnostisert med JAK2 V617F positiv ET mellom 2011 og 2014. Det var 124 JAK2-positive ET-pasienter, blant de 61 som ikke hadde en personlig historie med klinisk manifest aterosklerotisk vaskulær sykdom (hjerteinfarkt, angina pectoris, perifer arteriell sykdom, aortasykdom, forbigående iskemisk angrep eller iskemisk slag). 40 pasienter (14 menn og 26 kvinner) med JAK2 V617F positiv ET uten klinisk tilsynelatende kardiovaskulær sykdom signerte det informerte samtykket og ble registrert i studien i 2014 - 2015 for den første undersøkelsen, og 36 (12 menn og 24 kvinner) av dem forventes å delta også i 2018-19.

   Kontrollgruppen er valgt blant friske ansatte ved University Medical Center Ljubljana og deres pårørende. Det matches med pasientgruppen for alders- og kjønnsfordeling og klassiske risikofaktorer for hjerte- og karsykdommer. 42 individer (16 menn og 26 kvinner) deltok i den første undersøkelsen og minst 38 (14 mannlige og 24 kvinner) forsøkspersoner forventes å delta i den andre undersøkelsen.

2. Grunnlinjemålinger

   Hver deltaker vil fylle ut et spørreskjema om familiehistorie med hjerte- og karsykdommer, personlig sykehistorie, røykestatus og medisiner. Det vil bli utført en fysisk undersøkelse, inkludert målinger av høyde, vekt, midjeomkrets, systolisk og diastolisk blodtrykk. Blod vil bli tatt for laboratorieanalyse av fullstendig blodcelletall, elektrolytter, serumlipider, leverfunksjonstester, urea, kreatinin og inflammatoriske markører.

   10-årsrisikoen for koronar hjertesykdom (CHD) og generell kardiovaskulær sykdom (CVD) vil bli beregnet ved hjelp av Framingham risikoligningen.

3. JAK2 V617F/G1849T allelbelastning

   ipsogen JAK2 MutaQuant-settet, Qiagen (ZDA) (Ref: nr. 673523) vil bli brukt til påvisning og kvantifisering av JAK2 V617F/G1849T-allelen i genomisk DNA ekstrahert fra perifert blod fra pasienter og også kontrollpersoner. En SNP-spesifikk primer forsterker selektivt JAK2 V617F-allelen som detekteres med et sanntids qPCR-instrument som kvantifiserer PCR-produktene. JAK2 V617F allelbyrden vil bli beregnet og uttrykt som prosentandelen av JAK2 V617F muterte alleler gjennom hele JAK2-posten. Analyse vil bli gjort i laboratoriet ved Institutt for hematologi ved University Medical Center Ljubljana for alle prøver.

4. Carotis arterie ultralydundersøkelse

   For undersøkelse av de ekstrakranielle halspulsårene vil en ultralydmaskin Aloka Prosound α7 (Hitachi Aloka Medical, Ltd., Japan) brukes med en lineær vaskulær sonde som arbeider med en frekvens på 5-13 MHz. De vanlige, interne og eksterne halspulsårene på begge sider vil bli undersøkt. Ved hver undersøkelse vil målingene gjøres to ganger og deres gjennomsnittsverdier beregnes. Ultralydundersøkelsen vil bli utført av samme ultralyd ved begge besøkene til alle deltakerne.

   Tykkelsen av intima-media vil bli målt 2 cm proksimalt i forhold til bulben til vanlig halspulsåre på begge sider. Screening av de ekstrakranielle halspulsårene for aterosklerotiske plakk vil bli utført, med en plakkdefinisjon av en fokal lesjon, som overskrider intima-media-tykkelsen med minst 50 % eller når en absolutt tykkelse på minst 1,5 mm i to ortogonale projeksjoner. Scoring av aterosklerotiske plakk gjøres i henhold til metodikken fra Rotterdam-studien. Tilstedeværelsen av minst én plakk i hvert segment av den ekstrakranielle halspulsåren (delt i den felles halspulsåren og bulben, den indre halspulsåren og den ytre halspulsåren) på hver side får 1 poeng. Dermed varierer carotis plakk score fra 0 (fravær av plakk) til 6 (plakk tilstede i alle segmenter på begge sider).

   Ekkosporing av den felles halspulsåren vil bli brukt for å vurdere arteriell stivhet uttrykt ved β-stivhetsindeksen og pulsbølgehastigheten. Målinger vil bli gjort ved den felles halspulsåren 2 cm proksimalt til pæren på begge sider. β-stivhetsindeksen vil bli beregnet som: β = ln (P_max / P_min) / [(D_max - D_min / D_min)], hvor P_max = det systoliske blodtrykket, P_min = det diastoliske trykket; D_max = maksimal arteriell diameter og D_min = minimal arteriell diameter. Pulsbølgehastighet (PWV) vil bli beregnet som: PWV = √ ((β x P_min) / 2ρ)); ρ = 1050 kg/m³.

5. Vurdering av endotelfunksjonen til de digitale arteriene

   Endotelfunksjonen til de digitale arteriene vil bli målt ved digital plethymografi med EndoPat 2000, Itamar Medical REF, Caesarea, Israel, programvareversjon 3.3.x og uttrykt som Reactive Hyperemi Index (RHI) og Augmentation Index (AI). Endringer i arteriell tonus fremkalles ved å skape en nedstrøms hyperemisk respons indusert av en standard 5-minutters okklusjon av arterien brachialis (ved hjelp av en blodtrykksmansjett, oppblåst til 60 mmHg over arterielt blodtrykk). Når mansjetten frigjøres, forårsaker bølgen av blodstrøm endotelavhengig strømningsmediert dilatasjon (FMD) som manifesteres som reaktiv hyperemi. Et forhold mellom post-okklusjon og pre-okklusjon beregnes av EndoPAT-programvaren og og A) bestemmes. Resultatene er normalisert til en hjertefrekvens på 75/min.

6. Måling av koronararterie-kalsiumbelastning

   Kalsiumbelastningen til koronararteriene måles med en Biograph M 128-rads PET-CT-skanner (Siemens, Erlangen, Tyskland). Skanning gjøres fra bunnen til toppen av hjertet. En ikke-kontrastprotokoll med sekvensiell prospektiv EKG-utløsning brukes. Rotasjonstiden er 0,33 sek, med en rørspenning på 120 kV, CARE Dose 4D og skivetykkelse 3 mm, uten skiveoverlapping. Etterbehandling gjøres på Syngo Leonardo-arbeidsstasjonen. Den koronare kalsiumbelastningen uttrykkes som Agatston-skåren. Evaluering av datasettet til hvert studieemne gjøres tre ganger og gjennomsnittsverdien brukes til videre analyse.

7. Statistisk analyse

Alle sett med data vil bli testet for normalitet av distribusjon ved å bruke normal-kvintil-plottet, beregne korrelasjonskoeffisienten og sjekke den for den kritiske verdien som vil garantere avvisning av normalfordeling med en α-feilsannsynlighet på 0,05.

Normalfordelte data vil bli presentert som gjennomsnitt og standardavvik, mens ikke-normalfordelte data vil presenteres som median og område mellom 1. og 3. kvartil.

Forskjeller mellom emner med ET og kontrollemner ved første og andre undersøkelse vil bli testet med kjikvadrattesten for diskrete variabler, for normalfordelte kontinuerlige variabler ved den sammenkoblede Students t-testen for uavhengige prøver, og for ikke-normalfordelte kontinuerlige variabler. variabler ved Mann-Whitney-testen for uavhengige prøver. P-verdier på < 0,05 vil bli vurdert som signifikante med en korreksjon for flere sammenligninger.

Endringer i vaskulær funksjon og morfologi i den 4-årige observasjonsperioden vil bli sammenlignet mellom de to gruppene ved log rank test. P-verdier på < 0,05 vil anses som signifikante.

Sammenhengen mellom parametrene for vaskulær funksjon/morfologi og JAK2 V617F allelbyrden vil bli vurdert av Pearson-korrelasjonskoeffisienten.