原发性血小板增多症的动脉功能和动脉粥样硬化

1. 患者和对照对象

   患者选自斯洛文尼亚卢布尔雅那大学医学中心血液学系的数据库，他们在 2011 年至 2014 年间被诊断为 JAK2 V617F 阳性 ET。 有 124 名 JAK2 阳性 ET 患者，其中 61 名没有临床表现的动脉粥样硬化性血管疾病（心肌梗塞、心绞痛、外周动脉疾病、主动脉疾病、短暂性脑缺血发作或缺血性中风）的个人病史。 40例（14男26女）JAK2 V617F阳性ET无临床明显心血管疾病签署知情同意书并于2014-2015年首次检查入组研究，预计其中36例（12男24女）也参加 2018-19 年。

   对照组选自卢布尔雅那大学医学中心的健康员工及其亲属。 它与患者组的年龄和性别分布以及心血管疾病的经典危险因素相匹配。 42 人（16 名男性和 26 名女性）参加了第一次考试，预计至少有 38 名受试者（14 名男性和 24 名女性）参加第二次考试。

2. 基线测量

   每个参与者将完成一份关于心血管疾病家族史、个人病史、吸烟状况和药物治疗的问卷。 将进行身体检查，包括测量身高、体重、腰围、收缩压和舒张压。 血液将被取样用于全血细胞计数、电解质、血脂、肝功能测试、尿素、肌酐和炎症标志物的实验室分析。

   将使用 Framingham 风险方程计算冠心病 (CHD) 和一般心血管疾病 (CVD) 的 10 年风险。

3. JAK2 V617F/G1849T 等位基因负荷

   ipsogen JAK2 MutaQuant 试剂盒，Qiagen (ZDA)（参考号：673523）将用于检测和定量从患者和对照受试者的外周血中提取的基因组 DNA 中的 JAK2 V617F/G1849T 等位基因。 SNP 特异性引物选择性地扩增 JAK2 V617F 等位基因，该等位基因可通过定量 PCR 产物的实时 qPCR 仪器进行检测。 JAK2 V617F 等位基因负荷将计算并表示为整个 JAK2 记录中 JAK2 V617F 突变等位基因的百分比。 将在卢布尔雅那大学医学中心血液学系的实验室对所有样本进行分析。

4. 颈动脉超声检查

   为了检查颅外颈动脉，超声机 Aloka Prosound α7（日立 Aloka 医疗有限公司，日本）将与工作频率为 5-13 MHz 的线性血管探头一起使用。 将检查两侧的颈总动脉、颈内动脉和颈外动脉。 在每次检查中，将进行两次测量并计算它们的平均值。 超声检查将在所有参与者的两次访视中由同一位超声医师完成。

   在两侧颈总动脉球部近端 2 厘米处测量内膜中层厚度。 将对颅外颈动脉进行动脉粥样硬化斑块筛查，斑块定义为局灶性病变，超过内膜-中膜厚度至少 50% 或在两个正交投影中达到至少 1.5 毫米的绝对厚度。 动脉粥样硬化斑块的评分是根据鹿特丹研究的方法进行的。 两侧颅外颈动脉床（分为颈总动脉和球部、颈内动脉和颈外动脉）各段至少有一个斑块记 1 分。 因此，颈动脉斑块评分范围为 0（无斑块）至 6（两侧所有节段均有斑块）。

   颈总动脉的回声跟踪将用于评估由 β 硬度指数和脉搏波速度表示的动脉硬度。 测量将在两侧距球部近端 2 cm 处的颈总动脉处进行。 β-硬度指数将计算为：β = ln (P_max / P_min) / [(D_max - D_min / D_min)]，其中 P_max = 收缩压，P_min = 舒张压； D_max = 最大动脉直径和 D_min = 最小动脉直径。 脉搏波传播速度 (PWV) 的计算公式为：PWV = √ ((β x P_min) / 2ρ))； ρ = 1050 公斤/立方米。

5. 数字动脉内皮功能的评估

   数字动脉的内皮功能将通过数字体积描记术使用 EndoPat 2000、Itamar Medical REF、Caesarea、Israel、软件版本 3.3.x 进行测量 并表示为反应性充血指数 (RHI) 和增强指数 (AI)。 通过标准的 5 分钟肱动脉闭塞（使用血压袖带，充气至高于动脉血压 60 毫米汞柱）诱导的下游充血反应，引起动脉张力的变化。 当袖带松开时，血流激增会引起内皮依赖性血流介导的扩张 (FMD)，表现为反应性充血。 通过 EndoPAT 软件计算闭塞后与闭塞前的比率，并确定 和 A)。 结果标准化为 75/分钟的心率。

6. 冠状动脉钙负荷的测量

   冠状动脉的钙负荷用 Biograph M 128 排 PET-CT 扫描仪（Siemens，Erlangen，Germany）测量。 扫描是从心底到心尖进行的。 使用具有顺序前瞻性 ECG 触发的非对比协议。 旋转时间为 0.33 秒，管电压为 120 kV，CARE Dose 4D，切片厚度为 3 mm，无切片重叠。 后期处理在 Syngo Leonardo 工作站上完成。 冠状动脉钙负荷表示为 Agatston 评分。 对每个研究对象的数据集进行 3 次评估，取平均值用于进一步分析。

7. 统计分析

将使用正态五分位数图对所有数据集的分布正态性进行测试，计算相关系数并检查其是否为临界值，该临界值将保证拒绝正态分布，α 误差概率为 0.05。

正态分布的数据将以均值和标准差表示，而非正态分布的数据将以中位数和第 1 与第 3 四分位数之间的范围表示。

在第一次和第二次考试中，具有 ET 的科目与控制科目之间的差异将通过离散变量的卡方检验进行检验，对于正态分布的连续变量，通过独立样本的配对学生 t 检验进行检验，对于非正态分布的连续变量独立样本的 Mann-Whitney 检验变量。 P 值 < 0.05 将被认为具有多重比较校正的显着性。

采用对数秩检验比较两组4年观察期内血管功能和形态的变化。 < 0.05 的 P 值将被视为显着。

血管功能/形态学参数与 JAK2 V617F 等位基因负荷之间的关联将通过 Pearson 相关系数进行评估。