Arteriální funkce a ateroskleróza u esenciální trombocytémie

1. Pacienti a kontrolní subjekty

   Pacienti jsou vybíráni z databáze Hematologické kliniky University Medical Center Ljubljana, Slovinsko, u kterých byla v letech 2011 až 2014 diagnostikována JAK2 V617F pozitivní ET. Bylo 124 JAK2 pozitivních ET pacientů, z nichž 61 nemělo v osobní anamnéze klinicky manifestní aterosklerotické vaskulární onemocnění (infarkt myokardu, angina pectoris, onemocnění periferních tepen, onemocnění aorty, tranzitorní ischemická ataka nebo ischemická cévní mozková příhoda). 40 pacientů (14 mužů a 26 žen) s JAK2 V617F pozitivní ET bez klinicky zjevného kardiovaskulárního onemocnění podepsalo informovaný souhlas a bylo zařazeno do studie v letech 2014 - 2015 k prvnímu vyšetření a očekává se 36 (12 mužů a 24 žen) z nich zúčastnit se i v letech 2018-19.

   Kontrolní skupina je vybrána ze zdravých zaměstnanců Univerzitního lékařského centra v Lublani a jejich příbuzných. Je sladěna se skupinou pacientů z hlediska distribuce věku a pohlaví a klasických rizikových faktorů kardiovaskulárních onemocnění. Prvního vyšetření se zúčastnilo 42 jedinců (16 mužů a 26 žen) a očekává se, že druhého vyšetření se zúčastní nejméně 38 (14 mužů a 24 žen).

2. Základní měření

   Každý účastník vyplní dotazník o rodinné anamnéze kardiovaskulárních onemocnění, osobní anamnéze, kouření a lécích. Bude provedeno fyzikální vyšetření, včetně měření výšky, hmotnosti, obvodu pasu, systolického a diastolického krevního tlaku. Krev bude odebrána pro laboratorní analýzu kompletního krevního obrazu, elektrolytů, sérových lipidů, jaterních funkčních testů, močoviny, kreatininu a zánětlivých markerů.

   10leté riziko ischemické choroby srdeční (ICHS) a celkového kardiovaskulárního onemocnění (CVD) bude vypočítáno pomocí Framinghamské rizikové rovnice.

3. Zátěž alely JAK2 V617F/G1849T

   Pro detekci a kvantifikaci alely JAK2 V617F/G1849T v genomové DNA extrahované z periferní krve pacientů a také kontrolních subjektů bude použita ipsogen JAK2 MutaQuant Kit, Qiagen (ZDA) (Ref: No. 673523). SNP specifický primer selektivně amplifikuje alelu JAK2 V617F, která je detekována pomocí nástroje qPCR v reálném čase, který kvantifikuje produkty PCR. Zátěž alel JAK2 V617F bude vypočtena a vyjádřena jako procento mutovaných alel JAK2 V617F v celém záznamu JAK2. Analýza bude provedena v laboratoři Ústavu hematologie Univerzitního lékařského centra v Lublani pro všechny vzorky.

4. Ultrazvukové vyšetření krční tepny

   Pro vyšetření extrakraniálních karotických tepen bude použit ultrazvukový přístroj Aloka Prosound α7 (Hitachi Aloka Medical, Ltd., Japonsko) s lineární cévní sondou pracující na frekvenci 5-13 MHz. Budou vyšetřeny společné, vnitřní a vnější krční tepny na obou stranách. Při každém vyšetření budou měření provedena dvakrát a budou vypočteny jejich průměrné hodnoty. Ultrazvukové vyšetření provede stejný ultrasonograf při obou návštěvách všech účastníků.

   Tloušťka intima-media bude měřena 2 cm proximálně od bulbu společné karotidy na obou stranách. Bude proveden screening extrakraniálních karotických tepen na aterosklerotické pláty s definicí plaku jako fokální léze přesahující tloušťku intima-media alespoň o 50 % nebo dosahující absolutní tloušťky alespoň 1,5 mm ve dvou ortogonálních projekcích. Hodnocení aterosklerotických plátů se provádí podle metodiky z Rotterdamské studie. Přítomnost alespoň jednoho plaku v každém segmentu extrakraniálního karotického arteriálního řečiště (rozděleného na společnou karotidovou arterii a bulbus, vnitřní karotidovou arterii a vnější karotidovou arterii) na obou stranách je hodnocena 1 bodem. Skóre karotického plaku se tedy pohybuje od 0 (nepřítomnost plaků) do 6 (plaky přítomné ve všech segmentech na obou stranách).

   Echo-tracking společné karotidy bude použit k posouzení arteriální tuhosti vyjádřené β-indexem tuhosti a rychlostí pulzní vlny. Měření se provedou na společné karotické tepně 2 cm proximálně od bulbu na obou stranách. Index β-tuhosti se vypočte jako: β = ln (P_max / P_min) / [(D_max - D_min / D_min)], kde P_max = systolický krevní tlak, P_min = diastolický tlak; D_max = maximální průměr arterií a D_min = minimální průměr arterií. Rychlost pulzní vlny (PWV) bude vypočítána jako: PWV = √ ((β x P_min) / 2ρ)); ρ = 1050 kg/m³.

5. Hodnocení endoteliální funkce digitálních tepen

   Endoteliální funkce digitálních tepen bude měřena digitální pletymografií pomocí EndoPat 2000, Itamar Medical REF, Caesarea, Izrael, verze softwaru 3.3.x a vyjádřeno jako index reaktivní hyperemie (RHI) a index augmentace (AI). Změny arteriálního tonu jsou vyvolány vytvořením downstream hyperemické odpovědi vyvolané standardní 5minutovou okluzí brachiální arterie (pomocí manžety na krevní tlak, nafouknuté na 60 mmHg nad arteriální krevní tlak). Když se manžeta uvolní, prudký nárůst průtoku krve způsobí endotelově závislou dilataci zprostředkovanou průtokem (FMD), která se projevuje jako reaktivní hyperémie. Poměr post-okluze k pre-okluzi se vypočítá pomocí softwaru EndoPAT a určí se a A). Výsledky jsou normalizovány na srdeční frekvenci 75/min.

6. Měření zátěže vápníkem v koronární tepně

   Zátěž vápníkem v koronárních tepnách se měří pomocí Biograph M 128-řadého PET-CT skeneru (Siemens, Erlangen, Německo). Skenování se provádí od základny k apexu srdce. Používá se nekontrastní protokol se sekvenčním prospektivním spouštěním EKG. Doba rotace je 0,33 s, při napětí elektronky 120 kV, CARE Dose 4D a tloušťce plátku 3 mm, bez překrytí plátku. Následné zpracování se provádí na pracovní stanici Syngo Leonardo. Koronární zátěž vápníkem je vyjádřena jako Agatstonovo skóre. Vyhodnocení souboru dat každého studovaného subjektu se provádí třikrát a průměrná hodnota se použije pro další analýzu.

7. Statistická analýza

Všechny soubory dat budou testovány na normalitu rozdělení pomocí normálního kvintilového grafu, vypočítáním korelačního koeficientu a jeho kontrolou na kritickou hodnotu, která by zaručovala zamítnutí normálního rozdělení s pravděpodobností α-chyby 0,05.

Normálně rozdělená data budou prezentována jako průměr a standardní odchylka, zatímco data s nenormálním rozdělením budou prezentována jako medián a rozmezí mezi 1. a 3. kvartilem.

Rozdíly mezi subjekty s ET a kontrolními subjekty u prvního a druhého vyšetření budou testovány chí-kvadrát testem pro diskrétní proměnné, pro normálně rozdělené spojité proměnné párovým Studentovým t-testem pro nezávislé výběry a pro nenormálně rozdělené spojité proměnné. proměnné pomocí Mann-Whitneyho testu pro nezávislé vzorky. P-hodnoty < 0,05 budou považovány za významné s korekcí pro vícenásobná srovnání.

Změny vaskulární funkce a morfologie ve 4letém období pozorování budou mezi oběma skupinami porovnány log rank testem. P-hodnoty < 0,05 budou považovány za významné.

Souvislost mezi parametry vaskulární funkce / morfologie a zátěží alely JAK2 V617F bude hodnocena pomocí Pearsonova korelačního koeficientu.