Función arterial y aterosclerosis en la trombocitemia esencial

1. Pacientes y sujetos de control

   Los pacientes se seleccionan de la base de datos del Departamento de Hematología del Centro Médico Universitario de Ljubljana, Eslovenia, que fueron diagnosticados con ET positivo para JAK2 V617F entre 2011 y 2014. Hubo 124 pacientes con TE JAK2 positivo, entre los cuales 61 no tenían antecedentes personales de enfermedad vascular aterosclerótica clínicamente manifiesta (infarto de miocardio, angina de pecho, enfermedad arterial periférica, enfermedad aórtica, ataque isquémico transitorio o accidente cerebrovascular isquémico). 40 pacientes (14 hombres y 26 mujeres) con TE JAK2 V617F positivo sin enfermedad cardiovascular clínicamente aparente firmaron el consentimiento informado y se inscribieron en el estudio en 2014 - 2015 para el primer examen y se esperan 36 (12 hombres y 24 mujeres) de ellos para participar también en 2018-19.

   El grupo de control se selecciona entre empleados sanos del Centro Médico Universitario de Ljubljana y sus familiares. Se empareja con el grupo de pacientes por edad y distribución por sexo y factores de riesgo clásicos de enfermedad cardiovascular. 42 personas (16 hombres y 26 mujeres) participaron en el primer examen y se espera que al menos 38 sujetos (14 hombres y 24 mujeres) participen en el segundo examen.

2. Mediciones de referencia

   Cada participante completará un cuestionario sobre antecedentes familiares de enfermedades cardiovasculares, antecedentes médicos personales, tabaquismo y medicamentos. Se realizará un examen físico, incluidas las medidas de altura, peso, circunferencia de la cintura, presión arterial sistólica y diastólica. Se tomarán muestras de sangre para análisis de laboratorio de hemograma completo, electrolitos, lípidos séricos, pruebas de función hepática, urea, creatinina y marcadores inflamatorios.

   El riesgo de 10 años de enfermedad cardíaca coronaria (CHD) y enfermedad cardiovascular general (ECV) se calculará utilizando la ecuación de riesgo de Framingham.

3. Carga del alelo JAK2 V617F/G1849T

   El kit ipsogen JAK2 MutaQuant, Qiagen (ZDA) (Ref: No. 673523) se utilizará para la detección y cuantificación del alelo JAK2 V617F/G1849T en ADN genómico extraído de sangre periférica de pacientes y también de sujetos de control. Un cebador específico de SNP amplifica selectivamente el alelo JAK2 V617F que se detecta con un instrumento de qPCR en tiempo real que cuantifica los productos de la PCR. La carga de alelos de JAK2 V617F se calculará y expresará como el porcentaje de alelos mutados de JAK2 V617F en todo el registro de JAK2. El análisis se realizará en el laboratorio del Departamento de Hematología del Centro Médico Universitario de Ljubljana para todas las muestras.

4. Examen de ultrasonido de la arteria carótida

   Para el examen de las arterias carótidas extracraneales se utilizará un ecógrafo Aloka Prosound α7 (Hitachi Aloka Medical, Ltd., Japón) con una sonda vascular lineal que trabaja a una frecuencia de 5-13 MHz. Se examinarán las arterias carótidas común, interna y externa de ambos lados. En cada examen, las mediciones se realizarán dos veces y se calcularán sus valores medios. El examen de ultrasonido lo realizará el mismo ecografista en ambas visitas de todos los participantes.

   El grosor íntima-media se medirá 2 cm proximal al bulbo de la arteria carótida común en ambos lados. Se realizará un cribado de las arterias carótidas extracraneales en busca de placas ateroscleróticas, con una definición de placa de una lesión focal, que supere el espesor íntima-media en al menos un 50% o que alcance un espesor absoluto de al menos 1,5 mm en dos proyecciones ortogonales. La puntuación de las placas ateroscleróticas se realiza de acuerdo con la metodología del Estudio de Rotterdam. La presencia de al menos una placa en cada segmento del lecho arterial carotídeo extracraneal, (dividido en la arteria carótida común y el bulbo, la arteria carótida interna y la arteria carótida externa) a ambos lados se califica con 1 punto. Así, el puntaje de placa carotídea varía de 0 (ausencia de placas) a 6 (placas presentes en todos los segmentos en ambos lados).

   El eco-seguimiento de la arteria carótida común se utilizará para evaluar la rigidez arterial expresada por el índice de rigidez β y la velocidad de la onda del pulso. Las mediciones se realizarán en la arteria carótida común 2 cm proximal al bulbo en ambos lados. El índice de rigidez β se calculará como: β = ln (P_max / P_min) / [(D_max - D_min / D_min)], donde P_max = la presión arterial sistólica, P_min = la presión diastólica; D_max = el diámetro arterial máximo y D_min = el diámetro arterial mínimo. La velocidad de la onda de pulso (PWV) se calculará como: PWV = √ ((β x P_min) / 2ρ)); r = 1050 kg/m³.

5. Evaluación de la función endotelial de las arterias digitales

   La función endotelial de las arterias digitales se medirá mediante pletimografía digital con EndoPat 2000, Itamar Medical REF, Cesarea, Israel, versión de software 3.3.x y expresado como el índice de hiperemia reactiva (RHI) y el índice de aumento (AI). Los cambios en el tono arterial se provocan mediante la creación de una respuesta hiperémica aguas abajo inducida por una oclusión estándar de 5 minutos de la arteria braquial (usando un manguito de presión arterial, inflado a 60 mmHg por encima de la presión arterial). Cuando se suelta el manguito, el aumento del flujo sanguíneo provoca una dilatación mediada por flujo (FMD) dependiente del endotelio, que se manifiesta como hiperemia reactiva. Se calcula una relación post-oclusión a pre-oclusión mediante el software EndoPAT y se determinan y A). Los resultados se normalizan a una frecuencia cardíaca de 75/min.

6. Medición de la carga de calcio de la arteria coronaria

   La carga de calcio de las arterias coronarias se mide con un escáner PET-CT de 128 filas Biograph M (Siemens, Erlangen, Alemania). La exploración se realiza desde la base hasta el vértice del corazón. Se utiliza un protocolo sin contraste con activación prospectiva secuencial de ECG. El tiempo de rotación es de 0,33 seg, con un voltaje de tubo de 120 kV, CARE Dose 4D y espesor de corte de 3 mm, sin superposición de corte. El posprocesamiento se realiza en la estación de trabajo Syngo Leonardo. La carga de calcio coronario se expresa como la puntuación de Agatston. La evaluación del conjunto de datos de cada sujeto de estudio se realiza tres veces y el valor promedio se usa para análisis posteriores.

7. análisis estadístico

Se probará la normalidad de la distribución de todos los conjuntos de datos utilizando la gráfica de quintiles normales, calculando el coeficiente de correlación y comprobando el valor crítico que garantizaría el rechazo de la distribución normal con una probabilidad de error α de 0,05.

Los datos con distribución normal se presentarán como media y desviación estándar, mientras que los datos con distribución no normal se presentarán como mediana y rango entre el 1er y el 3er cuartil.

Las diferencias entre los sujetos con TE y los sujetos de control en el primer y segundo examen se probarán mediante la prueba de chi-cuadrado para variables discretas, para variables continuas con distribución normal mediante la prueba t de Student pareada para muestras independientes y para variables continuas sin distribución normal. variables mediante la prueba de Mann-Whitney para muestras independientes. Los valores de p < 0,05 se considerarán significativos con una corrección para comparaciones múltiples.

Los cambios en la función vascular y la morfología en el período de observación de 4 años se compararán entre los dos grupos mediante la prueba de rango logarítmico. Los valores de p < 0,05 se considerarán significativos.

La asociación entre los parámetros de función/morfología vascular y la carga del alelo JAK2 V617F se evaluará mediante el coeficiente de correlación de Pearson.