Arteriel funktion og aterosklerose ved essentiel trombocytæmi

1. Patienter og kontrolpersoner

   Patienter er udvalgt fra databasen for afdelingen for hæmatologi ved University Medical Center Ljubljana, Slovenien, som blev diagnosticeret med JAK2 V617F positiv ET mellem 2011 og 2014. Der var 124 JAK2-positive ET-patienter, blandt dem havde 61 ikke en personlig historie med klinisk manifest aterosklerotisk vaskulær sygdom (myokardieinfarkt, angina pectoris, perifer arteriel sygdom, aortasygdom, forbigående iskæmisk anfald eller iskæmisk slagtilfælde). 40 patienter (14 mænd og 26 kvinder) med JAK2 V617F positiv ET uden klinisk tilsyneladende kardiovaskulær sygdom underskrev det informerede samtykke og blev indskrevet i undersøgelsen i 2014 - 2015 til den første undersøgelse, og 36 (12 mænd og 24 kvinder) af dem forventes at deltage også i 2018-19.

   Kontrolgruppen er udvalgt blandt raske medarbejdere ved University Medical Center Ljubljana og deres pårørende. Det matches med patientgruppen for alders- og kønsfordeling og klassiske risikofaktorer for hjertekarsygdomme. 42 personer (16 mænd og 26 kvinder) deltog i den første undersøgelse, og mindst 38 (14 mænd og 24 kvinder) forsøgspersoner forventes at deltage i den anden undersøgelse.

2. Baseline målinger

   Hver deltager vil udfylde et spørgeskema om familiehistorie med hjerte-kar-sygdomme, personlig sygehistorie, rygestatus og medicin. Der vil blive foretaget en fysisk undersøgelse, herunder målinger af højde, vægt, taljeomkreds, systolisk og diastolisk blodtryk. Der vil blive udtaget blodprøver til laboratorieanalyse af fuldstændigt blodcelletal, elektrolytter, serumlipider, leverfunktionstests, urinstof, kreatinin og inflammatoriske markører.

   10-års risikoen for koronar hjertesygdom (CHD) og generel kardiovaskulær sygdom (CVD) vil blive beregnet ved hjælp af Framingham risikoligningen.

3. JAK2 V617F/G1849T allelbyrde

   ipsogen JAK2 MutaQuant Kit, Qiagen (ZDA) (Ref. nr. 673523) vil blive brugt til påvisning og kvantificering af JAK2 V617F/G1849T allel i genomisk DNA ekstraheret fra perifert blod fra patienter og også kontrolpersoner. En SNP-specifik primer amplificerer selektivt JAK2 V617F-allelen, som detekteres med et real-time qPCR-instrument, der kvantificerer PCR-produkterne. JAK2 V617F-allelbyrden vil blive beregnet og udtrykt som procentdelen af ​​JAK2 V617F-muterede alleler gennem hele JAK2-posten. Analyse vil blive udført i laboratoriet ved afdelingen for hæmatologi ved University Medical Center Ljubljana for alle prøver.

4. Carotis arterie ultralydsundersøgelse

   Til undersøgelse af de ekstrakranielle carotisarterier vil en ultralydsmaskine Aloka Prosound α7 (Hitachi Aloka Medical, Ltd., Japan) blive brugt med en lineær vaskulær probe, der arbejder ved en frekvens på 5-13 MHz. De fælles, interne og eksterne halspulsårer på begge sider vil blive undersøgt. Ved hver undersøgelse vil målingerne blive udført to gange, og deres gennemsnitsværdier vil blive beregnet. Ultralydsundersøgelsen vil blive foretaget af samme ultralydsgraf ved begge besøg af alle deltagere.

   Tykkelsen af ​​intima-mediet vil blive målt 2 cm proksimalt i forhold til den almindelige halspulsåre på begge sider. Screening af de ekstrakranielle carotisarterier for aterosklerotiske plaques vil blive udført med en plakdefinition af en fokal læsion, der overstiger intima-media-tykkelsen med mindst 50 % eller når en absolut tykkelse på mindst 1,5 mm i to ortogonale projektioner. Scoring af aterosklerotiske plaques udføres i henhold til metodikken fra Rotterdam-undersøgelsen. Tilstedeværelsen af ​​mindst én plak i hvert segment af den ekstrakranielle halspulsåre (opdelt i den fælles halspulsåren og bulben, den indre halspulsåren og den ydre halspulsåren) på begge sider får 1 point. Således varierer carotis plaque score fra 0 (fravær af plaques) til 6 (plaques til stede i alle segmenter på begge sider).

   Ekkosporing af den fælles halspulsåre vil blive brugt til at vurdere arteriel stivhed udtrykt ved β-stivhedsindekset og pulsbølgehastigheden. Målinger vil blive udført ved den fælles halspulsåre 2 cm proksimalt i forhold til pæren på begge sider. β-stivhedsindekset vil blive beregnet som: β = ln (P_max / P_min) / [(D_max - D_min / D_min)], hvor P_max = det systoliske blodtryk, P_min = det diastoliske tryk; D_max = den maksimale arterielle diameter og D_min = den minimale arterielle diameter. Pulsbølgehastighed (PWV) vil blive beregnet som: PWV = √ ((β x P_min) / 2ρ)); ρ = 1050 kg/m³.

5. Vurdering af endotelfunktion af de digitale arterier

   Endotelfunktionen af ​​de digitale arterier vil blive målt ved digital plethymografi med EndoPat 2000, Itamar Medical REF, Caesarea, Israel, Softwareversion 3.3.x og udtrykt som Reactive Hyperaemia Index (RHI) og Augmentation Index (AI). Ændringer i arteriel tonus fremkaldes ved at skabe en nedstrøms hyperæmisk respons induceret af en standard 5-minutters okklusion af brachialisarterien (ved hjælp af en blodtryksmanchet, oppustet til 60 mmHg over det arterielle blodtryk). Når manchetten frigøres, forårsager stigningen i blodgennemstrømningen endotelafhængig flowmedieret dilatation (FMD), som viser sig som reaktiv hyperæmi. Et forhold mellem post-okklusion og præ-okklusion beregnes af EndoPAT-software, og og A) bestemmes. Resultaterne er normaliseret til en hjertefrekvens på 75/min.

6. Måling af coronararterie-calciumbelastningen

   Calciumbelastningen af ​​kranspulsårer måles med en Biograph M 128-rækket PET-CT-scanner (Siemens, Erlangen, Tyskland). Scanning udføres fra bunden til hjertets spids. Der anvendes en ikke-kontrastprotokol med sekventiel prospektiv EKG-udløsning. Rotationstiden er 0,33 sek, med en rørspænding på 120 kV, CARE Dose 4D og skivetykkelse 3 mm, uden skiveoverlapning. Efterbehandling udføres på Syngo Leonardo-arbejdsstationen. Den koronare calciumbyrde udtrykkes som Agatston-score. Evaluering af datasættet for hvert forsøgsperson udføres tre gange, og gennemsnitsværdien bruges til yderligere analyse.

7. Statistisk analyse

Alle sæt data vil blive testet for normalitet af fordeling ved hjælp af normal-kvintil-plottet, beregne korrelationskoefficienten og kontrollere den for den kritiske værdi, der ville berettige afvisning af normal fordeling med en α-fejl sandsynlighed på 0,05.

Normalfordelte data vil blive præsenteret som middelværdi og standardafvigelse, mens ikke-normalfordelte data vil blive præsenteret som median og interval mellem 1. og 3. kvartil.

Forskelle mellem forsøgspersoner med ET og kontrolemner ved første og anden undersøgelse vil blive testet ved chi-kvadrat-testen for diskrete variable, for normalfordelte kontinuerte variable ved den parrede Students t-test for uafhængige stikprøver og for ikke-normalfordelte kontinuerte variabler. variabler ved Mann-Whitney-testen for uafhængige stikprøver. P-værdier på < 0,05 vil blive betragtet som signifikante med en korrektion for flere sammenligninger.

Ændringer i vaskulær funktion og morfologi i den 4-årige observationsperiode vil blive sammenlignet mellem de to grupper ved log rank test. P-værdier på < 0,05 vil blive betragtet som signifikante.

Sammenhængen mellem parametrene for vaskulær funktion/morfologi og JAK2 V617F-allelbyrden vil blive vurderet af Pearson-korrelationskoefficienten.