Funkcja tętnic i miażdżyca tętnic w nadpłytkowości samoistnej

1. Pacjenci i osoby kontrolne

   Pacjenci są wybierani z bazy danych Kliniki Hematologii Uniwersyteckiego Centrum Medycznego w Ljubljanie w Słowenii, u których w latach 2011-2014 zdiagnozowano JAK2 V617F-dodatnią ET. Było 124 pacjentów z ET dodatnim pod względem JAK2, spośród tych 61 nie miało w wywiadzie klinicznie jawnej miażdżycowej choroby naczyń (zawał mięśnia sercowego, dusznica bolesna, choroba tętnic obwodowych, choroba aorty, przemijający atak niedokrwienny lub udar niedokrwienny). 40 pacjentów (14 mężczyzn i 26 kobiet) z ET JAK2 V617F dodatnim bez jawnej klinicznie choroby układu sercowo-naczyniowego podpisało świadomą zgodę i zostało włączonych do badania w latach 2014 - 2015 na pierwsze badanie, a 36 (12 mężczyzn i 24 kobiet) oczekuje się uczestniczyć również w latach 2018-19.

   Grupę kontrolną wybiera się spośród zdrowych pracowników Uniwersyteckiego Centrum Medycznego w Ljubljanie i ich bliskich. Jest dopasowywany do grupy pacjentów pod względem rozkładu wieku i płci oraz klasycznych czynników ryzyka chorób sercowo-naczyniowych. W pierwszym egzaminie uczestniczyły 42 osoby (16 mężczyzn i 26 kobiet), aw drugim egzaminie weźmie udział co najmniej 38 osób (14 mężczyzn i 24 kobiety).

2. Pomiary bazowe

   Każdy uczestnik wypełni kwestionariusz dotyczący historii chorób układu krążenia w rodzinie, osobistej historii medycznej, palenia tytoniu i przyjmowanych leków. Zostanie przeprowadzone badanie fizykalne, w tym pomiary wzrostu, masy ciała, obwodu talii, skurczowego i rozkurczowego ciśnienia krwi. Pobrana zostanie krew do analizy laboratoryjnej pełnej morfologii krwi, elektrolitów, lipidów w surowicy, testów czynnościowych wątroby, mocznika, kreatyniny i markerów stanu zapalnego.

   10-letnie ryzyko choroby niedokrwiennej serca (CHD) i ogólnej choroby sercowo-naczyniowej (CVD) zostanie obliczone przy użyciu równania ryzyka Framinghama.

3. Obciążenie allelem JAK2 V617F/G1849T

   Zestaw ipsogen JAK2 MutaQuant, Qiagen (ZDA) (nr ref.: 673523) będzie używany do wykrywania i oznaczania ilościowego allelu JAK2 V617F/G1849T w genomowym DNA wyekstrahowanym z krwi obwodowej pacjentów i osób kontrolnych. Starter specyficzny dla SNP selektywnie amplifikuje allel JAK2 V617F, który jest wykrywany za pomocą instrumentu qPCR w czasie rzeczywistym, który określa ilościowo produkty PCR. Obciążenie allelem JAK2 V617F zostanie obliczone i wyrażone jako procent zmutowanych alleli JAK2 V617F w całym zapisie JAK2. Analiza wszystkich próbek zostanie przeprowadzona w laboratorium Oddziału Hematologii Uniwersyteckiego Centrum Medycznego w Ljubljanie.

4. Badanie USG tętnic szyjnych

   Do badania tętnic szyjnych zewnątrzczaszkowych wykorzystany zostanie ultrasonograf Aloka Prosound α7 (Hitachi Aloka Medical, Ltd., Japonia) z liniową sondą naczyniową pracującą na częstotliwości 5-13 MHz. Zbadane zostaną tętnice szyjne wspólne, wewnętrzne i zewnętrzne po obu stronach. Przy każdym badaniu pomiary będą wykonywane dwukrotnie i wyliczane będą ich wartości średnie. Badanie USG będzie wykonywane przez tego samego ultrasonografa na obu wizytach wszystkich uczestników.

   Grubość błony wewnętrznej i środkowej będzie mierzona 2 cm proksymalnie od opuszki tętnicy szyjnej wspólnej po obu stronach. Zostanie wykonane badanie przesiewowe tętnic szyjnych zewnątrzczaszkowych w kierunku blaszek miażdżycowych, z blaszką definiowaną jako zmiana ogniskowa, przekraczająca grubość błony wewnętrznej i środkowej o co najmniej 50% lub osiągająca bezwzględną grubość co najmniej 1,5 mm w dwóch prostopadłych projekcjach. Ocenę blaszek miażdżycowych przeprowadza się zgodnie z metodologią z badania rotterdamskiego. Obecność co najmniej jednej blaszki w każdym segmencie zewnątrzczaszkowego łożyska tętnicy szyjnej (podzielonego na tętnicę szyjną wspólną i opuszki, tętnicę szyjną wewnętrzną i tętnicę szyjną zewnętrzną) po obu stronach ocenia się na 1 punkt. Tak więc ocena blaszek szyjnych mieści się w zakresie od 0 (brak blaszek) do 6 (blaszki obecne we wszystkich segmentach po obu stronach).

   Echo-śledzenie tętnicy szyjnej wspólnej posłuży do oceny sztywności tętnicy wyrażonej wskaźnikiem β-sztywności i szybkości fali tętna. Pomiary zostaną wykonane na wspólnej tętnicy szyjnej 2 cm proksymalnie do opuszki po obu stronach. Wskaźnik β-sztywności zostanie obliczony jako: β = ln (P_max / P_min) / [(D_max - D_min / D_min)], gdzie P_max = ciśnienie skurczowe krwi, P_min = ciśnienie rozkurczowe; D_max = maksymalna średnica tętnicy i D_min = minimalna średnica tętnicy. Prędkość fali tętna (PWV) zostanie obliczona jako: PWV = √ ((β x P_min) / 2ρ)); ρ = 1050 kg/m³.

5. Ocena funkcji śródbłonka tętnic palców

   Czynność śródbłonka tętnic palców będzie mierzona za pomocą cyfrowej pletymografii za pomocą EndoPat 2000, Itamar Medical REF, Cezarea, Izrael, wersja oprogramowania 3.3.x i wyrażone jako wskaźnik przekrwienia reaktywnego (RHI) i wskaźnik augmentacji (AI). Zmiany w napięciu tętniczym są wywoływane przez wywołanie odpowiedzi przekrwienia w dół, indukowanej standardowym 5-minutowym zamknięciem tętnicy ramiennej (za pomocą mankietu do pomiaru ciśnienia krwi, napompowanego do 60 mmHg powyżej ciśnienia krwi tętniczej). Po zwolnieniu mankietu gwałtowny wzrost przepływu krwi powoduje zależne od śródbłonka rozszerzenie zależne od przepływu (FMD), które objawia się reaktywnym przekrwieniem. Stosunek pookluzji do preokluzji oblicza się za pomocą oprogramowania EndoPAT i określa się i A). Wyniki normalizuje się do częstości akcji serca 75/min.

6. Pomiar obciążenia wapniem tętnicy wieńcowej

   Obciążenie tętnic wieńcowych mierzono za pomocą skanera Biograph M 128-rzędowego PET-CT (Siemens, Erlangen, Niemcy). Skanowanie odbywa się od podstawy do wierzchołka serca. Stosowany jest protokół bez kontrastu z sekwencyjnym prospektywnym wyzwalaniem EKG. Czas rotacji wynosi 0,33 s, przy napięciu lampy 120 kV, CARE Dose 4D i grubości warstwy 3 mm, bez nakładania się warstw. Post-processing odbywa się na stacji roboczej Syngo Leonardo. Obciążenie wieńcowe wapniem wyraża się w skali Agatstona. Ocenę zbioru danych każdego badanego przeprowadza się trzykrotnie, a do dalszej analizy wykorzystuje się wartość średnią.

7. Analiza statystyczna

Wszystkie zestawy danych zostaną przetestowane pod kątem normalności rozkładu przy użyciu wykresu normalnego kwintyla, obliczając współczynnik korelacji i sprawdzając go pod kątem wartości krytycznej, która uzasadniałaby odrzucenie rozkładu normalnego z prawdopodobieństwem błędu α równym 0,05.

Dane o rozkładzie normalnym zostaną przedstawione jako średnia i odchylenie standardowe, natomiast dane o rozkładzie nienormalnym zostaną przedstawione jako mediana i rozstęp między 1. a 3. kwartylem.

Różnice między osobami z ET a osobami z grupy kontrolnej na pierwszym i drugim badaniu będą sprawdzane za pomocą testu chi-kwadrat dla zmiennych dyskretnych, dla zmiennych ciągłych o rozkładzie normalnym za pomocą testu t-Studenta dla par niezależnych prób i dla zmiennych ciągłych o rozkładzie innym niż normalny zmienne testem Manna-Whitneya dla prób niezależnych. Wartości p < 0,05 będą uważane za istotne z poprawką na wielokrotne porównania.

Zmiany funkcji i morfologii naczyń w 4-letnim okresie obserwacji zostaną porównane między dwiema grupami za pomocą testu log-rank. Wartości p < 0,05 będą uważane za istotne.

Związek między parametrami funkcji/morfologii naczyń a obciążeniem allelem JAK2 V617F zostanie oceniony za pomocą współczynnika korelacji Pearsona.