Valtimotoiminta ja ateroskleroosi välttämättömässä trombosytemiassa

1. Potilaat ja kontrollikohteet

   Potilaat valitaan Slovenian yliopistollisen lääketieteellisen keskuksen Ljubljanan hematologian osaston tietokannasta, joille diagnosoitiin JAK2 V617F -positiivinen ET vuosina 2011–2014. JAK2-positiivisia ET-potilaita oli 124, joista 61:llä ei ollut henkilökohtaista kliinisesti ilmeistä ateroskleroottista verisuonisairautta (sydäninfarkti, angina pectoris, ääreisvaltimotauti, aortasairaus, ohimenevä iskeeminen kohtaus tai iskeeminen aivohalvaus). 40 potilasta (14 miestä ja 26 naista), joilla oli JAK2 V617F -positiivinen ET ilman kliinisesti ilmeistä sydän- ja verisuonitautia, allekirjoitti tietoisen suostumuksen ja otettiin mukaan tutkimukseen vuosina 2014-2015 ensimmäistä tutkimusta varten, ja heistä 36:ta (12 miestä ja 24 naista) odotetaan. osallistua myös 2018-19.

   Kontrolliryhmä valitaan Ljubljanan yliopistollisen lääketieteellisen keskuksen terveistä työntekijöistä ja heidän omaisistaan. Se yhdistetään potilasryhmään ikä- ja sukupuolijakauman sekä sydän- ja verisuonitautien klassisten riskitekijöiden perusteella. Ensimmäiseen tutkimukseen osallistui 42 henkilöä (16 miestä ja 26 naista) ja vähintään 38 (14 miestä ja 24 naista) osallistuvan toiseen tutkimukseen.

2. Perusmittaukset

   Jokainen osallistuja täyttää kyselylomakkeen, jossa käsitellään sydän- ja verisuonisairauksien sukuhistoriaa, henkilökohtaista sairaushistoriaa, tupakointitilaa ja lääkkeitä. Tehdään fyysinen tarkastus, joka sisältää pituuden, painon, vyötärön ympärysmitan, systolisen ja diastolisen verenpaineen mittaukset. Verinäyte otetaan laboratorioanalyysiä varten täydellisestä verisolumäärästä, elektrolyyttistä, seerumin lipideistä, maksan toimintakokeista, ureasta, kreatiniinista ja tulehdusmerkkiaineista.

   Sepelvaltimotaudin (CHD) ja yleisen sydän- ja verisuonitaudin (CVD) 10 vuoden riski lasketaan käyttämällä Framinghamin riskiyhtälöä.

3. JAK2 V617F/G1849T alleelitaakka

   IPsogen JAK2 MutaQuant Kit, Qiagen (ZDA) (viitenumero 673523) käytetään JAK2 V617F/G1849T alleelin havaitsemiseen ja kvantifiointiin potilaiden ja myös kontrollihenkilöiden ääreisverestä erotetussa genomisessa DNA:ssa. SNP-spesifinen aluke vahvistaa selektiivisesti JAK2 V617F -alleelin, joka havaitaan reaaliaikaisella qPCR-laitteella, joka kvantifioi PCR-tuotteet. JAK2 V617F -alleelitaakka lasketaan ja ilmaistaan ​​JAK2 V617F mutatoituneiden alleelien prosenttiosuutena koko JAK2-tietueessa. Analyysi tehdään Ljubljanan yliopistollisen lääketieteellisen keskuksen hematologian laitoksen laboratoriossa kaikille näytteille.

4. Kaulavaltimon ultraäänitutkimus

   Ekstrakraniaalisten kaulavaltimoiden tutkimiseen käytetään ultraäänilaitetta Aloka Prosound α7 (Hitachi Aloka Medical, Ltd., Japani) lineaarisen verisuonisondin kanssa, joka toimii taajuudella 5-13 MHz. Yhteiset, sisäiset ja ulkoiset kaulavaltimot tutkitaan molemmilta puolilta. Jokaisessa tutkimuksessa mittaukset tehdään kahdesti ja niiden keskiarvot lasketaan. Ultraäänitutkimuksen tekee sama ultraäänilääkäri molemmilla käynneillä kaikille osallistujille.

   Intima-median paksuus mitataan 2 cm proksimaalista yhteisen kaulavaltimon sipulia molemmilta puolilta. Suoritetaan ekstrakraniaalisten kaulavaltimoiden seulonta ateroskleroottisten plakkien varalta, jolloin plakin määritelmä on fokaalinen leesio, joka ylittää intima-median paksuuden vähintään 50 % tai saavuttaa vähintään 1,5 mm:n absoluuttisen paksuuden kahdessa ortogonaalisessa projektiossa. Ateroskleroottisten plakkien pisteytys tehdään Rotterdamin tutkimuksen metodologian mukaisesti. Vähintään yhden plakin läsnäolo ekstrakraniaalisen kaulavaltimon kussakin segmentissä (jaettu yhteiseen kaulavaltimoon ja sipuliin, sisäiseen kaulavaltimoon ja ulkoiseen kaulavaltimoon) kummallakin puolella, arvostetaan 1 pisteellä. Siten kaulavaltimon plakin pistemäärä vaihtelee 0:sta (plakkien puuttuminen) 6:een (plakkeja on kaikissa segmenteissä molemmilla puolilla).

   Yhteisen kaulavaltimon kaikuseurantaa käytetään valtimon jäykkyyden arvioimiseen β-jäykkyysindeksillä ja pulssiaallon nopeudella. Mittaukset tehdään yhteisestä kaulavaltimosta 2 cm proksimaalisesti sipulia molemmilta puolilta. β-jäykkyysindeksi lasketaan seuraavasti: β = ln (P_max / P_min) / [(D_max - D_min / D_min)], missä P_max = systolinen verenpaine, P_min = diastolinen paine; D_max = valtimon suurin halkaisija ja D_min = valtimon pienin halkaisija. Pulssiaallon nopeus (PWV) lasketaan seuraavasti: PWV = √ ((β x P_min) / 2ρ)); ρ = 1050 kg/m³.

5. Digitaalisten valtimoiden endoteelin toiminnan arviointi

   Digitaalisten valtimoiden endoteelin toiminta mitataan digitaalisella pletymografialla EndoPat 2000:lla, Itamar Medical REF, Caesarea, Israel, ohjelmistoversio 3.3.x ja ilmaistaan ​​reaktiivisena hyperemiaindeksinä (RHI) ja augmentaatioindeksinä (AI). Muutokset valtimon sävyssä saadaan aikaan luomalla alavirran hyperemiavaste, jonka indusoi olkapäävaltimon normaali 5 minuutin tukos (käyttämällä verenpainemansettia, joka on täytetty 60 mmHg valtimon verenpaineen yläpuolelle). Kun mansetti vapautetaan, verenvirtauksen nousu aiheuttaa endoteeliriippuvaisen virtausvälitteisen laajentumisen (FMD), joka ilmenee reaktiivisena hyperemiana. EndoPAT-ohjelmisto laskee tukkeutumisen jälkeisen suhde ennen tukkeutumista ja ja A) määritetään. Tulokset normalisoidaan sykkeeksi 75/min.

6. Sepelvaltimon kalsiumkuorman mittaus

   Sepelvaltimoiden kalsiumkuormitus mitataan Biograph M 128-rivisellä PET-CT-skannerilla (Siemens, Erlangen, Saksa). Skannaus tehdään sydämen tyvestä kärkeen. Käytetään ei-kontrastiprotokollaa, jossa on peräkkäinen mahdollinen EKG-liipaisu. Pyörimisaika on 0,33 sekuntia, putken jännite 120 kV, CARE Dose 4D ja viipaleen paksuus 3 mm, ilman päällekkäisyyksiä. Jälkikäsittely tehdään Syngo Leonardo -työasemalla. Sepelvaltimon kalsiumkuorma ilmaistaan ​​Agatstonin pistemääränä. Jokaisen tutkittavan aineiston arviointi suoritetaan kolme kertaa ja keskiarvoa käytetään jatkoanalyysiin.

7. Tilastollinen analyysi

Kaikki datajoukot testataan jakauman normaaliuden suhteen käyttämällä normaalikvintiilikäyrää, laskemalla korrelaatiokerroin ja tarkistamalla sen kriittisen arvon, joka oikeuttaisi normaalijakauman hylkäämisen α-virhetodennäköisyydellä 0,05.

Normaalisti jakautuneet tiedot esitetään keskiarvona ja keskihajonnana, kun taas ei-normaalijakauman tiedot esitetään mediaanina ja vaihteluvälinä 1. ja 3. kvartiilin välillä.

Erot koehenkilöiden, joilla on ET- ja vertailukoehenkilöt ensimmäisessä ja toisessa tutkimuksessa, testataan khin neliötestillä diskreeteille muuttujille, normaalijakautuneille jatkuville muuttujille parillisella Studentin t-testillä itsenäisille näytteille ja ei-normaalijakautuneille jatkuville näytteille. muuttujat Mann-Whitneyn testillä riippumattomille näytteille. P-arvoja < 0,05 pidetään merkittävinä useiden vertailujen korjauksella.

Verisuonten toiminnan ja morfologian muutoksia 4 vuoden havaintojakson aikana verrataan näiden kahden ryhmän välillä log rank -testillä. P-arvoja < 0,05 pidetään merkittävinä.

Verisuonten toiminnan/morfologian parametrien ja JAK2 V617F -alleelitaakan välinen yhteys arvioidaan Pearson-korrelaatiokertoimella.