본태성혈소판증가증 환자의 동맥기능과 ​​죽상경화증

1. 환자 및 대조군

   환자는 2011년에서 2014년 사이에 JAK2 V617F 양성 ET로 진단된 슬로베니아 류블랴나 대학 의료 센터의 혈액학과 데이터베이스에서 선택됩니다. 124명의 JAK2 양성 ET 환자가 있었고, 이들 중 61명은 임상적으로 명백한 죽상경화성 혈관 질환(심근 경색, 협심증, 말초 동맥 질환, 대동맥 질환, 일과성 허혈 발작 또는 허혈성 뇌졸중)의 개인 병력이 없었습니다. 임상적으로 명백한 심혈관 질환이 없는 JAK2 V617F 양성 ET를 가진 40명의 환자(남성 14명 및 여성 26명)가 정보에 입각한 동의서에 서명하고 첫 번째 검사를 위해 2014-2015년에 연구에 등록했으며 이 중 36명(남성 12명 및 여성 24명)이 예상됩니다. 2018-19년에도 참여합니다.

   통제 그룹은 University Medical Center Ljubljana의 건강한 직원과 그 친척 중에서 선택됩니다. 그것은 연령과 성별 분포 및 심혈관 질환에 대한 고전적 위험 인자에 대한 환자 그룹과 일치합니다. 1차 심사에는 42명(남 16명, 여 26명)이, 2차 심사에는 최소 38명(남 14명, 여 24명)이 참가할 예정이다.

2. 기준선 측정

   각 참가자는 심혈관 질환의 가족력, 개인 병력, 흡연 상태 및 약물에 대한 설문지를 작성합니다. 신장, 체중, 허리둘레, 수축기 및 확장기 혈압 측정을 포함한 신체 검사가 수행됩니다. 전체 혈구 수, 전해질, 혈청 지질, 간 기능 검사, 요소, 크레아티닌 및 염증 표지자의 실험실 분석을 위해 혈액을 채취합니다.

   관상 동맥 심장 질환(CHD) 및 일반 심혈관 질환(CVD)의 10년 위험은 Framingham 위험 방정식을 사용하여 계산됩니다.

3. JAK2 V617F/G1849T 대립 유전자 부담

   ipsogen JAK2 MutaQuant Kit, Qiagen(ZDA)(Ref: No. 673523)은 환자 및 대조군 피험자의 말초 혈액에서 추출한 게놈 DNA에서 JAK2 V617F/G1849T 대립유전자의 검출 및 정량화에 사용됩니다. SNP 특이적 프라이머는 PCR 산물을 정량화하는 실시간 qPCR 기기로 검출되는 JAK2 V617F 대립유전자를 선택적으로 증폭합니다. JAK2 V617F 대립유전자 부담을 계산하고 전체 JAK2 레코드에서 JAK2 V617F 돌연변이 대립유전자의 백분율로 표시합니다. 분석은 모든 샘플에 대해 University Medical Center Ljubljana의 혈액학과 실험실에서 수행됩니다.

4. 경동맥 초음파 검사

   두개외 경동맥 검사를 위해 초음파 기계 Aloka Prosound α7(Hitachi Aloka Medical, Ltd., 일본)을 5-13MHz의 주파수에서 작동하는 선형 혈관 탐침과 함께 사용합니다. 양쪽의 온목동맥, 내경동맥, 외경동맥을 검사합니다. 각 검사에서 측정은 두 번 수행되고 평균값이 계산됩니다. 초음파 검사는 모든 참가자의 두 방문에서 동일한 초음파 기사에 의해 수행됩니다.

   내막-중막 두께는 양쪽 총경동맥 구근에 대해 근위 2cm에서 측정됩니다. 죽상경화반에 대한 두개외 경동맥의 스크리닝은 초점 병변의 플라크 정의와 함께 적어도 50% 동안 내중막 두께를 초과하거나 2개의 직교 투영에서 최소 1.5mm의 절대 두께에 도달하는 것으로 수행됩니다. 죽상동맥경화반의 채점은 로테르담 연구의 방법론에 따라 수행됩니다. 양측의 두개외 경동맥층(총경동맥과 구근, 내경동맥과 외경동맥으로 나누어짐)의 각 분절에 적어도 하나의 플라크가 존재하면 1점을 얻는다. 따라서 경동맥 플라크 점수는 0(플라크 없음)에서 6(양측의 모든 세그먼트에 플라크 존재) 범위입니다.

   총경동맥의 에코 추적은 β-강성 지수와 맥파 속도로 표현되는 동맥 경직도를 평가하는 데 사용됩니다. 측정은 양쪽의 전구에 대해 근위 2cm의 총경동맥에서 수행됩니다. β-강성 지수는 다음과 같이 계산됩니다. β = ln (P_max / P_min) / [(D_max - D_min / D_min)], 여기서 P_max = 수축기 혈압, P_min = 확장기 혈압; D_max = 최대 동맥 직경 및 D_min = 최소 동맥 직경. 맥파 속도(PWV)는 다음과 같이 계산됩니다. PWV = √((β x P_min) / 2ρ)); ρ = 1050kg/m³.

5. 디지털 동맥의 내피 기능 평가

   디지털 동맥의 내피 기능은 EndoPat 2000, Itamar Medical REF, Caesarea, Israel, 소프트웨어 버전 3.3.x를 사용하여 디지털 혈량 측정법으로 측정됩니다. 반응성 충혈 지수(RHI) 및 증강 지수(AI)로 표현된다. 동맥 색조의 변화는 상완 동맥의 표준 5분 폐색(혈압 커프 사용, 동맥 혈압보다 60mmHg 높게 팽창)에 의해 유도된 하류 충혈 반응을 생성함으로써 유도됩니다. 커프가 풀리면 혈류의 급증으로 인해 반응성 충혈로 나타나는 내피 의존성 흐름 매개 확장(FMD)이 발생합니다. 사전 폐색 비율에 대한 폐색 후 비율은 EndoPAT 소프트웨어에 의해 계산되고 및 A)가 결정됩니다. 결과는 심박수 75/분으로 정규화됩니다.

6. 관상동맥 칼슘부하 측정

   관상 동맥의 칼슘 부담은 Biograph M 128-row PET-CT 스캐너(Siemens, Erlangen, Germany)로 측정됩니다. 스캐닝은 심장의 기저부에서 정점까지 이루어집니다. 순차 예상 ECG 트리거링이 있는 비조영 프로토콜이 사용됩니다. 회전 시간은 0.33초이고 튜브 전압은 120kV, CARE Dose 4D 및 슬라이스 두께는 3mm이며 슬라이스가 겹치지 않습니다. 사후 처리는 Syngo Leonardo 워크스테이션에서 수행됩니다. 관상 동맥 칼슘 부담은 Agatston 점수로 표현됩니다. 모든 연구 주제의 데이터 세트 평가는 세 번 수행되며 평균값은 추가 분석에 사용됩니다.

7. 통계 분석

모든 데이터 세트는 정상-분위 플롯을 사용하여 분포의 정규성을 테스트하고 상관 계수를 계산하고 α-오류 확률이 0.05인 정규 분포를 거부할 수 있는 임계값을 확인합니다.

정규 분포된 데이터는 평균 및 표준 편차로 표시되는 반면 비정규 분포 데이터는 1사분위수와 3사분위수 사이의 중앙값 및 범위로 표시됩니다.

1차 및 2차 검사에서 ET 피험자와 대조군 피험자의 차이는 이산변수에 대해서는 카이제곱 검정으로, 독립표본에 대해서는 쌍체 스튜던트 t-검정으로 정규분포 연속변수에 대해, 비정규분포 연속변수에 대해서는 검정으로 검정한다. 독립 샘플에 대한 Mann-Whitney 검정에 의한 변수. < 0.05의 P-값은 다중 비교에 대한 보정으로 중요한 것으로 간주됩니다.

4년 관찰 기간 동안의 혈관 기능 및 형태의 변화를 로그 순위 테스트로 두 그룹 간에 비교합니다. < 0.05의 P-값은 유의한 것으로 간주됩니다.

혈관 기능/형태학의 매개변수와 JAK2 V617F 대립유전자 부하 사이의 연관성은 Pearson 상관 계수에 의해 평가될 것입니다.