Função Arterial e Aterosclerose na Trombocitemia Essencial

1. Pacientes e sujeitos de controle

   Os pacientes são selecionados do banco de dados do Departamento de Hematologia do University Medical Center Ljubljana, Eslovênia, que foram diagnosticados com JAK2 V617F positivo ET entre 2011 e 2014. Havia 124 pacientes ET positivos para JAK2, entre os quais 61 não tinham história pessoal de doença vascular aterosclerótica clinicamente manifesta (infarto do miocárdio, angina pectoris, doença arterial periférica, doença aórtica, ataque isquêmico transitório ou acidente vascular cerebral isquêmico). 40 pacientes (14 homens e 26 mulheres) com TE positivo JAK2 V617F sem doença cardiovascular clinicamente aparente assinaram o consentimento informado e foram incluídos no estudo em 2014 - 2015 para o primeiro exame e 36 (12 homens e 24 mulheres) deles são esperados para participar também em 2018-19.

   O grupo de controle é selecionado entre funcionários saudáveis ​​do University Medical Center Ljubljana e seus parentes. É pareado com o grupo de pacientes para distribuição de idade e sexo e fatores de risco clássicos para doença cardiovascular. 42 indivíduos (16 homens e 26 mulheres) participaram do primeiro exame e pelo menos 38 (14 homens e 24 mulheres) devem participar do segundo exame.

2. Medições de linha de base

   Cada participante preencherá um questionário sobre histórico familiar de doenças cardiovasculares, histórico médico pessoal, tabagismo e medicamentos. Um exame físico será realizado, incluindo medidas de altura, peso, circunferência da cintura, pressão arterial sistólica e diastólica. O sangue será coletado para análise laboratorial de hemograma completo, eletrólitos, lipídios séricos, testes de função hepática, uréia, creatinina e marcadores inflamatórios.

   O risco de 10 anos de doença cardíaca coronária (CHD) e doença cardiovascular geral (DCV) será calculado usando a equação de risco de Framingham.

3. Carga do alelo JAK2 V617F/G1849T

   O kit ipsogen JAK2 MutaQuant, Qiagen (ZDA) (Ref: No. 673523) será utilizado para a detecção e quantificação do alelo JAK2 V617F/G1849T em DNA genômico extraído de sangue periférico de pacientes e também de controles. Um primer específico SNP amplifica seletivamente o alelo JAK2 V617F que é detectado com um instrumento qPCR em tempo real que quantifica os produtos de PCR. A carga do alelo JAK2 V617F será calculada e expressa como a porcentagem de alelos mutantes JAK2 V617F ao longo de todo o registro JAK2. A análise será feita no laboratório do Departamento de Hematologia do University Medical Center Ljubljana para todas as amostras.

4. Exame Ultrassonográfico da Artéria Carótida

   Para o exame das artérias carótidas extracranianas será utilizado um aparelho de ultrassom Aloka Prosound α7 (Hitachi Aloka Medical, Ltd., Japão) com sonda vascular linear operando na frequência de 5-13 MHz. Serão examinadas as artérias carótidas comum, interna e externa de ambos os lados. A cada exame, as medidas serão feitas duas vezes e seus valores médios serão calculados. O exame de ultrassom será feito pelo mesmo ultrassonografista nas duas visitas de todos os participantes.

   A espessura médio-intimal será medida 2 cm proximal ao bulbo da artéria carótida comum em ambos os lados. Será realizada triagem das artérias carótidas extracranianas para placas ateroscleróticas, com definição de placa como lesão focal, excedendo a espessura médio-intimal em pelo menos 50% ou atingindo espessura absoluta de pelo menos 1,5 mm em duas projeções ortogonais. A pontuação das placas ateroscleróticas é feita de acordo com a metodologia do Rotterdam Study. A presença de pelo menos uma placa em cada segmento do leito arterial carotídeo extracraniano (dividido em artéria carótida comum e bulbo, artéria carótida interna e artéria carótida externa) em ambos os lados é pontuada com 1 ponto. Assim, a pontuação da placa carotídea varia de 0 (ausência de placas) a 6 (placas presentes em todos os segmentos de ambos os lados).

   O eco-rastreamento da artéria carótida comum será usado para avaliar a rigidez arterial expressa pelo índice de rigidez β e a velocidade da onda de pulso. As medições serão feitas na artéria carótida comum 2 cm proximal ao bulbo em ambos os lados. O índice de rigidez β será calculado como: β = ln (P_max / P_min) / [(D_max - D_min / D_min)], onde P_max = pressão arterial sistólica, P_min = pressão diastólica; D_max = o diâmetro arterial máximo e D_min = o diâmetro arterial mínimo. A velocidade da onda de pulso (PWV) será calculada como: PWV = √ ((β x P_min) / 2ρ)); ρ = 1050 kg/m³.

5. Avaliação da Função Endotelial das Artérias Digitais

   A função endotelial das artérias digitais será medida por pletimografia digital com EndoPat 2000, Itamar Medical REF, Caesarea, Israel, Software Versão 3.3.x e expressa como Índice de Hiperemia Reativa (RHI) e Índice de Aumento (IA). Alterações no tônus ​​arterial são provocadas pela criação de uma resposta hiperêmica a jusante induzida por uma oclusão padrão de 5 minutos da artéria braquial (usando um manguito de pressão arterial, inflado a 60 mmHg acima da pressão arterial). Quando o manguito é liberado, o aumento do fluxo sanguíneo causa dilatação mediada pelo fluxo dependente do endotélio (FMD), que se manifesta como hiperemia reativa. Uma relação pós-oclusão para pré-oclusão é calculada pelo software EndoPAT e a e A) são determinadas. Os resultados são normalizados para uma frequência cardíaca de 75/min.

6. Medição da Carga de Cálcio da Artéria Coronária

   A carga de cálcio das artérias coronárias é medida com um scanner PET-CT de 128 fileiras Biograph M (Siemens, Erlangen, Alemanha). A varredura é feita da base ao ápice do coração. É utilizado um protocolo sem contraste com disparo de ECG prospectivo sequencial. O tempo de rotação é de 0,33 seg, com tensão de tubo de 120 kV, CARE Dose 4D e espessura de corte de 3 mm, sem sobreposição de corte. O pós-processamento é feito na estação de trabalho Syngo Leonardo. A carga de cálcio coronariano é expressa como o escore de Agatston. A avaliação do conjunto de dados de cada sujeito do estudo é feita três vezes e o valor médio é usado para análise posterior.

7. Análise estatística

Todos os conjuntos de dados serão testados quanto à normalidade da distribuição usando o gráfico de quintil normal, calculando o coeficiente de correlação e verificando-o quanto ao valor crítico que justificaria a rejeição da distribuição normal com uma probabilidade de erro α de 0,05.

Os dados normalmente distribuídos serão apresentados como média e desvio padrão, enquanto os dados não normalmente distribuídos serão apresentados como mediana e variam entre o 1º e o 3º quartil.

Diferenças entre sujeitos com TE e controles no primeiro e segundo exame serão testadas pelo teste qui-quadrado para variáveis ​​discretas, para variáveis ​​contínuas normalmente distribuídas pelo teste t de Student pareado para amostras independentes e para contínuas não normalmente distribuídas variáveis ​​pelo teste de Mann-Whitney para amostras independentes. Valores de p < 0,05 serão considerados significativos com uma correção para comparações múltiplas.

Alterações na função e morfologia vascular no período de observação de 4 anos serão comparadas entre os dois grupos pelo teste de log rank. Valores de p < 0,05 serão considerados significativos.

A associação entre os parâmetros de função/morfologia vascular e a carga do alelo JAK2 V617F será avaliada pelo coeficiente de correlação de Pearson.