インフルエンザウイルス検出のための新規アッセイ

I. 背景

• 季節性インフルエンザウイルスは、年間 30 万～60 万人の死亡を引き起こしていると推定されています。 鳥インフルエンザ ウイルス H5N1、H7N9、H5N6 の致死率は 30% を超えています。 豚由来の豚インフルエンザウイルスは、人にも感染しています。
• 分子アッセイは現在、インフルエンザウイルスの検出に日常的に使用されています。 M 遺伝子は、この遺伝子のヌクレオチド配列がすべてのインフルエンザ A ウイルス間で比較的保存されているため、すべてのインフルエンザ A ウイルスの標的としてよく使用されます。 世界保健機関と米国疾病管理予防センター (CDC) は、インフルエンザ A ウイルス M 遺伝子の分子検出のためのプロトコルを公開しました。
• しかし、最近の研究では、M 遺伝子の変異により、この遺伝子をターゲットとする RT-PCR アッセイの感度が低下していることが示されています。 したがって、代替の保存された遺伝子を RT-PCR のターゲットとして使用することが重要です。 この研究の目的は、PB2 および NS 遺伝子セグメントに基づく 2 つの新しい RT-PCR アッセイを評価することです。

Ⅱ．研究の目的 - 2 つの新しい RT-PCR アッセイの感度と特異性を評価する

III.全体的な研究デザイン

• 調査官は、香港の公衆衛生研究所サービス支店でインフルエンザ A ウイルスについてテストされた、当社の研究室で市販のアッセイを使用して以前にインフルエンザ A ウイルスについてテストされた、アーカイブされた鼻咽頭および唾液標本をランダムに取得します。 これらの検体は、以下に示す 4 つの異なる RT-PCR アッセイによってインフルエンザ A ウイルスについて検査されます。

  1. PB2 遺伝子をターゲットとした新しい RT-PCR アッセイ
  2. NS遺伝子を標的とする当社の新しいRT-PCRアッセイ
  3. 世界保健機関が発表した M 遺伝子 RT-PCR

  4. 米国CDCが発表したM遺伝子RT-PCR

     感度、特異度、陽性的中率、陰性的中率が決定されます。

     IV. A型インフルエンザウイルスの核酸抽出とリアルタイム逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（RT-PCR）

• 唾液および鼻咽頭標本は、NucliSENS easyMAG (BioMerieux、Boxtel、オランダ) による全核酸 (TNA) 抽出にかけられます。
• A型インフルエンザウイルスのモノプレックスリアルタイムRT-PCRアッセイが実施されます。 M 遺伝子 RT-PCR 用のプライマーとプローブは、WHO と米国 CDC によって公開されています。

V. サンプルサイズ:

• 調査員は、以下を含む合計 320 検体に対して 4 つの RT-PCR アッセイすべてを実行します。
• 市販の分子アッセイまたは香港の公衆衛生研究所サービス支店で実施された検査によりインフルエンザA型陽性であると検査された80個の鼻咽頭検体
• 市販の分子アッセイまたは香港の公衆衛生研究所サービス支店で実施された検査により、インフルエンザAに対して陰性であると検査された80個の鼻咽頭検体
• 市販の分子アッセイでA型インフルエンザ陽性と判定された80個の唾液検体
• 市販の分子アッセイでA型インフルエンザ陰性と判定された80個の唾液検体