Ensayos novedosos para la detección del virus de la influenza

I. Antecedentes

• El virus de la influenza estacional causa entre 0,3 y 0,6 millones de muertes al año. El virus de la influenza aviar H5N1, H7N9 y H5N6 tiene una tasa de mortalidad superior al 30%. Los virus de la influenza porcina de los cerdos también han infectado a los humanos.
• Los ensayos moleculares ahora se usan de forma rutinaria en la detección de virus de influenza. El gen M se usa a menudo como objetivo para todos los virus de influenza A porque la secuencia de nucleótidos de este gen está relativamente conservada entre todos los virus de influenza A. La Organización Mundial de la Salud y los Centros para el Control y la Prevención de Enfermedades (CDC) de EE. UU. han publicado protocolos para la detección molecular del gen M del virus de la influenza A.
• Sin embargo, estudios recientes han demostrado que las mutaciones en el gen M han llevado a una sensibilidad reducida del ensayo RT-PCR dirigido a este gen. Por lo tanto, es importante utilizar genes conservados alternativos como objetivo de la RT-PCR. En este estudio, nuestro objetivo es evaluar dos nuevos ensayos de RT-PCR que se basan en el segmento de genes PB2 y NS

II. Objetivo del estudio: evaluar la sensibilidad y la especificidad de 2 nuevos ensayos de RT-PCR

tercero Diseño general del estudio

• Los investigadores recuperarán aleatoriamente muestras archivadas de saliva y nasofaringe que se analizaron previamente para detectar el virus de la influenza A utilizando ensayos disponibles comercialmente en nuestro laboratorio, y analizaron para detectar el virus de la influenza A en la sucursal del Servicio de Laboratorio de Salud Pública en Hong Kong. Estos especímenes se analizarán para detectar el virus de la influenza A mediante 4 ensayos de RT-PCR diferentes, como se indica a continuación:

  1. Nuestro nuevo ensayo RT-PCR dirigido al gen PB2
  2. Nuestro nuevo ensayo de RT-PCR dirigido al gen NS
  3. Gen M RT-PCR publicado por la Organización Mundial de la Salud

  4. RT-PCR del gen M publicado por los CDC de EE. UU.

     Se determinará la sensibilidad, la especificidad, el valor predictivo positivo y el valor predictivo negativo.

     IV. Extracción de ácido nucleico y reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa en tiempo real (RT-PCR) para el virus de la influenza A

• Las muestras de saliva y nasofaríngeas se someterán a la extracción de ácido nucleico total (TNA) mediante NucliSENS easyMAG (BioMerieux, Boxtel, Países Bajos).
• Se realizarán ensayos monoplex de RT-PCR en tiempo real para el virus de la influenza A. Los cebadores y las sondas para la RT-PCR del gen M han sido publicados por la OMS y los CDC de EE. UU.

V. Tamaño de la muestra:

• Los investigadores realizarán los 4 ensayos de RT-PCR en un total de 320 muestras, incluidos
• 80 muestras nasofaríngeas que dieron positivo para influenza A mediante ensayos moleculares disponibles comercialmente o mediante pruebas realizadas en la sucursal de servicios de laboratorio de salud pública en Hong Kong
• 80 muestras nasofaríngeas que dieron negativo para influenza A mediante ensayos moleculares disponibles comercialmente o mediante pruebas realizadas en la sucursal de servicios de laboratorio de salud pública en Hong Kong
• 80 muestras de saliva que dieron positivo para influenza A mediante ensayos moleculares disponibles comercialmente
• 80 muestras de saliva que dieron negativo para influenza A mediante ensayos moleculares disponibles comercialmente