인플루엔자 바이러스 검출을 위한 새로운 분석

나. 배경

• 계절 인플루엔자 바이러스는 연간 약 30만~60만 명의 사망을 초래합니다. 조류 인플루엔자 바이러스 H5N1, H7N9 및 H5N6은 치사율이 30% 이상입니다. 돼지에서 유래한 돼지 인플루엔자 바이러스도 사람을 감염시켰습니다.
• 분자 분석은 이제 인플루엔자 바이러스 검출에 일상적으로 사용됩니다. M 유전자는 모든 인플루엔자 A 바이러스 중에서 이 유전자의 염기서열이 상대적으로 보존되어 있기 때문에 모든 인플루엔자 A 바이러스의 표적으로 자주 사용된다. 세계 보건 기구와 미국 질병 통제 예방 센터(CDC)는 인플루엔자 A 바이러스 M 유전자의 분자 검출을 위한 프로토콜을 발표했습니다.
• 그러나 최근 연구에 따르면 M 유전자의 돌연변이로 인해 이 유전자를 대상으로 하는 RT-PCR 분석의 민감도가 감소하는 것으로 나타났습니다. 따라서 대체 보존 유전자를 RT-PCR의 표적으로 사용하는 것이 중요합니다. 이 연구에서 우리의 목표는 PB2 및 NS 유전자 세그먼트를 기반으로 하는 두 가지 새로운 RT-PCR 분석을 평가하는 것입니다.

II. 연구 목적 - 2개의 새로운 RT-PCR 분석법의 민감도 및 특이도 평가

III. 전반적인 연구 설계

• 조사관은 이전에 당사 실험실에서 상업적으로 이용 가능한 분석을 사용하여 인플루엔자 A 바이러스에 대해 테스트하고 홍콩의 Public Health Laboratory Service Branch에서 인플루엔자 A 바이러스에 대해 테스트한 보관된 비인두 및 타액 표본을 무작위로 검색합니다. 이 검체는 아래 나열된 4가지 RT-PCR 분석으로 인플루엔자 A 바이러스에 대해 테스트됩니다.

  1. PB2 유전자를 표적으로 하는 새로운 RT-PCR 분석
  2. NS 유전자를 표적으로 하는 새로운 RT-PCR 분석
  3. 세계보건기구에서 발표한 M 유전자 RT-PCR

  4. 미국 CDC에서 발표한 M 유전자 RT-PCR

     민감도, 특이도, 양성 예측값 및 음성 예측값을 결정합니다.

     IV. 인플루엔자 A 바이러스에 대한 핵산 추출 및 실시간 역전사 중합효소 연쇄반응(RT-PCR)

• 타액 및 비인두 표본은 NucliSENS easyMAG(BioMerieux, Boxtel, 네덜란드)에 의해 총 핵산(TNA) 추출됩니다.
• 인플루엔자 A 바이러스에 대한 Monoplex 실시간 RT-PCR 분석이 수행됩니다. M 유전자 RT-PCR에 대한 프라이머 및 프로브는 WHO 및 미국 CDC에 의해 공개되었습니다.

V. 샘플 크기:

• 조사관은 다음을 포함하여 총 320개의 표본에 대해 4가지 RT-PCR 분석을 모두 수행합니다.
• 상업적으로 이용 가능한 분자 분석 또는 홍콩의 Public Health Laboratory Services Branch에서 수행된 테스트를 통해 인플루엔자 A에 대해 양성 반응을 보인 80개의 비인두 검체
• 상업적으로 이용 가능한 분자 분석 또는 홍콩의 Public Health Laboratory Services Branch에서 수행된 테스트에서 인플루엔자 A에 대해 음성으로 테스트된 80개의 비인두 검체
• 상업적으로 이용 가능한 분자 분석에 의해 인플루엔자 A에 양성 반응을 보인 80개의 타액 표본
• 상업적으로 이용 가능한 분자 분석에 의해 인플루엔자 A에 대해 음성으로 테스트된 80개의 타액 표본