標準化されたアロニア メラノカルパ抽出物を 1 か月間摂取した場合の血液透析患者の貧血への影響

全身酸化還元状態の評価 血漿サンプルを使用して、次のプロオキシダントのレベルを測定しました: スーパーオキシドアニオンラジカル (O2-)、過酸化水素 (H2O2)、亜硝酸塩 (NO2-)、およびチオバルビツール酸反応性として測定された脂質過酸化の指数一方、スーパーオキシドジスムターゼ (SOD) およびカタラーゼ (CAT) の活性や還元型グルタチオン (GSH) のレベルなどの抗酸化防御システムのパラメーターは、赤血球溶解物サンプルで測定されました。

A) 脂質過酸化指数 (TBARS) 測定 血漿サンプル中の脂質過酸化の程度は、0.05 NaOH 中の 1% チオバルビツール酸を使用して TBARS を測定することによって推定されました。 530nm。 TBA 抽出物は、0.8 ml のサンプルと 0.4 ml のトリクロロ酢酸 (TCA) を組み合わせることによって得られました。その後、サンプルを氷上に 10 分間置き、6000 rpm で 15 分間遠心分離しました。 (1)。

b) 亜硝酸塩の測定 (NO2-)

一酸化窒素 (NO) は急速に分解して、安定した亜硝酸塩/硝酸塩生成物を形成します。 グリース試薬を用いてNO2-レベルを測定し、NO産生の指標とした。 血漿中の NO2 - 測定のために、0.1 ml の 3 N PCA (過塩素酸)、0.4 ml の 20 mM エチレンジアミン四酢酸 (EDTA)、および 0.2 ml の血漿を 15 分間氷上に置き、次に 6000 rpm で 15 分間遠心分離しました。 上清を捨てた後、220 μl の K2CO3 を加えました。 亜硝酸塩は 550 nm で測定されました。 (2)

1. スーパーオキシドアニオンラジカル測定 (O2-)

   血漿サンプル中のスーパーオキシド アニオン ラジカル濃度は、NTB (ニトロ ブルー テトラゾリウム) 試薬を使用して TRIS バッファー (アッセイ混合物) で測定しました。 測定は波長５３０ｎｍで行った。 (3)。

2. 過酸化水素の測定 (H2O2)

   H2O2 の測定は、ホースラディッシュ ペルオキシダーゼによって触媒される反応における H2O2 によるフェノールレッドの酸化に基づいていました。 800 mL の新しく調製したフェノールレッド溶液を使用して、200 マイクロリットルの灌流液または血漿を沈殿させました。続いて、（１：２０）ホースラディッシュペルオキシダーゼ（使用直前に調製）１０μＬを添加した。 H2O2 のレベルは 610 nm で測定されました (4)。

3. 還元型グルタチオン (GSH) の測定

   還元型グルタチオン (GSH) のレベルは、5,5-ジチオビス-6,2-ニトロ安息香酸による GSH 酸化に基づいて決定されました。 GSH 抽出物は、0.1% EDTA 0.1 ml、溶血物 400 μl、および沈殿溶液 750 μl (メタリン酸 1.67 g、EDTA 0.2 g、NaCl 30 g を含み、蒸留水で 100 ml まで満たす; 溶液は+4C°で3週間)。 GSH のレベルは 420 nm で測定されました (5)。

4. 抗酸化酵素（SOD、CAT）の測定

単離されたＲＢＣは、３体積の氷冷０．９ｍｍｏｌ／ｌ ＮａＣｌで３回洗浄され、約５０ｇ Ｈｂ／ｌを含有する溶血物がＣＡＴ活性の測定に使用された。 CAT バッファー、調製済み溶血物サンプル、および 10 mM H2O2 を CAT 測定に使用しました。 検出は 360 nm で行った。 ＳＯＤ活性はエピネフリン法で測定した。 溶血物を炭酸緩衝液と混合し、エピネフリンを添加した。 検出は 470 nm で行った (6-10)。

炎症状態の評価 患者の炎症状態を評価するために、以下のパラメーターを対象の両方の時点 (0 日目と 30 日目) で測定しました: 血清 C 反応性タンパク質濃度 - CRP および腫瘍壊死因子濃度 - TNF-α。

血清Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）濃度は、Ｏｌｙｍｐｕｓ ＡＵ６８０で比濁法により測定した。 正常な血清 CRP 濃度は ≤ 5 mg/L です。 微小炎症は、血清中の CRP 濃度が 5 mg/L と定義されています。

血漿ＴＮＦ－α濃度は、市販の高感度間接サンドイッチ酵素結合免疫吸着アッセイ（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）を使用する酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって決定した。

血液学的パラメータの評価

関心のある両方のポイントで、すべての患者の次の血液学的パラメーターの値が分析されました。

赤血球 (Er)、ヘモグロビン (Hb)、ヘマトクリット (Hct)、赤血球指数 - 平均赤血球容積 (MCV)、平均赤血球ヘモグロビン (MCH)、平均赤血球ヘモグロビン濃度 (MCHC)、血清乳酸脱水素酵素濃度 (LDH)、血清ハプトグロビン濃度と鉄の状態: 血清鉄濃度、フェリチン。総鉄結合能 (TIBC)、不飽和鉄結合能 (UIBC)、トランスフェリン飽和度 (TSAT)、ハプトグロビン。