Yhden kuukauden standardoidun aronia melanocarpa -uutteen kulutuksen vaikutukset hemodialyysipotilaiden anemiaan

Systeemisen redox-tilan arviointi Plasmanäytteitä käytettiin seuraavien prooksidanttien pitoisuuksien määrittämiseen: superoksidianioniradikaali (O2-), vetyperoksidi (H2O2), nitriitit (NO2-) ja lipidiperoksidaatioindeksi mitattuna tiobarbituurihapporeaktiivisena aineita (TBARS), kun taas erytrosyyttilysaattinäytteistä määritettiin antioksidanttipuolustusjärjestelmän parametrit, kuten superoksididismutaasin (SOD) ja katalaasin (CAT) aktiivisuus sekä pelkistyneen glutationin (GSH) taso.

A) Lipidiperoksidaatioindeksin (TBARS) määritys Lipidiperoksidaatioaste plasmanäytteissä arvioitiin mittaamalla TBARS käyttämällä 1 % tiobarbituurihappoa 0,05 NaOH:ssa, jota inkuboitiin näytteen kanssa 100 °C:ssa 15 minuuttia ja mitattiin 530 nm. TBA-uute saatiin yhdistämällä 0,8 ml näytettä ja 0,4 ml trikloorietikkahappoa (TCA); sen jälkeen näytteet laitettiin jäihin 10 minuutiksi ja sentrifugoitiin 15 minuuttia nopeudella 6000 rpm. (1).

b) Nitriitin määritys (NO2-)

Typpioksidi (NO) hajoaa nopeasti muodostaen stabiileja nitriitti/nitraattituotteita. NO2-taso mitattiin ja sitä käytettiin NO-tuotannon indeksinä käyttäen Griessin reagenssia. NO2:n määritystä varten plasmassa 0,1 ml 3 N PCA:ta (perkloridihappoa), 0,4 ml 20 mM etyleenidiamiinitetraetikkahappoa (EDTA) ja 0,2 ml plasmaa pantiin jäihin 15 minuutiksi, sitten sentrifugoitiin 15 minuuttia nopeudella 6000 rpm. Supernatantin pois kaatamisen jälkeen lisättiin 220 μl K2CO3:a. Nitriitit mitattiin 550 nm:ssä. (2)

1. Superoksidianioniradikaalin määritys (O2-)

   Superoksidianioniradikaalipitoisuudet plasmanäytteissä mitattiin käyttämällä NTB (Nitro Blue Tetrazolium) -reagenssia TRIS-puskurissa (määritysseos). Mittaus suoritettiin aallonpituudella 530 nm. (3).

2. Vetyperoksidin määritys (H2O2)

   H2O2:n mittaus perustui fenolipunaisen hapettumiseen H2O2:lla piparjuuriperoksidaasin katalysoimassa reaktiossa. Kaksisataa mikrolitraa perfusaattia tai plasmaa saostettiin käyttämällä 800 ml juuri valmistettua fenolipunaliuosta; Sen jälkeen lisättiin 10 µl (1:20) piparjuuriperoksidaasia (valmistettu juuri ennen käyttöä). H202:n taso mitattiin 610 nm:ssä (4).

3. Vähennetyn glutationin (GSH) määritys

   Pelkistyneen glutationin (GSH) taso määritettiin GSH:n hapettumisen perusteella 5,5-ditiobis-6,2-nitrobentsoehapon kautta. GSH-uute saatiin yhdistämällä 0,1 ml 0,1 % EDTA:ta, 400 μl hemolysaattia ja 750 μl saostusliuosta (sisältää 1,67 g metafosforihappoa, 0,2 g EDTA:ta, 30 g NaCl:a ja täytetty tislatulla vedellä, kunnes liuos on 100 ml). 3 viikkoa +4C°). GSH:n taso mitattiin 420 nm:ssä (5).

4. Antioksidanttientsyymien (SOD, CAT) määritys

Eristetyt punasolut pestiin kolme kertaa kolmella tilavuudella jääkylmää 0,9 mmol/l NaCl:a ja CAT-aktiivisuuden määrittämiseen käytettiin hemolysaatteja, jotka sisälsivät noin 50 g Hb/l. CAT-määritykseen käytettiin CAT-puskuria, valmistettua hemolysaattinäytettä ja 10 mM H202:ta. Havaitseminen suoritettiin 360 nm:ssä. SOD-aktiivisuus määritettiin epinefriinimenetelmällä. Hemolysaatti sekoitettiin karbonaattipuskurin kanssa ja sitten lisättiin epinefriiniä. Havaitseminen suoritettiin 470 nm:ssä (6-10).

Tulehdustilan arviointi Potilaiden tulehdustilan arvioimiseksi seuraavat parametrit mitattiin molemmissa kiinnostavissa pisteissä (0 ja 30. päivä): seerumin C-reaktiivisen proteiinin pitoisuus - CRP ja tuumorinekroositekijän pitoisuus - TNF-a.

Seerumin C-reaktiivisen proteiinin (CRP) pitoisuus määritettiin turbidimetrisellä menetelmällä Olympus AU680:lla. Normaali seerumin CRP-pitoisuus on ≤ 5 mg/l. Mikrotulehdus määritellään CRP:n pitoisuudeksi seerumissa 5 mg/l.

Plasman TNF-a-pitoisuudet määritettiin entsyymikytkentäisellä immunoadsorbenttimäärityksellä (ELISA) käyttämällä kaupallisesti saatavilla olevaa korkean herkkyyden epäsuoraa sandwich-entsyymi-immunosorbenttimääritystä (Sigma Aldrich).

Hematologisten parametrien arviointi

Molemmissa kiinnostavissa kohdissa analysoitiin seuraavien hematologisten parametrien arvot kaikilla potilailla:

Punasolut (Er), hemoglobiini (Hb), hematokriitti (Hct), erytrosyyttiindeksi - keskimääräinen verisolujen tilavuus (MCV), keskimääräinen verisolujen hemoglobiini (MCH), keskimääräinen verisolujen hemoglobiinipitoisuus (MCHC), seerumin laktaattidehydrogenaasipitoisuus (LDH), seerumin haptoglobiini pitoisuus ja rautastatus: seerumin rautapitoisuus, ferritiini; raudan kokonaissitoutumiskyky (TIBC), tyydyttymättömän raudan sitomiskyky (UIBC), transferriinisaturaatio (TSAT), haptoglobiini.