혈액투석 환자의 빈혈에 대한 표준화된 아로니아 멜라노카르파 추출물의 1개월 섭취 효과

전신 레독스 상태의 평가 플라즈마 샘플은 다음과 같은 산화촉진제의 수준을 결정하는 데 사용되었습니다: 슈퍼옥사이드 음이온 라디칼(O2-), 과산화수소(H2O2), 아질산염(NO2-) 및 티오바르비투르산 반응성으로 측정된 지질 과산화 지수 물질(TBARS), 수퍼옥사이드 디스뮤타제(SOD) 및 카탈라아제(CAT)의 활성 및 환원된 글루타티온(GSH) 수준과 같은 항산화 방어 시스템의 매개변수는 적혈구 용해물 샘플에서 결정되었습니다.

A) 지질 과산화 지수(TBARS) 측정 혈장 시료의 지질 과산화 정도는 0.05 NaOH 중 1% 티오바르비투르산을 사용하여 TBARS를 측정하여 추정했으며, 시료와 함께 100°C에서 15분 동안 배양하고 530nm. TBA 추출물은 0.8ml 샘플과 0.4ml 트리클로로 아세트산(TCA)을 조합하여 얻었습니다. 그 후 샘플을 10분 동안 얼음 위에 놓고 6000rpm에서 15분 동안 원심분리했습니다. (1).

b) 아질산염 측정(NO2-)

산화질소(NO)는 빠르게 분해되어 안정적인 아질산염/질산염 제품을 형성합니다. Griess's 시약을 이용하여 NO2- 수준을 측정하여 NO 생산의 지표로 사용하였다. NO2 - 혈장 내 측정을 위해 0.1ml 3N PCA(과염소산), 0.4ml 20mM 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA) 및 0.2ml 혈장을 얼음에 15분 동안 둔 다음 6000rpm에서 15분 동안 원심분리했습니다. 상등액을 버린 후, 220 μl K2CO3를 첨가하였다. 아질산염은 550nm에서 측정되었습니다. (2)

1. 과산화물 음이온 라디칼 측정(O2-)

   TRIS 완충액(분석 혼합물)의 NTB(Nitro Blue Tetrazolium) 시약을 사용하여 혈장 시료의 슈퍼옥사이드 음이온 라디칼 농도를 측정했습니다. 측정은 530nm의 파장에서 수행되었다. (삼).

2. 과산화수소 결정(H2O2)

   H2O2의 측정은 고추냉이 퍼옥시다제에 의해 촉매되는 반응에서 H2O2에 의한 페놀 레드의 산화를 기반으로 합니다. 새로 준비한 800mL의 페놀 레드 용액을 사용하여 200μL의 관류액 또는 혈장을 침전시켰습니다. 10 μL(1:20) 양고추냉이 퍼옥시다제(사용 직전에 제조)를 이어서 첨가했습니다. H2O2 수준은 610nm에서 측정되었습니다(4).

3. 환원된 글루타티온(GSH) 측정

   환원된 글루타티온(GSH)의 수준은 5,5-디티오비스-6,2-니트로벤조산을 통한 GSH 산화를 기반으로 결정되었습니다. GSH 추출물은 0.1 ml 0.1% EDTA, 400 μl 용혈물 및 750 μl 침전 용액(메타인산 1.67 g, EDTA 0.2 g, NaCl 30 g 함유, 100 ml까지 증류수로 채워짐)을 조합하여 얻었습니다. +4C°에서 3주). GSH의 수준은 420nm에서 측정되었습니다(5).

4. 항산화 효소(SOD, CAT) 측정

분리된 RBC는 얼음처럼 차가운 0.9mmol/l NaCl 3부피로 3번 세척되었고, 약 50g Hb/l를 포함하는 용혈액이 CAT 활성 측정에 사용되었습니다. CAT 측정을 위해 CAT 완충액, 준비된 용혈물 시료 및 10mM H2O2를 사용했습니다. 검출은 360nm에서 수행되었다. SOD 활성은 에피네프린 방법으로 측정하였다. 용혈액을 탄산완충액과 혼합한 후 에피네프린을 첨가하였다. 검출은 470nm에서 수행되었다(6-10).

염증 상태 평가 환자의 염증 상태를 평가하기 위해 두 관심 시점(0일 및 30일)에서 다음 매개 변수를 측정했습니다. 혈청 C 반응성 단백질 농도 - CRP 및 종양 괴사 인자 농도 - TNF-α.

혈청 C-반응성 단백질(CRP) 농도는 Olympus AU680에서 비탁법으로 측정했습니다. 정상 혈청 CRP 농도는 ≤ 5mg/L입니다. 미세염증은 혈청 내 CRP 농도가 5mg/L인 것으로 정의됩니다.

혈장 TNF-α 농도는 상업적으로 이용 가능한 고감도 간접 샌드위치 효소 결합 면역흡착 분석법(Sigma Aldrich)을 사용하여 효소 결합 면역흡착 분석법(ELISA)에 의해 결정되었습니다.

혈액학적 매개변수의 평가

두 가지 관심 지점에서 모든 환자의 다음 혈액학적 매개변수 값을 분석했습니다.

적혈구(Er), 헤모글로빈(Hb), 헤마토크리트(Hct), 적혈구 지수- 평균 미립자 부피(MCV), 평균 미립자 헤모글로빈(MCH), 평균 미립자 헤모글로빈 농도(MCHC), 혈청 젖산 탈수소 효소 농도(LDH), 혈청 합토글로빈 농도 및 철 상태: 혈청 철 농도, 페리틴; 총 철 결합 용량(TIBC), 불포화 철 결합 용량(UIBC), 트랜스페린 포화도(TSAT), 합토글로빈.