Effekterna av en månads konsumtion av standardiserat Aronia Melanocarpa-extrakt på anemi hos patienter på hemodialys

Utvärdering av systemiska redoxtillstånd Plasmaprover användes för bestämning av nivåerna av följande prooxidanter: superoxidanjonradikal (O2-), väteperoxid (H2O2), nitriter (NO2-) och index för lipidperoxidation mätt som tiobarbitursyrareaktiv substanser (TBARS), medan parametrarna för antioxidativt försvarssystem, såsom aktiviteter av superoxiddismutas (SOD) och katalas (CAT) och nivån av reducerat glutation (GSH) bestämdes i erytrocytlysatprover.

A) Bestämning av lipidperoxidationsindex (TBARS) Graden av lipidperoxidation i plasmaproverna uppskattades genom att mäta TBARS, med användning av 1 % tiobarbitursyra i 0,05 NaOH, som inkuberades med provet vid 100°C under 15 minuter och mättes vid 530 nm. TBA-extrakt erhölls genom att kombinera 0,8 ml prov och 0,4 ml triklorättiksyra (TCA); därefter lades proverna på is i 10 minuter och centrifugerades i 15 minuter vid 6000 rpm. (1).

b) Nitritbestämning (NO2-)

Kväveoxid (NO) sönderdelas snabbt för att bilda stabila nitrit/nitratprodukter. NO2-nivån mättes och användes som ett index för NO-produktion med Griesss reagens. För NO2-bestämning i plasma sattes 0,1 ml 3 N PCA (perkloridsyra), 0,4 ml 20 mM etylendiamintetraättiksyra (EDTA) och 0,2 ml plasma på is i 15 minuter, centrifugerades sedan i 15 minuter vid 6000 rpm. Efter att ha hällt av supernatanten tillsattes 220 μl K2CO3. Nitriter mättes vid 550 nm. (2)

1. Superoxidanjonradikalbestämning (O2-)

   Superoxidanjonradikalkoncentrationer i plasmaprover mättes med användning av NTB (Nitro Blue Tetrazolium)-reagens i TRIS-buffert (analysblandning). Mätningen utfördes vid en våglängd av 530 nm. (3).

2. Bestämning av väteperoxid (H2O2)

   Mätningen av H2O2 baserades på oxidationen av fenolrött med H2O2 i en reaktion katalyserad av pepparrotsperoxidas. Tvåhundra mikroliter perfusat eller plasma fälldes ut med användning av 800 ml nyberedd fenolröd lösning; 10 μL (1:20) pepparrotsperoxidas (gjord omedelbart före användning) tillsattes därefter. Nivån av H2O2 uppmättes vid 610 nm (4).

3. Bestämning av reducerat glutation (GSH)

   Nivån av reducerat glutation (GSH) bestämdes baserat på GSH-oxidation via 5,5-ditiobis-6,2-nitrobensoesyra. GSH-extrakt erhölls genom att kombinera 0,1 ml 0,1 % EDTA, 400 μl hemolysat och 750 μl utfällningslösning (innehållande 1,67 g metafosforsyra, 0,2 g EDTA, 30 g NaCl och fylld med destillerat vatten tills lösningen är st0 ml; 3 veckor vid +4C°). Nivån av GSH mättes vid 420 nm (5).

4. Bestämning av antioxidantenzymer (SOD, CAT)

Isolerade röda blodkroppar tvättades tre gånger med tre volymer iskall 0,9 mmol/l NaCl, och hemolysat innehållande cirka 50 g Hb/l användes för bestämning av CAT-aktivitet. CAT-buffert, preparerat hemolysatprov och 10 mM H2O2 användes för CAT-bestämning. Detektion utfördes vid 360 nm. SOD-aktivitet bestämdes med epinefrinmetoden. Hemolysat blandades med karbonatbuffert och sedan tillsattes epinefrin. Detektion utfördes vid 470 nm (6-10).

Utvärdering av det inflammatoriska tillståndet För att utvärdera det inflammatoriska tillståndet hos patienter mättes följande parametrar vid båda punkter av intresse (0 och 30:e dagen): serumkoncentration av C-reaktivt protein - CRP och koncentration av tumörnekrosfaktor - TNF-α.

Serumkoncentrationen av C-reaktivt protein (CRP) bestämdes med den turbidimetriska metoden på Olympus AU680. Den normala serum-CRP-koncentrationen är ≤ 5 mg/L. Mikroinflammation definieras som koncentrationen av CRP i serumet på 5 mg/L.

Plasma-TNF-a-koncentrationer bestämdes genom enzymkopplad immunoadsorbentanalys (ELISA) med användning av kommersiellt tillgänglig indirekt sandwichenzymkopplad immunosorbentanalys med hög känslighet (Sigma Aldrich).

Utvärdering av de hematologiska parametrarna

Vid båda punkter av intresse analyserades värdena för följande hematologiska parametrar hos alla patienter:

Erytrocyter (Er), hemoglobin (Hb), hematokrit (Hct), erytrocytindex - medelkorpuskulär volym (MCV), medelkorpuskulär hemoglobin (MCH), medelkoncentration av korpuskulär hemoglobin (MCHC), serumlaktatdehydrogenaskoncentration (LDH), serumhaptoglobin koncentration och järnstatus: järnkoncentration i serum, ferritin; total järnbindningskapacitet (TIBC), omättad järnbindningskapacitet (UIBC), transferrinmättnad (TSAT), haptoglobin.