Les effets d'un mois de consommation d'extrait standardisé d'Aronia Melanocarpa sur l'anémie chez les patients sous hémodialyse

Évaluation de l'état redox systémique Des échantillons de plasma ont été utilisés pour déterminer les niveaux des pro-oxydants suivants : radical anion superoxyde (O2-), peroxyde d'hydrogène (H2O2), nitrites (NO2-) et indice de peroxydation lipidique mesuré en tant que réactif à l'acide thiobarbiturique. (TBARS), tandis que les paramètres du système de défense antioxydant, tels que les activités de la superoxyde dismutase (SOD) et de la catalase (CAT) et le niveau de glutathion réduit (GSH) ont été déterminés dans des échantillons de lysats d'érythrocytes.

A) Détermination de l'indice de peroxydation lipidique (TBARS) Le degré de peroxydation lipidique dans les échantillons de plasma a été estimé en mesurant le TBARS, en utilisant de l'acide thiobarbiturique à 1 % dans 0,05 NaOH, qui a été incubé avec l'échantillon à 100 °C pendant 15 min et mesuré à 530 nm. L'extrait de TBA a été obtenu en combinant 0,8 ml d'échantillon et 0,4 ml d'acide trichloroacétique (TCA); ensuite, les échantillons ont été placés sur de la glace pendant 10 min et centrifugés pendant 15 min à 6000 tr/min. (1).

b) Détermination des nitrites (NO2-)

L'oxyde nitrique (NO) se décompose rapidement pour former des produits stables de nitrite/nitrate. Le niveau de NO2 a été mesuré et utilisé comme indice de production de NO, en utilisant le réactif de Griess. Pour la détermination de NO2 - dans le plasma, 0,1 ml de PCA 3 N (acide perchloré), 0,4 ml d'acide éthylènediaminetétraacétique (EDTA) 20 mM et 0,2 ml de plasma ont été placés sur de la glace pendant 15 min, puis centrifugés pendant 15 min à 6000 tr/min. Après avoir versé le surnageant, 220 µl de K2CO3 ont été ajoutés. Les nitrites ont été mesurés à 550 nm. (2)

1. Détermination des radicaux anion superoxyde (O2-)

   Les concentrations de radicaux anion superoxyde dans les échantillons de plasma ont été mesurées à l'aide du réactif NTB (Nitro Blue Tetrazolium) dans un tampon TRIS (mélange de dosage). La mesure a été effectuée à une longueur d'onde de 530 nm. (3).

2. Détermination du peroxyde d'hydrogène (H2O2)

   La mesure de H2O2 était basée sur l'oxydation du rouge de phénol par H2O2 dans une réaction catalysée par la peroxydase de raifort. Deux cents microlitres de perfusat ou de plasma ont été précipités en utilisant 800 ml de solution de rouge de phénol fraîchement préparée ; 10 μL de peroxydase de raifort (1:20) (préparée immédiatement avant utilisation) ont ensuite été ajoutés. Le niveau de H2O2 a été mesuré à 610 nm (4).

3. Détermination du glutathion réduit (GSH)

   Le niveau de glutathion réduit (GSH) a été déterminé sur la base de l'oxydation du GSH via l'acide 5,5-dithiobis-6,2-nitrobenzoïque. L'extrait de GSH a été obtenu en combinant 0,1 ml d'EDTA à 0,1 %, 400 μl d'hémolysat et 750 μl de solution de précipitation (contenant 1,67 g d'acide métaphosphorique, 0,2 g d'EDTA, 30 g de NaCl et rempli d'eau distillée jusqu'à 100 ml ; la solution est stable pendant 3 semaines à +4C°). Le niveau de GSH a été mesuré à 420 nm (5).

4. Détermination des enzymes antioxydantes (SOD, CAT)

Les globules rouges isolés ont été lavés trois fois avec trois volumes de NaCl glacé à 0,9 mmol/l, et des hémolysats contenant environ 50 g d'Hb/l ont été utilisés pour la détermination de l'activité CAT. Le tampon CAT, l'échantillon d'hémolysat préparé et 10 mM de H2O2 ont été utilisés pour la détermination du CAT. La détection a été effectuée à 360 nm. L'activité SOD a été déterminée par la méthode à l'épinéphrine. L'hémolysat a été mélangé avec du tampon carbonate, puis de l'épinéphrine a été ajoutée. La détection a été effectuée à 470 nm (6-10).

Évaluation de l'état inflammatoire Afin d'évaluer l'état inflammatoire des patients, les paramètres suivants ont été mesurés aux deux points d'intérêt (jour 0 et 30) : concentration sérique de protéine C-réactive - CRP et concentration de facteur de nécrose tumorale - TNF-α.

La concentration sérique de protéine C-réactive (CRP) a été déterminée par la méthode turbidimétrique sur l'Olympus AU680. La concentration sérique normale de CRP est ≤ 5 mg/L. La microinflammation est définie comme la concentration de CRP dans le sérum de 5 mg/L.

Les concentrations plasmatiques de TNF-α ont été déterminées par dosage immuno-enzymatique (ELISA) en utilisant un dosage immuno-enzymatique sandwich à haute sensibilité disponible dans le commerce (Sigma Aldrich).

Évaluation des paramètres hématologiques

Aux deux points d'intérêt, les valeurs des paramètres hématologiques suivants chez tous les patients ont été analysées :

Érythrocytes (Er), hémoglobine (Hb), hématocrite (Hct), indice érythrocytaire - volume corpusculaire moyen (MCV), hémoglobine corpusculaire moyenne (MCH), concentration corpusculaire moyenne en hémoglobine (MCHC), concentration sérique de lactate déshydrogénase (LDH), haptoglobine sérique concentration et statut en fer : concentration sérique en fer, ferritine ; capacité de liaison du fer total (TIBC), capacité de liaison du fer insaturé (UIBC), saturation de la transferrine (TSAT), haptoglobine.