De effecten van een maand consumptie van gestandaardiseerd Aronia Melanocarpa-extract op bloedarmoede bij patiënten die hemodialyse ondergaan

Evaluatie van systemische redoxtoestand Plasmamonsters werden gebruikt voor het bepalen van de niveaus van de volgende pro-oxidanten: superoxide-anionradicaal (O2-), waterstofperoxide (H2O2), nitrieten (NO2-) en index van lipideperoxidatie gemeten als reactief met thiobarbituurzuur stoffen (TBARS), terwijl de parameters van het antioxidatieve afweersysteem, zoals activiteiten van superoxide dismutase (SOD) en catalase (CAT) en het niveau van gereduceerd glutathion (GSH) werden bepaald in monsters van erytrocytenlysaten.

A) Bepaling van de index van lipideperoxidatie (TBARS) De mate van lipideperoxidatie in de plasmamonsters werd geschat door TBARS te meten met 1% thiobarbituurzuur in 0,05 NaOH, dat gedurende 15 minuten met het monster bij 100°C werd geïncubeerd en gemeten bij 530 nm. TBA-extract werd verkregen door 0,8 ml monster en 0,4 ml trichloorazijnzuur (TCA) te combineren; daarna werden de monsters 10 min op ijs gezet en 15 min gecentrifugeerd bij 6000 rpm. (1).

b) Nitrietbepaling (NO2-)

Stikstofmonoxide (NO) ontleedt snel en vormt stabiele nitriet-/nitraatproducten. Het NO2-gehalte werd gemeten en gebruikt als een index van NO-productie, gebruikmakend van Griess's reagens. Voor NO2-bepaling in plasma werden 0,1 ml 3 N PCA (perchloridezuur), 0,4 ml 20 mM ethyleendiaminetetra-azijnzuur (EDTA) en 0,2 ml plasma gedurende 15 minuten op ijs gezet, vervolgens gedurende 15 minuten bij 6000 rpm gecentrifugeerd. Na het afgieten van het supernatant werd 220 µl K2C03 toegevoegd. Nitrieten werden gemeten bij 550 nm. (2)

1. Superoxide-anionradicaalbepaling (O2-)

   Superoxide-anionradicaalconcentraties in plasmamonsters werden gemeten met behulp van het NTB-reagens (Nitro Blue Tetrazolium) in TRIS-buffer (assaymengsel). De meting werd uitgevoerd bij een golflengte van 530 nm. (3).

2. Waterstofperoxidebepaling (H2O2)

   De meting van H2O2 was gebaseerd op de oxidatie van fenolrood door H2O2 in een reactie gekatalyseerd door mierikswortelperoxidase. Tweehonderd microliter perfusaat of plasma werd geprecipiteerd met behulp van 800 ml vers bereide fenolroodoplossing; Vervolgens werd 10 μl (1:20) mierikswortelperoxidase (direct voor gebruik gemaakt) toegevoegd. Het niveau van H2O2 werd gemeten bij 610 nm (4).

3. Bepaling van gereduceerd glutathion (GSH)

   Het gehalte aan gereduceerd glutathion (GSH) is bepaald op basis van GSH-oxidatie via 5,5-dithiobis-6,2-nitrobenzoëzuur. GSH-extract werd verkregen door het combineren van 0,1 ml 0,1% EDTA, 400 μl hemolysaat en 750 μl neerslagoplossing (bevattende 1,67 g metafosforzuur, 0,2 g EDTA, 30 g NaCl, en gevuld met gedestilleerd water tot 100 ml; de oplossing is stabiel voor 3 weken bij +4C°). Het niveau van GSH werd gemeten bij 420 nm (5).

4. Bepaling van antioxidante enzymen (SOD, CAT)

Geïsoleerde RBC's werden drie keer gewassen met drie volumes ijskoud 0,9 mmol/l NaCl en hemolysaten met ongeveer 50 g Hb/l werden gebruikt voor de bepaling van CAT-activiteit. CAT-buffer, bereid hemolysaatmonster en 10 mM H2O2 werden gebruikt voor CAT-bepaling. Detectie werd uitgevoerd bij 360 nm. De SOD-activiteit werd bepaald met de epinefrinemethode. Hemolysaat werd gemengd met carbonaatbuffer en vervolgens werd epinefrine toegevoegd. Detectie werd uitgevoerd bij 470 nm (6-10).

Evaluatie van de ontstekingsstatus Om de ontstekingsstatus van patiënten te evalueren, werden de volgende parameters gemeten op beide aandachtspunten (0 en 30e dag): serum C-reactieve proteïneconcentratie - CRP en tumornecrosefactorconcentratie - TNF-α.

De serumconcentratie van C-reactief proteïne (CRP) werd bepaald met de turbidimetrische methode op de Olympus AU680. De normale serum-CRP-concentratie is ≤ 5 mg/L. Micro-ontsteking wordt gedefinieerd als de concentratie van CRP in het serum van 5 mg/L.

Plasma-TNF-a-concentraties werden bepaald door middel van enzym-gekoppelde immunoadsorbent-assay (ELISA) met behulp van in de handel verkrijgbare zeer gevoelige indirecte sandwich-enzym-gekoppelde immunosorbent-assay (Sigma Aldrich).

Evaluatie van de hematologische parameters

Op beide aandachtspunten werden de waarden van de volgende hematologische parameters bij alle patiënten geanalyseerd:

Erytrocyten (Er), hemoglobine (Hb), hematocriet (Hct), erytrocytenindex - gemiddeld corpusculair volume (MCV), gemiddeld corpusculair hemoglobine (MCH), gemiddelde corpusculaire hemoglobineconcentratie (MCHC), serumlactaatdehydrogenaseconcentratie (LDH), serumhaptoglobine concentratie en ijzerstatus: serumijzerconcentratie, ferritine; totale ijzerbindingscapaciteit (TIBC), onverzadigde ijzerbindingscapaciteit (UIBC), transferrineverzadiging (TSAT), haptoglobine.