一个月服用标准化黑果野樱莓提取物对血液透析患者贫血的影响

全身氧化还原状态的评估血浆样品用于测定以下促氧化剂的水平：超氧阴离子自由基 (O2-)、过氧化氢 (H2O2)、亚硝酸盐 (NO2-) 和以硫代巴比妥酸反应性测量的脂质过氧化指数物质 (TBARS)，而抗氧化防御系统的参数，如超氧化物歧化酶 (SOD) 和过氧化氢酶 (CAT) 的活性以及还原型谷胱甘肽 (GSH) 的水平，则在红细胞裂解物样品中测定。

A) 脂质过氧化指数 (TBARS) 测定 血浆样品中的脂质过氧化程度通过测量 TBARS 来估计，使用 0.05 NaOH 中的 1% 硫代巴比妥酸，将其与样品在 100°C 下孵育 15 分钟并在530 纳米。 将 0.8 ml 样品和 0.4 ml 三氯乙酸 (TCA) 合并，获得 TBA 提取物；之后，将样品置于冰上 10 分钟并以 6000 rpm 离心 15 分钟。 (1).

b) 亚硝酸盐测定（NO2-）

一氧化氮 (NO) 迅速分解形成稳定的亚硝酸盐/硝酸盐产物。 使用 Griess 试剂测量 NO2- 水平并将其用作 NO 产生的指标。 对于血浆中的 NO2 - 测定，将 0.1 ml 3 N PCA（高氯酸）、0.4 ml 20 mM 乙二胺四乙酸 (EDTA) 和 0.2 ml 血浆置于冰上 15 分钟，然后以 6000 rpm 离心 15 分钟。 倒掉上清液后，加入 220 μl K2CO3。 在 550 nm 处测量亚硝酸盐。 (2)

1. 超氧阴离子自由基测定（O2-）

   使用 TRIS 缓冲液（测定混合物）中的 NTB（硝基蓝四唑）试剂测量血浆样品中的超氧阴离子自由基浓度。 在530nm的波长下进行测量。 (3).

2. 过氧化氢测定（H2O2）

   H2O2 的测量基于 H2O2 在辣根过氧化物酶催化的反应中氧化酚红。 使用 800 mL 新鲜配制的酚红溶液沉淀 200 微升灌注液或血浆；随后加入 10 μL (1:20) 辣根过氧化物酶（临用前制备）。 在 610 nm 处测量 H2O2 的水平 (4)。

3. 还原型谷胱甘肽（GSH）的测定

   还原型谷胱甘肽 (GSH) 的水平是根据 GSH 通过 5,5-二硫双-6,2-硝基苯甲酸氧化来确定的。 GSH 提取物由 0.1 ml 0.1% EDTA、400 μl 溶血液和 750 μl 沉淀液（含偏磷酸 1.67 g，EDTA 0.2 g，NaCl 30 g，加蒸馏水定容至 100 ml，溶液稳定+4C° 下 3 周）。 GSH 的水平在 420 nm 处测量 (5)。

4. 抗氧化酶（SOD、CAT）的测定

分离的红细胞用 3 倍体积的冰冷 0.9 mmol/l NaCl 洗涤 3 次，含有约 50 g Hb/l 的溶血物用于测定 CAT 活性。 CAT 缓冲液、制备的溶血产物样品和 10 mM H2O2 用于 CAT 测定。 在 360 nm 处进行检测。 SOD活性测定采用肾上腺素法。 将溶血产物与碳酸盐缓冲液混合，然后加入肾上腺素。 在 470 nm (6-10) 进行检测。

炎症状态的评估为了评估患者的炎症状态，在两个兴趣点（第 0 天和第 30 天）测量以下参数：血清 C-反应蛋白浓度-CRP 和肿瘤坏死因子浓度-TNF-α。

在Olympus AU680 上通过比浊法测定血清C-反应蛋白(CRP)浓度。 正常血清CRP浓度≤5mg/L。 微炎症定义为血清中 CRP 浓度为 5 mg/L。

使用市售的高灵敏度间接夹心酶联免疫吸附测定 (Sigma Aldrich)，通过酶联免疫吸附测定 (ELISA) 测定血浆 TNF-α 浓度。

血液学参数的评估

在两个兴趣点上，分析了所有患者的以下血液学参数值：

红细胞 (Er)、血红蛋白 (Hb)、血细胞比容 (Hct)、红细胞指数-平均红细胞体积 (MCV)、平均红细胞血红蛋白 (MCH)、平均红细胞血红蛋白浓度 (MCHC)、血清乳酸脱氢酶浓度 (LDH)、血清结合珠蛋白浓度和铁状态：血清铁浓度、铁蛋白；总铁结合力（TIBC）、不饱和铁结合力（UIBC）、转铁蛋白饱和度（TSAT）、触珠蛋白。