Effekten av en måneds forbruk av standardisert Aronia Melanocarpa-ekstrakt på anemi hos pasienter på hemodialyse

Evaluering av Systemic Redox State Plasmaprøver ble brukt for å bestemme nivåene av følgende prooksidanter: superoksidanionradikal (O2-), hydrogenperoksid (H2O2), nitritter (NO2-) og lipidperoksidasjonsindeks målt som tiobarbitursyrereaktiv stoffer (TBARS), mens parametrene til antioksidativt forsvarssystem, slik som aktivitetene til superoksiddismutase (SOD) og katalase (CAT) og nivået av redusert glutation (GSH) ble bestemt i erytrocytter lysater prøver.

A) Bestemmelse av lipidperoksidasjonsindeks (TBARS) Graden av lipidperoksidasjon i plasmaprøvene ble estimert ved å måle TBARS, ved å bruke 1 % tiobarbitursyre i 0,05 NaOH, som ble inkubert med prøven ved 100°C i 15 minutter og målt kl. 530 nm. TBA-ekstrakt ble oppnådd ved å kombinere 0,8 ml prøve og 0,4 ml trikloreddiksyre (TCA); etterpå ble prøvene lagt på is i 10 minutter og sentrifugert i 15 minutter ved 6000 rpm. (1).

b) Nitrittbestemmelse (NO2-)

Nitrogenoksid (NO) brytes raskt ned for å danne stabile nitritt/nitratprodukter. NO2-nivået ble målt og brukt som en indeks for NO-produksjon ved bruk av Griess's reagens. For NO2 - bestemmelse i plasma ble 0,1 ml 3 N PCA (perkloridsyre), 0,4 ml 20 mM etylendiamintetraeddiksyre (EDTA) og 0,2 ml plasma lagt på is i 15 minutter, deretter sentrifugert i 15 minutter ved 6000 rpm. Etter helling av supernatanten ble 220 μl K2CO3 tilsatt. Nitritt ble målt ved 550 nm. (2)

1. Superoksidanionradikalbestemmelse (O2-)

   Superoksidanionradikalkonsentrasjoner i plasmaprøver ble målt ved å bruke NTB (Nitro Blue Tetrazolium) reagens i TRIS-buffer (analyseblanding). Målingen ble utført ved en bølgelengde på 530 nm. (3).

2. Hydrogenperoksidbestemmelse (H2O2)

   Målingen av H2O2 var basert på oksidasjon av fenolrødt med H2O2 i en reaksjon katalysert av pepperrotperoksidase. To hundre mikroliter perfusat eller plasma ble utfelt ved bruk av 800 ml nylaget fenolrød løsning; 10 μL (1:20) pepperrotperoksidase (laget rett før bruk) ble deretter tilsatt. Nivået av H2O2 ble målt ved 610 nm (4).

3. Bestemmelse av redusert glutation (GSH)

   Nivået av redusert glutation (GSH) ble bestemt basert på GSH-oksidasjon via 5,5-ditiobis-6,2-nitrobenzosyre. GSH-ekstrakt ble oppnådd ved å kombinere 0,1 ml 0,1 % EDTA, 400 μl hemolysat og 750 μl utfellingsløsning (inneholdende 1,67 g metafosforsyre, 0,2 g EDTA, 30 g NaCl, og fylt med destillert vann til 10 ml; 3 uker ved +4C°). Nivået av GSH ble målt ved 420 nm (5).

4. Bestemmelse av antioksidantenzymer (SOD, CAT)

Isolerte røde blodlegemer ble vasket tre ganger med tre volumer iskald 0,9 mmol/l NaCl, og hemolysater inneholdende ca. 50 g Hb/l ble brukt for bestemmelse av CAT-aktivitet. CAT-buffer, tilberedt hemolysatprøve og 10 mM H2O2 ble brukt til CAT-bestemmelse. Deteksjon ble utført ved 360 nm. SOD-aktivitet ble bestemt ved epinefrinmetoden. Hemolysat ble blandet med karbonatbuffer, og deretter ble adrenalin tilsatt. Deteksjon ble utført ved 470 nm (6-10).

Evaluering av inflammatorisk status For å evaluere den inflammatoriske statusen til pasienter, ble følgende parametere målt ved begge interessepunkter (0 og 30. dag): serum C-reaktivt proteinkonsentrasjon - CRP og tumor nekrose faktor konsentrasjon - TNF-α.

Serum C-reaktivt protein (CRP) konsentrasjonen ble bestemt ved den turbidimetriske metoden på Olympus AU680. Den normale serum-CRP-konsentrasjonen er ≤ 5 mg/L. Mikroinflammasjon er definert som konsentrasjonen av CRP i serumet på 5 mg/L.

Plasma-TNF-α-konsentrasjoner ble bestemt ved hjelp av enzymkoblet immunoadsorbentanalyse (ELISA) ved bruk av kommersielt tilgjengelig høysensitiv indirekte sandwich-enzymkoblet immunosorbentanalyse (Sigma Aldrich).

Evaluering av de hematologiske parameterne

På begge punkter av interesse ble verdiene av følgende hematologiske parametere hos alle pasienter analysert:

Erytrocytter (Er), hemoglobin (Hb), hematokrit (Hct), erytrocyttindeks - gjennomsnittlig korpuskulært volum (MCV), gjennomsnittlig korpuskulært hemoglobin (MCH), gjennomsnittlig korpuskulært hemoglobinkonsentrasjon (MCHC), serumlaktatdehydrogenasekonsentrasjon (LDH), serumhaptoglobin konsentrasjon og jernstatus: serumjernkonsentrasjon, ferritin; total jernbindingskapasitet (TIBC), umettet jernbindingskapasitet (UIBC), transferrinmetning (TSAT), haptoglobin.