Virkningerne af en måneds forbrug af standardiseret Aronia Melanocarpa-ekstrakt på anæmi hos patienter i hæmodialyse

Evaluering af systemisk redoxtilstand Plasmaprøver blev brugt til bestemmelse af niveauerne af følgende prooxidanter: superoxidanionradikal (O2-), hydrogenperoxid (H2O2), nitritter (NO2-) og lipidperoxidationsindeks målt som thiobarbitursyrereaktivt stoffer (TBARS), mens parametrene for antioxidativt forsvarssystem, såsom aktiviteter af superoxiddismutase (SOD) og katalase (CAT) og niveauet af reduceret glutathion (GSH) blev bestemt i erytrocytlysaterprøver.

A) Bestemmelse af lipidperoxidationsindeks (TBARS) Graden af ​​lipidperoxidation i plasmaprøverne blev estimeret ved at måle TBARS ved at anvende 1% thiobarbitursyre i 0,05 NaOH, som blev inkuberet med prøven ved 100°C i 15 minutter og målt ved 530 nm. TBA-ekstrakt blev opnået ved at kombinere 0,8 ml prøve og 0,4 ml trichloreddikesyre (TCA); derefter blev prøverne lagt på is i 10 minutter og centrifugeret i 15 minutter ved 6000 rpm. (1).

b) Nitritbestemmelse (NO2-)

Nitrogenoxid (NO) nedbrydes hurtigt og danner stabile nitrit/nitratprodukter. NO2-niveauet blev målt og brugt som et indeks for NO-produktion ved brug af Griess's reagens. Til NO2-bestemmelse i plasma blev 0,1 ml 3 N PCA (perchloridsyre), 0,4 ml 20 mM ethylendiamintetraeddikesyre (EDTA) og 0,2 ml plasma lagt på is i 15 minutter, derefter centrifugeret i 15 minutter ved 6000 rpm. Efter hældning af supernatanten blev 220 μl K2CO3 tilsat. Nitritter blev målt ved 550 nm. (2)

1. Superoxidanion-radikalbestemmelse (O2-)

   Superoxidanionradikalkoncentrationer i plasmaprøver blev målt under anvendelse af NTB (Nitro Blue Tetrazolium)-reagenset i TRIS-buffer (assayblanding). Målingen blev udført ved en bølgelængde på 530 nm. (3).

2. Hydrogenperoxidbestemmelse (H2O2)

   Målingen af ​​H2O2 var baseret på oxidationen af ​​phenolrødt med H2O2 i en reaktion katalyseret af peberrodsperoxidase. To hundrede mikroliter perfusat eller plasma blev udfældet ved anvendelse af 800 ml frisk fremstillet phenolrød opløsning; 10 μL (1:20) peberrodsperoxidase (fremstillet umiddelbart før brug) blev efterfølgende tilsat. Niveauet af H2O2 blev målt ved 610 nm (4).

3. Bestemmelse af reduceret glutathion (GSH)

   Niveauet af reduceret glutathion (GSH) blev bestemt baseret på GSH-oxidation via 5,5-dithiobis-6,2-nitrobenzoesyre. GSH-ekstrakt blev opnået ved at kombinere 0,1 ml 0,1 % EDTA, 400 μl hæmolysat og 750 μl udfældningsopløsning (indeholdende 1,67 g metaphosphorsyre, 0,2 g EDTA, 30 g NaCl og fyldt med destilleret vand til 10 ml, indtil opløsningen er stabil til 0 ml; 3 uger ved +4C°). Niveauet af GSH blev målt ved 420 nm (5).

4. Bestemmelse af antioxidantenzymer (SOD, CAT)

Isolerede RBC'er blev vasket tre gange med tre volumener iskold 0,9 mmol/l NaCl, og hæmolysater indeholdende ca. 50 g Hb/l blev anvendt til bestemmelse af CAT-aktivitet. CAT-buffer, forberedt hæmolysatprøve og 10 mM H2O2 blev brugt til CAT-bestemmelse. Detektion blev udført ved 360 nm. SOD-aktivitet blev bestemt ved epinephrinmetoden. Hæmolysat blev blandet med carbonatbuffer, og derefter blev epinephrin tilsat. Detektion blev udført ved 470 nm (6-10).

Evaluering af den inflammatoriske status For at evaluere den inflammatoriske status for patienter blev følgende parametre målt ved begge interessepunkter (0 og 30. dag): serum C-reaktivt proteinkoncentration - CRP og tumornekrosefaktorkoncentration - TNF-α.

Serum-C-reaktivt protein (CRP)-koncentrationen blev bestemt ved den turbidimetriske metode på Olympus AU680. Den normale serum-CRP-koncentration er ≤ 5 mg/L. Mikroinflammation er defineret som koncentrationen af ​​CRP i serumet på 5 mg/L.

Plasma-TNF-a-koncentrationer blev bestemt ved enzymkoblet immunoadsorbent-assay (ELISA) ved anvendelse af kommercielt tilgængelig højsensitiv indirekte sandwich-enzym-linked immunosorbent-assay (Sigma Aldrich).

Evaluering af de hæmatologiske parametre

Ved begge interessepunkter blev værdierne af følgende hæmatologiske parametre hos alle patienter analyseret:

Erytrocytter (Er), hæmoglobin (Hb), hæmatokrit (Hct), erytrocytindeks - middel korpuskulært volumen (MCV), middel korpuskulært hæmoglobin (MCH), gennemsnitlig korpuskulær hæmoglobinkoncentration (MCHC), serum lactat dehydrogenase koncentration (LDH), serum haptoglobin koncentration og jernstatus: serumjernkoncentration, ferritin; total jernbindingskapacitet (TIBC), umættet jernbindingskapacitet (UIBC), transferrinmætning (TSAT), haptoglobin.