Влияние месячного потребления стандартизированного экстракта Aronia Melanocarpa на анемию у пациентов, находящихся на гемодиализе

Оценка системного окислительно-восстановительного состояния Образцы плазмы использовали для определения уровней следующих прооксидантов: супероксидного анион-радикала (O2-), перекиси водорода (H2O2), нитритов (NO2-) и индекса перекисного окисления липидов, измеряемого как реактивность тиобарбитуровой кислоты. веществ (ТБАРС), а в образцах лизатов эритроцитов определяли параметры системы антиоксидантной защиты, такие как активности супероксиддисмутазы (СОД) и каталазы (КАТ), уровень восстановленного глутатиона (GSH).

A) Определение индекса перекисного окисления липидов (TBARS) Степень перекисного окисления липидов в образцах плазмы оценивали путем измерения TBARS с использованием 1% тиобарбитуровой кислоты в 0,05 NaOH, которую инкубировали с образцом при 100°C в течение 15 минут и измеряли при 530 нм. Экстракт ТВА получали путем объединения 0,8 мл образца и 0,4 мл трихлоруксусной кислоты (ТХУ); затем образцы помещали на лед на 10 мин и центрифугировали 15 мин при 6000 об/мин. (1).

б) Определение нитритов (NO2-)

Оксид азота (NO) быстро разлагается с образованием стабильных продуктов нитритов/нитратов. Уровень NO2- измеряли и использовали в качестве показателя продукции NO с помощью реактива Грисса. Для определения NO2 в плазме 0,1 мл 3 N ПХА (перхлорная кислота), 0,4 мл 20 мМ этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА) и 0,2 мл плазмы помещали на лед на 15 мин, затем центрифугировали 15 мин при 6000 об/мин. После слива супернатанта добавляли 220 мкл K2CO3. Нитриты измеряли при 550 нм. (2)

1. Определение супероксид-анион-радикала (O2-)

   Концентрации супероксидного анион-радикала в образцах плазмы измеряли с использованием реагента NTB (Nitro Blue Tetrasolium) в буфере TRIS (смесь для анализа). Измерение проводили при длине волны 530 нм. (3).

2. Определение перекиси водорода (H2O2)

   Измерение H2O2 основано на окислении фенолового красного H2O2 в реакции, катализируемой пероксидазой хрена. Осаждали 200 мкл перфузата или плазмы, используя 800 мл свежеприготовленного раствора фенолового красного; Затем добавляли 10 мкл (1:20) пероксидазы хрена (приготовленной непосредственно перед использованием). Уровень H2O2 измеряли при 610 нм (4).

3. Определение восстановленного глутатиона (GSH)

   Уровень восстановленного глутатиона (GSH) определяли на основе окисления GSH через 5,5-дитиобис-6,2-нитробензойную кислоту. Экстракт GSH получали смешиванием 0,1 мл 0,1% ЭДТА, 400 мкл гемолизата и 750 мкл осадительного раствора (содержащего 1,67 г метафосфорной кислоты, 0,2 г ЭДТА, 30 г NaCl, до 100 мл дистиллированной воды; раствор стабилен в течение 3 недели при +4С°). Уровень GSH измеряли при 420 нм (5).

4. Определение антиоксидантных ферментов (СОД, КАТ)

Изолированные эритроциты трижды промывали тремя объемами охлажденного льдом 0,9 ммоль/л NaCl, для определения активности КАТ использовали гемолизаты, содержащие около 50 г Hb/л. Для определения КАТ использовали буфер CAT, приготовленный образец гемолизата и 10 мМ H2O2. Детекцию проводили при 360 нм. Активность СОД определяли эпинефриновым методом. Гемолизат смешивали с карбонатным буфером, затем добавляли адреналин. Детекцию проводили при 470 нм (6-10).

Оценка воспалительного статуса. Для оценки воспалительного статуса у пациентов в обеих точках интереса (0 и 30-й день) измеряли следующие параметры: концентрацию С-реактивного белка в сыворотке - СРБ и концентрацию фактора некроза опухоли - ФНО-α.

Концентрацию С-реактивного белка (СРБ) в сыворотке определяли турбидиметрическим методом на приборе Olympus AU680. Нормальная концентрация СРБ в сыворотке составляет ≤ 5 мг/л. Микровоспаление определяется как концентрация СРБ в сыворотке крови 5 мг/л.

Концентрации TNF-α в плазме определяли с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA) с использованием коммерчески доступного высокочувствительного непрямого сэндвич-ферментного иммуноферментного анализа (Sigma Aldrich).

Оценка гематологических параметров

В обеих точках интереса были проанализированы значения следующих гематологических параметров у всех пациентов:

Эритроциты (Er), гемоглобин (Hb), гематокрит (Hct), эритроцитный индекс - средний корпускулярный объем (MCV), средний корпускулярный гемоглобин (MCH), средняя концентрация корпускулярного гемоглобина (MCHC), концентрация лактатдегидрогеназы в сыворотке (LDH), сывороточный гаптоглобин концентрация и статус железа: концентрация железа в сыворотке крови, ферритин; общая железосвязывающая способность (ОЖЖС), ненасыщенная железосвязывающая способность (ОЖЖС), насыщение трансферрина (ТСАТ), гаптоглобин.