Covid-19: 好中球細胞外トラップの役割の可能性 (NETSINCOVID)

好中球がさまざまなタンパク質とともに DNA を外部に排出し、Neutrophil Extracellular Traps (NET) と呼ばれるネットワーク構造を形成するプロセスは、原形質膜の前に核膜の破壊を伴う特定の細胞死を構成します。 このプロセスは NETosis と呼ばれ、ネクローシスやアポトーシスなどの他の既知の細胞死とは異なります。

NETs 駆出による好中球の死 (NETosis) は、2004 年に Brinkman によって最初に記述されました。

NETs は、その言葉自体が示すように、好中球顆粒に由来する DNA 繊維、ヒストン、タンパク質で構成される一種のネットワークを表しており、その主な機能は病原体 (主に細菌や真菌) を捕捉することです。このプロセスは自然免疫に関連しています。 .

ただし、このプロセスは、誇張された方法で活性化された場合、局所的または全身的な損傷を意味します。

このプロセス中に排出される DNA は、dsDNA サブタイプである二本鎖 DNA です。 循環で利用可能な DNA (無細胞 DNA - cfDNA) の一部を表す dsDNA は、細胞死のさまざまなプロセスに由来するため、組織損傷の程度と相関しています。 健康な人には少量しか存在しません。

NETosis プロセス中に細胞のレドックス状態がどのように変化し、酸素フリーラジカル (活性酸素種、ROS) が過剰に生成され、酵素 NADPH オキシダーゼが活性化されるかを強調することが重要です。 NETの形成、したがってNETosisのプロセスは、最初は細菌感染の文脈で研究されましたが、その後、癌、自己免疫疾患、肺疾患、アテローム性動脈硬化症、静脈血栓塞栓症などの他の状態での役割がますます明らかになりました.

特に、多くの証拠が確認しているように、NETosis は静脈および動脈血栓症を特徴とするすべての状態で重要な役割を果たしているようです。

NETosis は、血管炎、Moschowitz 症候群などの血栓性微小血管障害など、微小血管レベルでも報告されています。

ウイルスは、体の免疫反応を回避する能力で知られています。 最近、それらも NETosis プロセスのトリガーとして機能することが確認されています。

実際、多くのウイルスは好中球を刺激して NET を生成することができます。 古典的な NETosis から、抗ウイルス剤の産生、さらにはアポトーシスへの切り替えまで、好中球のさまざまな反応が見られます。

ウイルスによって誘発されたNET（したがって、dsDNA、ヒストン、顆粒タンパク質の複合体）は、制御されない方法で循環し始め、免疫複合体、サイトカイン、インターフェロンIなどの産生を伴う身体の極端な全身反応につながります.

NETosis は、炎症反応と密接に関連しているようです。 例えば、好中球顆粒球ではPAD4タンパク質が核内に存在し、クロマチンを脱凝縮し、NETの形成を促進することが知られています。 一方、NETは、気管支肺胞洗浄液に関する研究で観察された急性呼吸窮迫症候群（ARDS）の患者、およびCOPD増悪中の急性呼吸不全の患者で増加します。

したがって、ウイルス誘発性の NETosis が両刃の剣として機能することは明らかです。一方にウイルスの機械的な閉じ込めがある場合、他方では NET の放出によって引き起こされる炎症反応および免疫反応自体が有害である可能性があります。

これまでのところ、Covid-19 感染における NET の役割に関する文献データはほとんどなく、致死率の高い間質性肺炎を引き起こす可能性があり、現在ワクチンや特定の治療法がないウイルス感染症です。 Covid-19 の進行型は、ARDS 様の状態の発症を伴う過炎症 (「サイトカイン ストーム」) を特徴とすることがよくあります。 さらに、微小血管障害、肺塞栓症（Covid-19患者の抗血栓予防および/または凝固のための慎重な評価手順につながった）などの微小およびマクロ血栓現象の報告がますます頻繁になっています.

研究の目的 この研究の主な目的は、NETs が Covid-19 への対応に関係している可能性があるかどうか、またどのメカニズムによるかを理解することです。 具体的な治療法の提案は、この形態の自然免疫の知識と強化から導き出される可能性があります。

これを行うには、Covid-19 患者の NETosis の活動を評価し、疾患の臨床経過 (悪化と治癒) が NETosi 活動の程度を決定するかどうかを評価する必要があります。 したがって、Covid-19/生存による死亡率とNETs活動との関連性が研究されます。

副次的な目的は、NETosis マーカーと炎症の生物体液性指標の間、および NETosi マーカーと末梢または深部静脈血栓症の発症の間のさまざまな関連性を研究する可能性に関係しています。

最後に、Covid-19 患者の血漿が in vitro で NETosis プロセスを引き起こす可能性が評価されます。

計画された手順と収集された情報 健康診断: (正確な PaO2 / FiO2 比を評価するための血圧、心拍数、SpO2)。

通常の臨床診療と同様に、Covid-19患者は、血球数、クレアチニン、脂質プロファイル、PCR、D-ダイマー、LDH、肝機能指数、および血糖値を決定するために静脈サンプリングを受けます。

被験者ごとに正確な病歴が作成されます。 患者は、臨床的必要性に応じて、心電図と胸部X線、および選択された場合には胸部CTスキャンを受けます。

また、静脈エコーカラードップラー下肢検査も受けます。 静脈軸の完全な分析は必要ありません。 NETosis マーカー (Cf-DNA. MPO-DNA、Cit-H3) およびサイトカイン IL-6 および IL-1β は、被験者の血漿から分析されます。

唾液サンプル（または診断治療目的で必要な場合は気管支肺胞液）が収集され、電子顕微鏡でのNETの検出が評価されます。

インフォームドコンセントが要求されます。

サンプルの計算 サンプルサイズは、2020 年 3 月から 4 月までの Covid-19 の入院数と、現在の期間における数の減少に基づいて定義されました。

100 人の被験者 (50 人の患者と 50 人の対照) が登録される予定です。

統計分析 仮説統計分析: データは記述統計によって収集されます。 推定値には、適切な 95% 信頼区間が付随します。 統計的有意水準は 5% に設定されています。 統計プログラム Stata 14.2 が使用されます。 予定されている検定: t 検定およびマンホイットニー検定。 相関関係は、ピアソンまたはスピアマン係数によって評価されます。 さらに、カプラン・マイヤー分析は、生存分析のためにログランク検定とコックス回帰を使用して実行されます。