マラリア制御のための空間忌避剤としての IR3535 の評価。 (REPELMALARIA)

調査地域と人口

この調査は、モザンビークのソファラ州、ナマタンダ地区、ベベド地区、タンバイのコミュニティで実施されます。 このコミュニティは、ムトンド ヘルス センターによってカバーされています。

研究デザイン

次の 2 つのグループを使用して、実験的な制御介入前後の前向き試験を実施します。 −アセチル−Ｎ−ブチル）アミノプロピオン酸エチルエステル）およびｂ）対照（丹波地区３（Ｑ３）および４（Ｑ４）の共同体）：噴霧なし。 この縦断研究は2年間続きます。 蚊は屋内と屋外で捕獲され、伝染に関連する昆虫学的指標を決定します。 コミュニティ内の蚊の繁殖地は、「参加型マッピング」を使用してマッピングされます。 5 歳未満の子供のマラリアの有病率は、調査の開始時、中間時、終了時に、コントロール コミュニティと介入コミュニティで決定されます。 タンバイの世帯主 (第 2 四半期、第 3 四半期、第 4 四半期、第 6 四半期)、医療専門家、地域社会の主要関係者に対するマラリアに関する KAP 調査。

集団への介入と手順

当初、Beira Operational Research Center (CIOB) と Nova University Lisbon (IHMT-NOVA) の Institute of Hygiene and Tropical Medicine は、Mutondo 保健センター、Sofala の州保健総局、および保健省の保健局地区と協力して、ニャマタンダとゴロンゴサ国立公園は、参加型の方法で介入を提示し、研究の最初からコミュニティによるその割り当てを保証するために、コミュニティに向けられたアプローチを説明します. 調査を実施する前に、コミュニティに通知し、コミュニティが調査の目的を理解できるように、地域の構造について簡単な説明を行います。

コミュニティの知識、態度、実践 (KAP) に関する調査。

開始時（ベースライン）、1 年目の終わり、2 年目の終わりに 3 回の KAP 調査が実施されます。 調査母集団は、タンバイの第 2 四半期、第 3 四半期、第 4 四半期、および第 6 四半期のすべての世帯で構成されます。 世帯データは、ODK アプリケーションを介して、Android システムを使用してタブレット用に設計されたアンケートを使用して収集されます。 世帯主へのインタビューは、自宅または提案された場所で行われます。 マラリアと忌避剤の使用の受容性に関連するさまざまな側面に関する KAP は、フォーカス グループと地元の主要関係者へのインタビューによって補完されます。 データの収集は、次の 2 つの手法に基づいて行われます。a) ヴィーニョ保健センターの医療専門家 (母子保健看護師と予防医学の専門家)、2 人の活動家、および地元の指導者; b) 調査中の 2 つのコミュニティの婦人と伝統医学の実践者によるフォーカス グループ (Flick、2006 年)。 研究のこのコンポーネントのすべての参加者は、意図的に選択されます (Hancock、Ockleford、および Windridge、2009 年)。 参加は、インフォームドコンセントに署名することによって行われます。

マラリアの流行

マラリア有病率は、調査の開始時、2 年目の開始時、および終了時に、Tambai Q2 および Q6 (介入) と Tambai Q3 および Q4 (対照) の両方の場所で 5 歳未満の子供で決定されます。 2年目（プロジェクト終了）。 法定後見人に同意が求められます。 滅菌ピペットと個々のランセットを使用して、調査対象の生後 6 ～ 59 か月のすべての子供から毛細血管血を収集します。 b) 血液滴塗抹標本および c) 核酸抽出用のろ紙 (FTA Cards ThermoFisher)。 サンプルはコード化され、関連する世帯の座標に関する情報が記録されます。 最初のサンプル処理は、MTA で定義されているように、ポンタ ギアのヘルス センター - ベイラの研究所で行われ、分子分析はリスボンの IHMT-NOVA で行われます。 マラリア原虫の同定は、PCR および全ゲノム配列決定によるジェノタイピングによって行われます (Ocholla et al. 2014)。 研究中にRDTによってマラリアと診断された子供は、治療のためにムトンド保健センターに紹介されます。

忌避剤によるハウススプレー

IR3535 の噴霧は、研究の開始時に開始され、最初の 3 か月間は毎月、次の 6 か月間は隔月で、その後は四半期ごとに実行されます。 噴霧は午前中に家の内外で行われます。 散布は介入区画でのみ行われ、管理区画では散布は行われません。

昆虫学

昆虫学的研究のために、世帯は無作為に選択されます。 衛星画像と地理的分析が失敗した場合 (Wampler et al. 2013、Escamilla et al. 2014)、各コミュニティの世帯の在庫に基づく従来のアプローチが手動で使用されます。 ローカル マッピングと番号付けを使用して、番号付けされた世帯の 2 つのリストが作成されます。 乱数ジェネレーターの後 (例: Random.org) 各リストから世帯をランダムに選択するために使用されます (Wampler et al. 2013)。 蚊は、介入区と管理区で 2 年間、選択された世帯の家屋の内外で月に 2 回収集されます。 各家庭内で、前夜に餌を与えた休眠中の蚊を、Prokopak 吸引器を使用して収集します。 住居の外では、CDCライトトラップが夕方に設置され、翌朝に回収されます。 トラップは屋外で、世帯を構成する建物 (家屋) から等距離の場所に配置されます。 蚊の生理学的状態が決定され、メスは無給餌、部分給餌、給餌、半妊娠、または妊娠に分類されます (Detinova、1962)。 蚊のメスは形態学的に識別され、PCR によって確認されます (Abilio et al. 2015)。 コントロールおよび介入コミュニティで捕獲された蚊の密度は、ウィリアムズの幾何平均を使用して推定されます。 GEE と LMM を調査して、2 つのグループを経時的に比較します。 感染率は、蚊のスポロゾイトを検出および定量化することによって決定されます。 蚊の頭と胸部を取り除き、DNA を分離する準備をします (Abilio et al. 2011)。 スポロゾイトは、(Marie et al. 2013) に記載されているように、定量的 PCR (qPCR) によって検出および定量化されます。

繁殖地のマッピング

蚊の繁殖地は、「参加型マッピング」アプローチを使用してマッピングされます (Dickin et al. 2014)。 この方法は、既存の繁殖地の空間的識別に基づいて、コミュニティにおけるマラリアリスクの空間的認識を識別するために使用されます。 インタビューの参加者とフォーカスグループは、コミュニティでの繁殖に関連する地域の地図を描き、地図の重要な特徴を説明するよう招待されます. 次に、これらのマップを地理情報システム (GIS) でデジタル化して、コミュニティの知識のジオリファレンス マップを作成できます。

地域社会におけるマラリア症例

研究中、タンバイでのマラリアの症例は、ムトンド保健センターを訪れる患者を通じて監視されます。 マラリアが疑われるコミュニティから、あらゆる年齢の患者が募集されます。 アンケートを実施いたします。 ＲＤＴ、濃厚滴および血液塗抹標本が実施され、その後のＰＣＲによる分子診断のために一滴の血液が収集される（上記のように）。 患者が保健ユニットで必要なすべてのケアを受けた後、登録と同意が求められます。 書面によるインフォームドコンセントは、参加者または18歳未満の患者の法定代理人から取得されます。

研究変数

調査変数は、調査 (アンケート) と半構造化インタビューからの変数に分けることができます。 変数は、次のカテゴリにグループ化できます。

• 社会人口学的変数: 年齢;セックス;配偶者の有無;職業;教育レベル;家主との親族関係。世帯規模（世帯数、面積）;家の部屋数;部門ごとの人数;建設の種類。
• 蚊帳の所有と使用：蚊帳の所有。蚊帳の使用;世帯構成員の移動性と活動。
• マラリアの知識、態度、実践：マラリアの知識レベル。マラリアに対する態度;蚊の駆除と咬傷;蚊帳の所有、保存、使用。忌避剤に関する知識;アンケート データを分析した後、変数が推定されます。マラリアに関する知識、態度、実践のレベル (悪い (> 50%)、中 (50% -74%)、高 (≥75%) に分類されるスコア)。

研究の変数は、生物学的材料（末梢血と蚊）の収集から生じるものでもあります。

• 5 歳未満の子供のマラリア症例 (RDT、光学顕微鏡、PCR)。
• Vinho Health Centerに通うマラリア症例。
• 家の内外の蚊の密度。感染した蚊の割合;家の内外における蚊種の分布。
• 繁殖地（参加型マッピング）

KAPのサンプルサイズ

調査中のコミュニティの総世帯数に対応する、約 126 世帯の世帯主が調査されます (モザンビーク国立統計研究所 (INE) のレポートによると、2017 年)。 選択された場所は 126 世帯のみで構成されているため、調査の最大電力を保証するために、連絡を受けたすべての人が参加に含まれます。

介入と制御コミュニティにおけるマラリアの有病率

2017 年の INE レポートによると、2 つの調査地域の総人口は 630 人です。 5 歳未満の子供の数を計算するには、総人口に 17.5% を掛けたので、サンプルは約 110 人の子供で構成されます。 すべての子を含める試みは、可能な限り高い検出力を保証するサンプル サイズを取得しようとすることを目的としています。

昆虫学的指標のサンプルサイズと統計的検出力

サンプルサイズを計算するために、さまざまなシナリオとプログラムが調査されました。 最初に、サンプルサイズ 40 世帯 (各コミュニティで 20 世帯) に対応するシナリオが 48 瞬間続くと考えられていました。 統計的検出力は、G * Power v.3.2 プログラム (Faul et al. 2007, 2009) を使用して計算され、異なる時間に行われた測定値間の相関は 0.2 でした。サイズ f = 0.25 の効果あり。 0.05 に等しいタイプ I エラー確率。 91.1% の統計的検出力が推定されました。 逆に、同じパラメーター値の場合、検出力を 95% に固定し、ANOVA を繰り返し測定に使用するという観点から、各コミュニティで 24 の集計が得られました。 ただし、反復測定の ANOVA の仮定が失敗した場合は、LMM または GEE モデルが使用されるため、これらのモデルの統計的検出力を把握することが重要です。 前のシナリオでは、R ソフトウェアの Longpower パッケージ (https://www.rdocumentation.org/packages/longpower/versions/1.0-19/topics/longpower-package) を使用して、GEE および LMM モデルに関連付けられた電力を計算します。 (24 世帯)、満足できるものではありません。 欠損値の可能性 (最後の訪問で最大 20%)、各訪問での測定値のより現実的な自己回帰相関行列を考慮して、さまざまなタイプのモデルに対して少なくとも 80% の検出力を保証するために、Longpower でいくつかのシナリオが調査されました。 . このように、予算と人的資源を確保しながら、各場所に 40 世帯 (合計 8​​0 世帯) を配置し、各世帯を毎月 1 回訪問しています。

データ解析

データは、SPSS バージョン 25.0 および R パッケージを使用して分析されます。 最初に、記述統計と探索的分析が実行されます。 パラメトリックおよびノンパラメトリック検定は、独立したサンプル (たとえば、特定の時点で 2 つのコミュニティを比較する) またはペアのサンプル (研究の最初、中間、および最後に各コミュニティを比較する) のいずれかに使用されます。 カイ二乗検定またはフィッシャー検定を使用して、質的変数間の関連性を検定したり、独立したグループ間の比率を比較したりします。 対になった質的データの場合、McNemar 検定と Cochran の Q 検定 (バイナリ データの場合) が適用されます。 量的変数の場合、2 つの独立したグループの比較は、T-Student 検定を使用して実行されます。これは、正規性と分散の均一性の仮定に準拠している場合、または代わりに Mann-Whitney-Wilcoxon 検定を使用する場合です。 ANOVA または Kruskal-Wallis 検定は、3 つ以上のグループに使用されます。 Signs、Wilcoxon、および Friedman 検定を使用して、2 つ以上のペアのサンプルを比較します。 サンプルサイズが許せば、一般化された線形モデルを使用して、関心のあるいくつかのイベント (忌避剤の使用など) のいくつかの説明変数を共同で分析できます。 介入群と対照群の間の縦断的比較では、昆虫学的指標と同様に、R. ソフトウェアのいくつかのパッケージを使用して、混合線形モデルと一般化推定方程式モデル、または要因実験における縦断的データのノンパラメトリック分析 (nparLD) アプローチが適用されます。 . （報告試験の統合基準）CONSORT2010 基準、治療意図（IT）分析が使用され、欠損値の治療を事前に進める必要がある場合があります。 p の場合、差異と関連性は統計的に有意であると見なされます。

スポロゾイト率 (唾液腺にスポロゾイトを持つ蚊の割合) は、コントロール コミュニティと介入コミュニティの間で比較され、減少率が決定されます。 ArcGIS 10 と空間分析および統計ツールを使用して、さまざまな蚊の種とその密度の時間的および空間的分布を調査し、2 つの場所 (コントロール x 介入) 間で比較します。

定性的コンポーネントでは、インタビューを録音した後、完全な文字起こしが行われます。 データの処理と分析は、コンテンツ分析技術を使用して手動で行われます。

データ管理 - アンケート

Open Data Kit (ODK) は、データ収集とその品質管理に使用されます。 スーパーバイザーは、保管のために CIOB にある安全なサーバーに送信する前に、インタビューを毎日確認します。 サーバーには、データ管理者と研究者チームのみがアクセスできます。 転送されたデータには、参加者の名前は含まれず、コードのみが含まれます。 データ管理者は毎日データをクリーニングして検証し、フィールド スタッフにフィードバックを提供します。 インフォームド コンセント、データ収集フォーム、電子デバイス (GPS およびタブレット) などのすべての物理的な文書は保存され、CIOB の主任研究者のみがアクセスできます。 紙の文書は調査終了後 5 年間保管し、その後破棄します。

データ管理 - 有病率と昆虫学

データは、紙のデータ収集フォームを通じて収集されます。 毎日、各データコレクターは、コンピューターで利用可能なデータベースにすべてのデータを入力し、チームの責任者による慎重な改訂の後、データマネージャーに送信する必要があります。 データ管理者は、データを受け取った後、パスワードで保護されたフォルダを作成して、データを毎日アーカイブすることができます。

品質管理と監視 - スタッフのトレーニング

研究担当者は、研究の研究チームによって適切に訓練されます。 フィールドチームは、次の 3 つのグループに分けられます。

• 血液サンプルを収集し、世帯主に調査を実施し、医療専門家とのインタビューを実施します。 チームは、研究経験のある 3 人の医療技術者で構成されます。
• 蚊の収集と繁殖地のマッピング。 チームは 2 人の昆虫学技術者で構成されます。
• 家に忌避剤を噴霧する噴霧器。 チームは4人で構成されます。

トレーニングは、倫理的側面、世帯の選択、6 ～ 59 か月の子供、インタビューの実施、採血手順、適切な臨床および実験室の実践、蚊の収集、操作、識別、処理と保管、繁殖マッピングと噴霧技術に焦点を当てます。安全性。

品質管理と監視 - 現場作業の監督

チームには、フィールド作業の監視とデータ品質の確保を担当するフィールド コーディネーターが配置されます。 研究中、監督者のチームが定期的に現場チームを訪問し、適切な慣行を確保します。 データの品質管理 (QC) はパイロット フェーズで開始され、不明確な用語や研究課題の識別と置換が行われます。 また、現場コーディネーターは、標準作業手順書 (SOP) および倫理原則の順守を継続的に評価します。

データの品質と品質保証

ベースライン調査には、調査の一部ではないコミュニティでのトレーニング中に実施されるパイロットが含まれます。 パイロットの目的は、(i) データ収集手段の内容を評価および検証すること、(ii) 研究に関連する倫理的側面を確実に遵守することです。 パイロットは、アンケートの際に問題や漏れを特定するのに役立ちます。 パイロットは、フィールドワーク戦略、チーム構成、スタッフの責任、およびすべての活動を完了するのに必要な時間を分析します。

フィールド コーディネーターは、CIOB に送信される前に行われた調査の品質管理を行い、フィールド コーディネーターによって行われる品質管理に加えて、主な研究者もデータの品質を保証するための監督を行います。

データの保存

データは CIOB に保管されます。 物理フォーマットのインフォームド コンセントを含む研究文書とデータ収集手段。これらはファイル フォルダーに配置され、ロックされた状態で保管され、研究者のアクセスは制限されます。 研究に関連するすべての文書は、法律の規則に従って提出され、CIOB に 5 年間保管されます。

生体サンプルの保管

血液と蚊のサンプルの一部は、ポルトガルの IHMT-NOVA の研究所で処理されます。その目的のために、CIOB とポルトガルの IHMT-NOVA の間で材料移転契約 (MTA) が締結されています。 血液サンプルの一部は、現在のプロジェクトを明示的に参照して、博士号および/または修士プログラムの範囲で将来の分析のために CIOB に保管されます。 サンプルは、研究終了後 5 年間、-80 ° C の CIOB の冷凍庫に保管されます。 さらなる分析に使用されない生物学的サンプルは、研究内の分析の最後に破棄されます。

倫理審査

この研究プロトコルは、倫理的承認のために、国立衛生研究所の健康のための生命倫理に関する機関委員会 (CIBS-INS) および健康のための生命倫理に関する国家委員会 (CNBS) に提出されました。 63/CNBS/20 および補遺参照。 11/CNBS/21. この研究は、第 64 回総会での「2013 年ヘルシンキ宣言」などの「適正臨床実践 (GCP)」、「適正臨床および検査実施 (GCLP)」の規則、および適用されるすべての規制要件に従って実施されます。 .

インフォームドコンセント

世帯主、親または子供の法定代理人、および研究のために選択された医療専門家からの同意は、訓練を受けた面接官によって得られます。 彼らは、インフォームドコンセントとインタビューのリクエスト中に現地の言語（セナ語とンダウ語）に堪能であるか、通訳が同行します。 すべての参加者は、研究の目的、研究中に実行される手順、および潜在的な関連する不便さ、およびインフォームドコンセントに署名した後でも研究を中止する可能性について知らされます。

参加者はインタビューの瞬間にプライバシーの権利を持ち、参加者が快適に感じる場所で開催され、彼が提供するすべての情報は機密であることを説明し、インタビューの録音の許可は具体的に与えられます要求されました。 世帯主の許可が必要で、6 か月から 59 か月の世帯の子供から指を刺して血液サンプルを採取します。 お子様の法定代理人が世帯主と異なる場合は、お子様にもインフォームド コンセントが適用されます。 子供の親/法定後見人が 18 歳未満の場合、子供の参加を承認するためにインフォームド コンセントが管理されます。

以下の手順の重要性を説明しながら、研究中の定期的な訪問の許可が求められます。

• 彼らの家（屋内と屋外）に蚊よけスプレーをスプレーする（毎月）。 丹波 Q2 と Q6 のみ。
• 2 か所で、家の内外から蚊を集めます (月に 2 回)。

質問者と各参加者は、インフォームド コンセント フォームの 2 つのコピーに署名します。1 部は参加者に保管され、もう 1 部は調査フォルダーに後で提出するために質問者に保管されます。 研究の主任研究者の連絡先は、文書の不可欠な部分です。 インフォームド コンセント フォームは、参加者が自分の自由意志で研究に参加することを受け入れたことの証拠となります。 機密性を保証するために、各参加者にはアンケートの識別コードが割り当てられます。 作成された各アンケートには、同意に対応するコードがあります。

参加リスク

参加のリスクは最小限に抑えられますが、参加者がインタビュー中に質問に不快感を覚えた場合は、質問を渡すよう求めることができます。 血液サンプルの採取中に、採取部位からの出血や炎症の同じリスクがあるかもしれません。 その特定の活動のために訓練された医療専門家を通じて、毛細血管血を収集するための適切な材料 (滅菌済みランセットと使い捨て手袋) が提供されることを最小限に抑えるため。 忌避剤を家に散布することに関して、参加者は潜在的なまれな悪影響について通知されます。 噴霧が行われた住居の誰かが、製品に関連する疑いのある反応を示した場合、その住居での噴霧は中断され、個人は保健サービスに紹介されます.

参加特典

多くの場合、インタビューを行った後、コミュニティでの知識の増加が認められます。 これは、多くの場合、アンケートを適用する人がベストプラクティスに注意を払うことができ、コミュニティの健康の改善に貢献できるという事実によるものです. 利点の 1 つは、自分がマラリアに感染しているかどうかを知ることです。さらに、マラリアと診断された子供は治療の恩恵を受けることができます。