评估 IR3535 作为疟疾控制的空间驱虫剂。 (REPELMALARIA)

研究区域和人口

该研究将在莫桑比克索法拉省 Nhamatanda 区 Bebedo 地区的 Tambai 社区进行。 该社区由 Mutondo 健康中心提供服务。

学习规划

将对两组进行前瞻性实验前后控制干预测试：a）干预（Tambai 社区 2（Q2）和 6（Q6））：在室内和室外喷洒 IR3535（3-（N -乙酰基-N-丁基)氨基丙酸乙酯)和b)对照(Tambai社区3(Q3)和4(Q4))：不喷洒。 这项纵向研究将持续 2 年。 将在室内和室外捕获蚊子以确定与传播相关的昆虫学指标。 社区中的蚊子滋生地将使用“参与式绘图”进行绘图。 五岁以下儿童的疟疾患病率将在研究开始、中期和结束时在对照和干预社区中确定。 一项针对 Tambai 住户（Q2、Q3、Q4；Q6）以及卫生专业人员和主要社区参与者的疟疾 KAP 调查。

人口干预和程序

最初，贝拉业务研究中心 (CIOB) 和新里斯本大学卫生与热带医学研究所 (IHMT-NOVA) 与 Mutondo 健康中心、索法拉省卫生局和Nhamatanda 和 Gorongosa 国家公园将以参与的方式介绍干预措施，并解释针对社区的方法，以确保社区从研究开始就对其进行拨款。 在进行研究之前，将通知社区，并向当地机构简要介绍，以便社区了解研究的目标。

社区知识、态度和做法 (KAP) 调查。

将在开始（基线）、第一年末和第二年末进行三项 KAP 调查。 研究人群将包括来自 Tambai 的 Q2、Q3、Q4 和 Q6 的所有家庭。 家庭数据将通过 ODK 应用程序使用专为平板电脑设计的问卷收集，带有 Android 系统。 对户主的面谈将在他们的家中或他们提议的地点进行。 关于疟疾的 KAP 以及与使用驱虫剂的可接受性相关的不同方面将通过焦点小组和对当地主要参与者的访谈来补充。 数据收集将基于两种技术进行：a) 半结构化访谈（Flick，2006 年），对象是 Vinho 健康中心的健康专家（一名妇幼保健护士和一名预防医学专家）、两名积极分子和地方领导人； b) 焦点小组（Flick，2006 年）与来自所研究的两个社区的主妇和传统医学从业者。 将有意选择该研究的所有参与者（Hancock、Ockleford 和 Windridge，2009 年）。 参与将通过签署知情同意书进行。

疟疾流行率

将在研究开始时、第二年年初和研究结束时确定 Tambai Q2 和 Q6（干预）以及 Tambai Q3 和 Q4（对照）两个地点 5 岁以下儿童的疟疾患病率第二年（项目结束）。 将征求法定监护人的同意。 将使用无菌移液管和个体柳叶刀从研究中所有 6-59 个月大的儿童中采集毛细血管血，用于：a) 恶性疟原​​虫快速诊断测试 (RDT)； b) 血滴涂片和 c) 用于核酸提取的滤纸 (FTA Cards ThermoFisher)。 样本将被编码，相关家庭的坐标信息将被记录。 初始样品处理将在 Ponta Gea 健康中心的实验室进行 - 贝拉，分子分析在 IHMT-NOVA - 里斯本，如 MTA 中所定义。 疟原虫的鉴定将通过 PCR 和全基因组测序的基因分型来完成（Ocholla 等人，2014 年）。 在研究期间通过 RDT 诊断出患有疟疾的儿童将被转诊至 Mutondo 健康中心接受治疗。

房屋喷洒驱虫剂

IR3535 喷洒将在研究开始时开始，前 3 个月每月一次，接下来的 6 个月每两个月一次，此后每季度一次。 喷洒将在上午在鸡舍内外进行。 喷洒只会在干预区进行，而不会在控制区喷洒。

昆虫学

对于昆虫学研究，将随机选择住户。 如果卫星图像和地理分析失败（Wampler 等人，2013 年，Escamilla 等人，2014 年），将手动使用基于每个社区家庭清单的经典方法。 使用本地映射和编号，将创建两个编号家庭列表。 在随机数生成器（例如 Random.org）之后 将用于从每个列表中随机选择家庭（Wampler 等人，2013 年）。 在干预区和控制区，将在为期 2 年的选定家庭的房屋内外每月收集两次蚊子。 在每个家庭中，将使用 Prokopak 吸气器收集前一晚喂食的静止蚊子。 在住所外，CDC-光陷阱将在傍晚放置并在第二天早上收集。 陷阱将放置在户外，与构成家庭的建筑物（房屋）等距的地方。 将确定蚊子的生理状态，并将雌性分为未进食、部分进食、进食、半妊娠或妊娠（Detinova，1962）。 雌性蚊子将通过 PCR 进行形态学鉴定和确认（Abilio 等人，2015 年）。 控制和干预社区中捕获的蚊子密度将使用威廉姆斯的几何平均值进行估算。 将探索 GEE 和 LMM 以比较两组随时间的变化。 感染率将通过检测和量化蚊子中的子孢子来确定。 蚊子的头部和胸部将被移除并准备分离 DNA (Abilio et al. 2011)。 如 (Marie et al. 2013) 中所述，将通过定量 PCR (qPCR) 检测和量化子孢子。

繁殖地点测绘

将使用“参与式制图”方法绘制蚊子滋生地（Dickin 等人，2014 年）。 该方法将用于根据现有繁殖地点的空间识别来识别社区中疟疾风险的空间感知。 访谈参与者和焦点小组将被邀请绘制一张他们与社区繁殖相关的区域的地图，并描述地图的重要特征。 然后可以在地理信息系统 (GIS) 上将这些地图数字化，以创建社区知识的地理参考地图。

社区疟疾病例

在研究期间，将通过访问 Mutondo 健康中心的患者监测 Tambai 的疟疾病例。 将招募来自疑似疟疾社区的所有年龄段的患者。 将进行问卷调查。 将进行 RDT、厚滴和血涂片，并收集一滴血用于随后通过 PCR 进行分子诊断（如上所述）。 患者在卫生部门接受了他们需要的所有护理后，将征求登记和同意。 对于 18 岁以下的患者，将从参与者或其法定代表处获得书面知情同意书。

研究变量

研究变量可分为调查（问卷）变量和半结构式访谈变量。 变量可以分为以下几类：

• 社会人口变量：年龄；性别;婚姻状况;职业;教育程度;与户主的亲属关系；家庭规模（房屋数量、面积）；房子里的房间数量；每个师的人数；建筑类型。
• 蚊帐的拥有和使用：蚊帐的拥有；使用蚊帐；家庭成员的流动性和活动。
• 疟疾知识、态度和做法：疟疾知识水平；疟疾态度；蚊虫控制和叮咬；蚊帐的拥有、保存和使用；驱虫剂知识；对问卷数据进行分析后，推导出变量；关于疟疾的知识、态度和实践水平（评分分为：差（> 50%）、中等（50% -74%）和高（≥75%））。

研究的变量也将是收集生物材料（外周血和蚊子）产生的变量：

• 五岁以下儿童的疟疾病例（RDT、光学显微镜和 PCR）；
• 在 Vinho 健康中心就诊的疟疾病例；
• 住宅内外的蚊子密度；受感染蚊子的百分比；家庭内外蚊子种类的分布；
• 养殖场（参与式测绘）

KAP 的样本量

将对大约 126 户住户进行调查（根据莫桑比克国家统计局 (INE) 2017 年的报告），这相当于所研究社区的家庭总数。 所选地点仅由 126 户家庭组成，因此所有接触到的人都将被包括在内，以保证研究的最大力量。

干预和控制社区的疟疾流行率

根据 INE 报告，2017 年，两个研究区的人口总数为 630 人。 为计算 5 岁以下儿童的数量，将总人口乘以 17.5%，因此样本将包含约 110 名儿童。 将所有儿童都包括在内的尝试旨在尝试获得能够保证我们获得最高功效的样本量。

昆虫学指标的样本量和统计功效

探索了不同的场景和程序来计算样本量。 最初，对应于样本量为 40 户（每个社区 20 户）的情景被认为是可行的，随后持续 48 分钟。 使用 G * Power v.3.2 程序（Faul 等人，2007 年、2009 年）计算统计功效，不同时间进行的测量之间的相关性为 0.2；具有大小 f = 0.25 的影响； I 类错误概率等于 0.05。 估计统计功效为 91.1%。 相反，对于相同的参数值，将功效固定在 95%，从使用 ANOVA 进行重复测量的角度来看，每个群落获得 24 个聚集体。 但是，如果重复测量的 ANOVA 假设失败，将使用 LMM 或 GEE 模型，因此了解这些模型的统计功效很重要。 使用 R 软件的 Longpower 包（https://www.rdocumentation.org/packages/longpower/versions/1.0-19/topics/longpower-package），与 GEE 和 LMM 模型相关的功率，用于前面的场景（24户），不尽如人意。 考虑到缺失值的可能性（上次访问高达 20%），每次访问测量的更现实的自回归相关矩阵，在 Longpower 中探索了几种场景以保证至少 80% 的功率，用于各种类型的模型. 因此，在保持预算和人力资源可用的情况下，我们在每个地点有 40 户人家（总共 80 户人家），每月对每户人家进行一次访问。

数据分析

数据将使用 SPSS 25.0 版和 R 包进行分析。 最初，将进行描述性统计和探索性分析。 参数和非参数测试将用于独立样本（例如，在给定时间比较两个社区）或配对样本（在研究的开始、中间和结束时比较每个社区）。 卡方检验或 Fisher 检验将用于检验定性变量之间的关联或比较独立组之间的比例。 对于成对的定性数据，将应用 McNemar 检验和 Cochran 的 Q 检验（对于二进制数据）。 对于定量变量，两个独立组的比较将使用 T-Student 检验进行，如果符合正态性和方差同质性假设，或者 Mann-Whitney-Wilcoxon 检验。 ANOVA 或 Kruskal-Wallis 检验将用于两组以上。 Signs、Wilcoxon 和 Friedman 检验将用于比较两个或多个配对样本。 如果样本量允许，可以使用广义线性模型联合分析某些感兴趣事件（例如，使用驱虫剂）的多个解释变量。 对于干预组和对照组之间的纵向比较，至于昆虫学指数，混合线性模型和广义估计方程模型或因子实验中纵向数据的非参数分析（nparLD）方法将被应用，使用 R. 软件的几个包. 将使用（报告试验综合标准）CONSORT2010 标准，进行意向治疗 (IT) 分析，并且可能需要预先处理缺失值。 当 p

子孢子率（唾液腺中具有子孢子的蚊子的百分比）将在对照和干预社区之间进行比较，并确定减少的百分比。 将使用带有空间分析和统计工具的 ArcGIS 10 探索不同蚊子种类及其密度的时间和空间分布，并在 2 个位置（对照 x 干预）之间进行比较。

在定性部分，在记录访谈后，将进行完整的转录。 数据处理和分析将是手动的，使用内容分析技术。

数据管理 - 问卷

开放数据工具包 (ODK) 将用于数据收集及其质量控制。 主管将每天审查访谈，然后将它们发送到位于 CIOB 的安全服务器进行存储。 服务器将仅供数据管理员和研究人员团队访问。 传输的数据不包括参与者的姓名，仅包括他们的代码。 数据管理员将每天清理和验证数据，并向现场工作人员提供反馈。 所有物理文件，如知情同意书、数据收集表格和电子设备（GPS 和平板电脑）都将被存储，并且只有 CIOB 首席研究员可以访问。 纸质文件将在研究完成后保存 5 年，然后销毁。

数据管理 - 流行率和昆虫学

数据将通过纸质数据收集表收集。 每天，每个数据收集员都必须将所有数据输入计算机上可用的数据库中，并在团队负责人仔细修改后将其发送给数据管理员。 数据管理员收到数据后，她/他可以创建一个密码保护的文件夹来每天归档数据。

质量控制和监控 - 员工培训

研究人员将接受研究团队的适当培训。 现场团队将分为三 (3) 组：

• 收集血样并对住户进行调查，并与卫生专业人员进行访谈。 该团队将由 3 名具有研究经验的卫生技术人员组成。
• 蚊子收集和繁殖地点测绘。 该团队将由 2 名昆虫学技术人员组成。
• 将用驱虫剂喷洒房屋的喷雾器。 该团队将由 4 人组成。

培训将侧重于伦理方面、选择家庭、6-59 个月大的儿童、进行面谈、采血程序、良好的临床和实验室规范、蚊子收集、操作、识别、处理和储存、繁殖图和喷洒技术以及安全。

质量控制和监测 - 现场工作的监督

这些团队将有一名现场协调员，负责监督现场工作并确保数据质量。 在研究期间，一组主管将定期访问现场团队以确保正确的做法。 数据的质量控制 (QC) 将从试验阶段开始，识别和替换不明确的术语和研究问题。 现场协调员还将持续评估是否符合标准操作程序 (SOP) 和道德原则。

数据质量和质量保证

基线研究将包括一项试点，该试点将在不属于该研究的社区中进行培训。 试点将有以下目标 (i) 评估和验证数据收集工具的内容，(ii) 确保遵守与研究相关的伦理方面。 试点将有助于找出问卷调查过程中的难点和遗漏。 试点将分析实地工作策略、团队组成、工作人员职责和完成所有活动所需的时间。

现场协调员将在将查询发送给 CIOB 之前对其进行质量控制，除了现场协调员进行的质量控制外，主要调查人员还将进行监督以确保数据质量。

数据存储

数据将存储在 CIOB。 研究文件和数据收集工具，包括物理格式的知情同意书，将被放置在文件夹中并保持锁定状态，研究人员访问受到限制。 所有与研究相关的文件将根据立法规定归档，并在 CIOB 保存 5 年。

生物样本的储存

部分血液和蚊子样本将在葡萄牙 IHMT-NOVA 的实验室进行处理，为此，CIOB 与葡萄牙 IHMT-NOVA 签署了材料转移协议 (MTA)。 部分血液样本将保存在 CIOB 中，以供未来在博士和/或硕士课程范围内进行分析，明确指的是本项目。 样本将保存在 CIOB 的-80°C 冰箱中，在研究结束后保存 5 年。 不会用于进一步分析的生物样本将在研究分析结束时销毁。

伦理审查

本研究方案已提交给美国国立卫生研究院 (CIBS-INS) 的健康生物伦理学机构委员会和国家健康生物伦理学委员会 (CNBS) 以供伦理批准 - 清关参考。 63/CNBS/20 和增编参考。 11/CNBS/21。 该研究将按照“良好临床规范（GCP）”、“良好临床和实验室规范（GCLP）”的规则以及所有适用的监管要求，如 2013 年赫尔辛基宣言，在其第 64 届大会上进行.

知情同意

受过训练的访谈员将征得被选中参加研究的儿童的户主、父母或法定代表以及卫生专业人员的同意。 他们将精通当地语言（Sena 和 Ndau），或在请求知情同意和访谈期间由翻译陪同。 所有参与者都将被告知研究的目的、研究期间要执行的程序和潜在的相关不便，以及即使在签署知情同意书后离开研究的可能性，对他们没有任何影响。

采访时参与者将享有隐私权，采访将在参与者感到舒适的地方进行，并说明他提供的所有信息都将保密，采访录音的授权将被特别授权要求。 从家庭中 6-59 个月大的儿童身上采集指尖血样需要征得住户同意。 如果孩子的法定代表人不是户主，她/他也将获得知情同意。 如果孩子的父母/法定监护人未满 18 岁，将获得知情同意书以授权孩子参加。

在解释以下程序的重要性时，将要求在整个研究期间获得定期访问的授权：

• 向他们的房屋（室内和室外）喷洒驱蚊剂（每月一次）。 仅在淡白Q2和Q6；
• 在两个地方的房屋内外收集蚊子（每月两次）。

询问者和每位参与者将签署 2 份知情同意书，其中一份由参与者保留，另一份由询问者保留，以便以后归档在研究文件夹中。 研究的主要研究者的联系方式是文件的组成部分。 知情同意书将作为参与者自愿接受参与研究的证明。 为了保证保密性，每个参与者都将被分配一个问卷识别码。 制作的每份问卷都会有一个与同意相对应的代码。

参与风险

参与的风险很小，但如果参与者在采访过程中对任何问题感到不自在，他们可以要求继续提问。 在血液样本采集过程中，采集部位可能存在同样的出血或炎症风险。 为了最大限度地减少，将提供足够的材料来通过针对该特定活动接受过培训的卫生专业人员收集毛细血管血液（经过消毒的柳叶刀和一次性手套）。 关于向房屋喷洒驱虫剂，参与者将被告知潜在的罕见不良影响。 如果进行喷洒的住所内有人出现任何疑似与产品有关的反应，则该住所内的喷洒将被中断，并将此人转介至卫生服务机构。

参与的好处

通常，在进行访谈后，会发现社区的知识有所增加。 这是因为应用问卷的人通常可以提醒最佳做法，这有助于改善社区的健康状况。 好处之一是知道您是否患有疟疾，而且被诊断患有疟疾的儿童将能够从治疗中受益。