Оценка IR3535 в качестве пространственного репеллента для борьбы с малярией. (REPELMALARIA)

Район исследования и население

Исследование будет проводиться в общинах Тамбаи, местности Бебедо, округа Нхаматанда, провинция Софала, Мозамбик. Сообщество обслуживается Центром здоровья Мутондо.

Дизайн исследования

Предполагаемый экспериментальный тест «До-После-Контроля-Вмешательство» будет проводиться с двумя группами: а) Вмешательство (сообщество кварталов Тамбая 2 (Q2) и 6 (Q6)): с опрыскиванием внутри и снаружи помещений IR3535 (3-(N этиловый эфир -ацетил-N-бутил)аминопропионовой кислоты) и б) контроль (сообщество кварталов Тамбай 3 (Q3) и 4 (Q4)): без опрыскивания. Это лонгитюдное исследование продлится 2 года. Комаров будут отлавливать в помещении и на улице для определения энтомологических индикаторов, имеющих отношение к передаче. Места размножения комаров в сообществах будут нанесены на карту с использованием «Совместного картирования». Распространенность малярии среди детей в возрасте до пяти лет будет определяться в контрольной и экспериментальной группах в начале, середине и конце исследования. Опрос KAP по малярии среди домохозяев Тамбаи (Q2, Q3, Q4; Q6), а также медицинских работников и ключевых участников сообщества.

Популяционные вмешательства и процедуры

Первоначально Центр оперативных исследований Бейры (CIOB) и Институт гигиены и тропической медицины Лиссабонского университета Нова (IHMT-NOVA) в сотрудничестве с медицинским центром Мутондо, Управлением здравоохранения провинции Софала и Управлением районного здравоохранения округа Нхаматанда и Национальный парк Горонгоса представят интервенцию на основе участия и объяснят подход, направленный на сообщество, чтобы гарантировать его принятие сообществом с самого начала исследования. Перед проведением исследования сообщества будут проинформированы, а местные структуры проинструктированы, чтобы сообщество могло понять цели исследования.

Опросы знаний, отношения и практики сообщества (KAP).

Будут проведены три обследования ЗОП: в начале (базовый уровень), в конце первого года и в конце второго года. Исследуемая популяция будет включать все домохозяйства из Q2, Q3, Q4 и Q6 Тамбая. Данные о домохозяйствах будут собираться с помощью анкеты, разработанной для планшетов с системой Android, через приложение ODK. Интервью с главой домохозяйства будут проходить у них дома или в предложенном ими месте. KAP о малярии и различных аспектах, связанных с приемлемостью использования репеллентов, будет дополнен фокус-группами и интервью с местными ключевыми участниками. Сбор данных будет осуществляться на основе двух методов: а) полуструктурированные интервью (Flick, 2006) с медицинскими работниками Центра здоровья Винью (медицинская сестра по охране материнства и детства и специалист по профилактической медицине), двумя активистами и местные лидеры; б) фокус-группы (Flick, 2006) с матронами и практиками народной медицины из двух исследуемых сообществ. Все участники этого компонента исследования будут отобраны намеренно (Hancock, Ockleford and Windridge, 2009). Участие будет осуществляться путем подписания информированного согласия.

Распространенность малярии

Распространенность малярии будет определяться среди детей в возрасте до 5 лет в обоих районах Тамбай Q2 и Q6 (вмешательство) и Тамбай Q3 и Q4 (контроль) в начале исследования, в начале второго года и в конце исследования. второй год (окончание проекта). Согласие будет запрошено у законного опекуна. Капиллярная кровь будет собираться с помощью стерильной пипетки и индивидуального ланцета у всех детей в возрасте от 6 до 59 месяцев, участвующих в исследовании, для: а) экспресс-теста (БДТ) на Plasmodium falciparum; б) мазки капель крови и в) фильтровальная бумага для выделения нуклеиновых кислот (FTA Cards ThermoFisher). Образцы будут закодированы, а информация о координатах соответствующего домохозяйства будет записана. Первоначальная обработка образцов будет проводиться в лаборатории Медицинского центра Понта-Хеа — Бейра, а молекулярный анализ — в IHMT-NOVA — Лиссабон, как определено в MTA. Идентификация Plasmodium будет проводиться с помощью ПЦР и генотипирования путем полногеномного секвенирования (Ocholla et al. 2014). Дети, у которых во время исследования была диагностирована малярия с помощью ДЭТ, будут направлены в медицинский центр Мутондо для лечения.

Опрыскивание дома репеллентом

Опрыскивание IR3535 начнется в начале исследования и будет проводиться ежемесячно в течение первых 3 месяцев, раз в два месяца в течение следующих 6 месяцев, а затем ежеквартально. Опрыскивание будет проводиться внутри и снаружи домов в утренние часы. Опрыскивание будет проводиться только в помещениях для проведения мероприятий, в то время как в контрольных помещениях опрыскивание проводиться не будет.

Энтомология

Для энтомологического исследования домохозяйства будут выбраны случайным образом. В случае неудачи спутниковых снимков и географического анализа (Wampler et al. 2013, Escamilla et al. 2014) будет использоваться классический подход, основанный на инвентаризации домохозяйств в каждом сообществе, вручную. С использованием местного картографирования и нумерации будут созданы два списка пронумерованных домохозяйств. После генератора случайных чисел (например, Random.org) будет использоваться для случайного выбора домохозяйств из каждого списка (Wampler et al. 2013). Комаров будут собирать два раза в месяц внутри и снаружи домов в выбранных домохозяйствах в течение 2 лет в интервенционных и контрольных кварталах. В каждом домашнем хозяйстве отдыхающие комары, питавшиеся прошлой ночью, будут собираться с помощью аспиратора Prokopak. За пределами жилых домов светоловушки CDC будут размещены ранним вечером и собраны на следующее утро. Ловушки будут размещаться на открытом воздухе, в местах, равноудаленных от построек (домов), составляющих хозяйство. Будет определено физиологическое состояние комаров, а самок классифицируют на голодных, частично накормленных, сытых, полубеременных или беременных (Детинова, 1962). Самки комаров будут идентифицированы морфологически и подтверждены ПЦР (Abilio et al. 2015). Плотность комаров, пойманных в контрольных и интервенционных сообществах, будет оцениваться с использованием среднего геометрического Вильямса. GEE и LMM будут изучены для сравнения двух групп во времени. Скорость заражения будет определяться путем обнаружения и количественного определения спорозоитов у комаров. Головы и грудная клетка комаров будут удалены и подготовлены для выделения ДНК (Abilio et al. 2011). Спорозоиты будут обнаружены и количественно оценены с помощью количественной ПЦР (кПЦР), как описано в (Marie et al. 2013).

Картирование мест размножения

Места размножения комаров будут нанесены на карту с использованием подхода «совместного картирования» (Dickin et al. 2014). Этот метод будет использоваться для определения пространственного восприятия риска малярии в сообществе на основе пространственной идентификации существующих мест размножения. Участникам интервью и фокус-группам будет предложено нарисовать карту районов, которые они связывают с размножением в сообществах, и описать важные особенности карты. Затем эти карты можно оцифровать в географической информационной системе (ГИС) для создания карты знаний сообщества с географической привязкой.

Случаи малярии в обществе

В ходе исследования случаи малярии в Тамбаи будут контролироваться пациентами, посещающими медицинский центр Мутондо. Будут набраны пациенты всех возрастов из сообществ с подозрением на малярию. Будет проведена анкета. Будут проведены БДТ, толстая капля и мазок крови, а также взята капля крови для последующей молекулярной диагностики с помощью ПЦР (как описано выше). Регистрация и согласие будут запрошены после того, как пациенты получат всю необходимую им помощь в медицинском отделении. Письменное информированное согласие будет получено от участников или их законных представителей для пациентов младше 18 лет.

Переменные исследования

Переменные исследования можно разделить на переменные из опроса (анкеты) и полуструктурированного интервью. Переменные можно сгруппировать в следующие категории:

• Социально-демографические переменные: возраст; Секс; Семейный статус; Профессия; Уровень образования; Степень родства с домохозяином; Размер домохозяйства (количество домов, площадь); Количество комнат в доме; количество человек на подразделение; Тип конструкции.
• Право собственности и использование москитных сеток: Право собственности на москитные сетки; Использование москитных сеток; Мобильность и активность членов домохозяйства.
• Знания о малярии, отношение и практика: Уровень знаний о малярии; отношение к малярии; Борьба с комарами и их укусы; Владение, хранение и использование противомоскитных сеток; Знание репеллентов; После анализа данных анкеты выводятся переменные; Уровень знаний, отношения и практики в отношении малярии (оценка по категориям: плохой (> 50%), средний (50–74%) и высокий (≥75%)).

Переменными исследования будут также полученные в результате сбора биологического материала (периферическая кровь и комары):

• случаи малярии у детей до пяти лет (ДЭТ, оптическая микроскопия и ПЦР);
• Случаи малярии, посещающие медицинский центр Винью;
• Плотность комаров внутри и снаружи домов; Процент зараженных комаров; Распространение видов комаров внутри и снаружи домов;
• Место размножения (совместное картирование)

Размер выборки для KAP

Будет опрошено около 126 домохозяйств (согласно отчету Национального института статистики Мозамбика (INE) за 2017 г.), что соответствует общему количеству домохозяйств в изучаемых сообществах. Выбранные места состоят всего из 126 домохозяйств, поэтому все, с кем свяжутся, будут включены в участие, чтобы гарантировать максимальную мощность исследования.

Распространенность малярии в сообществе, проводящем мероприятия по вмешательству и борьбе

Согласно отчету INE за 2017 год, общая численность населения в двух исследуемых районах составляет 630 человек. Для расчета количества детей в возрасте до 5 лет общая численность населения была умножена на 17,5%, поэтому выборка будет состоять примерно из 110 детей. Попытка включить всех детей направлена ​​на то, чтобы попытаться получить размер выборки, гарантирующий нам максимально возможную мощность.

Размер выборки и статистическая мощность энтомологических показателей

Были изучены различные сценарии и программы для расчета размера выборки. Первоначально сценарий, соответствующий размеру выборки из 40 домохозяйств (по 20 в каждом сообществе) с наблюдением в течение 48 моментов, считался выполнимым. Статистическую мощность рассчитывали с помощью программы G*Power v.3.2 (Faul et al., 2007, 2009), при корреляции между измерениями, выполненными в разное время, 0,2; с влиянием размера f = 0,25; вероятность ошибки I рода равна 0,05. Была оценена статистическая мощность 91,1%. И наоборот, для тех же значений параметров, фиксирующих мощность на уровне 95%, с точки зрения использования ANOVA для повторных измерений в каждом сообществе было получено 24 агрегата. Однако, если предположения ANOVA для повторных измерений не срабатывают, будут использоваться модели LMM или GEE, поэтому важно иметь представление о статистической мощности этих моделей. Используя пакет Longpower (https://www.rdocumentation.org/packages/longpower/versions/1.0-19/topics/longpower-package) программного обеспечения R, мощность, связанная с моделями GEE и LMM, для предыдущего сценария (24 домохозяйства), будет неудовлетворительным. Принимая во внимание возможность пропуска значений (до 20 % при последнем посещении), более реалистичную авторегрессионную корреляционную матрицу для измерений при каждом посещении, в Longpower было исследовано несколько сценариев, чтобы гарантировать как минимум мощность 80 % для различных типов моделей. . Таким образом, также сохраняя доступный бюджет и человеческие ресурсы, у нас есть 40 домохозяйств в каждом месте (всего 80 домохозяйств), с ежемесячным посещением каждого домохозяйства.

Анализ данных

Данные будут проанализированы с использованием SPSS версии 25.0 и пакета R. Сначала будет проведена описательная статистика и исследовательский анализ. Будут использоваться параметрические и непараметрические тесты либо для независимых выборок (например, сравнение двух сообществ в данный момент времени), либо для парных выборок (сравнение каждого сообщества в начале, середине и конце исследования). Хи-квадрат или критерий Фишера будут использоваться для проверки связи между качественными переменными или для сравнения пропорций между независимыми группами. Для парных качественных данных будут применяться критерий Макнемара и Q-критерий Кокрана (для бинарных данных). Для количественных переменных сравнение двух независимых групп будет выполняться с использованием критерия Т-Стьюдента, в случае соблюдения предположений о нормальности и однородности дисперсий, или, альтернативно, критерия Манна-Уитни-Уилкоксона. ANOVA или тест Крускала-Уоллиса будет использоваться более чем для двух групп. Признаки, тесты Вилкоксона и Фридмана будут использоваться для сравнения двух или более парных выборок. Если размеры выборки позволяют, можно использовать обобщенные линейные модели для совместного анализа нескольких объясняющих переменных для некоторых представляющих интерес событий (например, использование репеллентов). Для продольного сравнения между интервенционной и контрольной группами, что касается энтомологических показателей, будут применяться смешанные линейные модели и модель обобщенного оценочного уравнения или подход непараметрического анализа продольных данных в факторных экспериментах (nparLD) с использованием нескольких пакетов программного обеспечения R. . В соответствии со стандартами (Сводные стандарты отчетности испытаний) CONSORT2010 будет использоваться анализ намерения лечить (IT), и может возникнуть необходимость в предварительной обработке отсутствующих значений. Различия и ассоциации будут считаться статистически значимыми, когда p

Уровень спорозоитов (% комаров со спорозоитами в слюнных железах) будет сравниваться между контрольным и экспериментальным сообществом и определяться процент сокращения. Временное и пространственное распределение различных видов комаров и их плотность будут изучаться с использованием ArcGIS 10 с инструментами пространственного анализа и статистики и сравниваться между двумя местоположениями (контроль x вмешательство).

В качественном компоненте после записи интервью будет проведена их полная расшифровка. Обработка и анализ данных будут осуществляться вручную с использованием техники контент-анализа.

Управление данными — Анкеты

Комплект открытых данных (ODK) будет использоваться для сбора данных и контроля их качества. Супервайзер ежедневно просматривает интервью, прежде чем отправить их на защищенный сервер, расположенный в CIOB, для хранения. Сервер будет доступен только администратору данных и команде исследователей. Передаваемые данные не включают в себя имена участников, только их коды. Менеджер данных будет ежедневно очищать и проверять данные и предоставлять обратную связь полевому персоналу. Все физические документы, такие как информированные согласия, формы для сбора данных и электронные устройства (GPS и планшеты), будут храниться и доступны только главному исследователю CIOB. Бумажные документы будут храниться в течение 5 лет после завершения исследования, а затем уничтожаются.

Управление данными — распространенность и энтомология

Данные будут собираться с помощью бумажной формы сбора данных. Каждый день каждый сборщик данных должен вводить все данные в базу данных, доступную на компьютере, и отправлять их менеджеру данных после тщательной проверки ответственным лицом команды. После того, как менеджер данных получит данные, он/она может создать защищенную паролем папку для ежедневного архивирования данных.

Контроль и мониторинг качества - Обучение персонала

Исследовательский персонал будет должным образом обучен исследовательской группой. Полевая команда будет разделена на три (3) группы:

• Сбор образцов крови и проведение опроса домохозяев, а также проведение опросов медицинских работников. Команда будет состоять из 3 медицинских работников с опытом проведения исследований.
• Сбор и картирование мест размножения комаров. Команда будет состоять из 2 техников-энтомологов.
• Опрыскиватели, которые будут опрыскивать дома репеллентом. Команда будет состоять из 4 человек.

Обучение будет сосредоточено на этических аспектах, выборе домохозяйств, детях в возрасте от 6 до 59 месяцев, проведении опросов, процедурах взятия проб крови, надлежащей клинической и лабораторной практике, сборе комаров, манипулировании, идентификации, обработке и хранении, картировании размножения и методах распыления и безопасность.

Контроль качества и мониторинг - Надзор за полевыми работами

У команд будет полевой координатор, который будет отвечать за мониторинг полевых работ и обеспечение качества данных. Во время исследования группа супервайзеров будет периодически посещать выездные группы для обеспечения надлежащей практики. Контроль качества (КК) данных начнется на пилотном этапе с выявления и замены неясных терминов и вопросов исследования. Полевой координатор также будет постоянно оценивать соблюдение стандартных операционных процедур (СОП) и этических принципов.

Качество данных и обеспечение качества

Базовое исследование будет включать пилотный проект, который будет проводиться во время обучения в сообществе, не являющемся частью исследования. Пилотный проект будет иметь следующие цели: (i) оценить и подтвердить содержание инструментов сбора данных, (ii) обеспечить соблюдение этических аспектов, связанных с исследованием. Пилот поможет выявить трудности и упущения при заполнении анкеты. Пилотный проект проанализирует стратегию работы на местах, состав команды, обязанности персонала и время, необходимое для выполнения всех мероприятий.

Полевой координатор будет осуществлять контроль качества запросов, сделанных до того, как они будут отправлены в CIOB, и в дополнение к контролю качества, осуществляемому полевым координатором, главные исследователи также будут осуществлять надзор, чтобы гарантировать качество данных.

Хранение данных

Данные будут храниться в CIOB. Документы исследования и инструменты сбора данных, включая информированное согласие в физическом формате, которые будут помещены в папки с файлами и заблокированы, с ограниченным доступом для исследователей. Все документы, связанные с исследованием, будут оформлены в соответствии с нормами законодательства и будут храниться в ЦИОБ в течение 5 лет.

Хранение биологических образцов

Часть образцов крови и комаров будет обработана в лаборатории IHMT-NOVA, Португалия, с этой целью было подписано соглашение о передаче материалов (MTA) между CIOB и IHMT-NOVA, Португалия. Часть образца крови будет храниться в CIOB для будущего анализа в рамках докторских и/или магистерских программ, прямо относящихся к настоящему проекту. Образцы будут храниться в морозильной камере ЦИОБ при температуре -80°С в течение 5 лет после окончания исследования. Биологические образцы, которые не будут использоваться для дальнейшего анализа, будут уничтожены по окончании анализа в рамках исследования.

Этический обзор

Этот протокол исследования был представлен для этического одобрения в Институциональный комитет по биоэтике здоровья Национального института здравоохранения (CIBS-INS) и в Национальный комитет по биоэтике здоровья (CNBS) — разрешение Ref. 63/CNBS/20 и Приложение Ref. 11/CNBS/21. Исследование будет проводиться в соответствии с правилами «надлежащей клинической практики (GCP)», «надлежащей клинической и лабораторной практики (GCLP)» и всеми применимыми нормативными требованиями, такими как Хельсинкская декларация 2013 г., принятая на 64-й Генеральной ассамблее. .

Информированное согласие

Согласие глав домохозяйств, родителей или законных представителей детей и медицинских работников, отобранных для исследования, будет получено обученными интервьюерами. Они будут свободно владеть местными языками (сена и ндау) или сопровождаться переводчиком во время запроса информированного согласия и интервью. Все участники будут проинформированы о целях исследования, процедурах, которые необходимо выполнить в ходе исследования, и возможных связанных с этим неудобствах, а также о возможности выхода из исследования даже после подписания информированного согласия без каких-либо последствий для них.

Участник будет иметь право на неприкосновенность частной жизни в момент интервью, оно будет проходить в удобном для участника месте, пояснив, что вся предоставленная им информация будет конфиденциальной, разрешение на аудиозапись интервью будет специально просил. У домовладельца будет запрашиваться разрешение на сбор образца крови из пальца у детей в возрасте 6-59 месяцев в домашнем хозяйстве. Если законный представитель ребенка не является главой семьи, информированное согласие также будет предоставлено ей/ему. Если родителю/законному опекуну ребенка не исполнилось 18 лет, для разрешения участия ребенка будет предоставлено информированное согласие.

Разрешения на периодические посещения на протяжении всего исследования будут запрошены при объяснении важности процедур для:

• опрыскивание их домов (внутри и снаружи) репеллентами от комаров (ежемесячно). Только в Tambai Q2 и Q6;
• сбор комаров внутри и снаружи домов (дважды в месяц) в двух населенных пунктах.

Исследователи и каждый участник подпишут 2 копии формы информированного согласия, в которой одна копия останется у участника, а другая останется у исследователя для последующего внесения в папку исследования. Контакт главного исследователя исследования является неотъемлемой частью документа. Форма информированного согласия будет служить доказательством того, что участник добровольно согласился участвовать в исследовании. В целях обеспечения конфиденциальности каждому участнику будет присвоен идентификационный код анкеты. Каждая сделанная анкета будет иметь код, соответствующий согласию.

Риски участия

Риски участия минимальны, но в случае, если участник чувствует себя некомфортно во время интервью с каким-либо вопросом, он может попросить передать вопрос дальше. Во время забора образца крови может возникнуть такой же риск кровотечения или воспаления в месте сбора. Чтобы свести к минимуму это, будет предоставлен соответствующий материал для сбора капиллярной крови (стерилизованные ланцеты и одноразовые перчатки) с помощью медицинских работников, обученных для этой конкретной деятельности. Что касается опрыскивания домов репеллентами, участники будут проинформированы о возможных редких побочных эффектах. Если у кого-то в доме, где было проведено распыление, возникнет какая-либо реакция, предположительно связанная с продуктом, распыление в этом доме будет прервано, и человек будет направлен в службу здравоохранения.

Преимущества участия

Нередко после проведения интервью отмечается рост знаний в сообществах. Это связано с тем, что часто те, кто применяет анкету, могут напомнить о передовом опыте, который может способствовать улучшению здоровья общества. Одним из преимуществ будет знание того, есть ли у вас малярия, плюс дети, у которых диагностирована малярия, смогут получить пользу от лечения.