Evaluering af IR3535 som et rumligt afskrækningsmiddel til malariakontrol. (REPELMALARIA)

Studieområde og befolkning

Undersøgelsen vil blive udført i samfundene i Tambai, lokaliteten Bebedo, distriktet Nhamatanda, Sofala-provinsen, Mozambique. Fællesskabet er dækket af Mutondo Health Center.

Studere design

En prospektiv eksperimentel Før-Efter-Kontrol-Intervention test vil blive udført med to grupper: a) Intervention (samfund i Tambai kvartaler 2 (Q2) og 6 (Q6)): med indendørs og udendørs sprøjtning med IR3535 (3-(N) -acetyl-N-butyl) aminopropionsyre ethylester) og b) Kontrol (fællesskab af Tambai kvartaler 3 (Q3) og 4 (Q4)): uden sprøjtning. Denne longitudinelle undersøgelse vil vare i 2 år. Myg vil blive fanget indendørs og udendørs for at bestemme entomologiske indikatorer, der er relevante for overførsel. Myggeynglepladser i lokalsamfundene vil blive kortlagt ved hjælp af "Participatory Mapping". Forekomsten af ​​malaria hos børn under fem år vil blive bestemt i kontrollen og i interventionssamfundene i begyndelsen, midten og slutningen af ​​undersøgelsen. En KAP-undersøgelse om malaria til Tambai-husejere (Q2, Q3, Q4; Q6) og sundhedsprofessionelle og vigtige samfundsaktører.

Befolkningsindgreb og -procedurer

I første omgang Beira Operational Research Center (CIOB) og Institute of Hygiene and Tropical Medicine ved Nova University Lissabon (IHMT-NOVA), i samarbejde med Mutondo sundhedscenter, Provincial Directorate of Health of Sofala og Directorate District Health District of Nhamatanda og Gorongosa National Park vil præsentere interventionen på en participatorisk måde og forklare den tilgang, der er rettet mod samfundet for at sikre, at det tilegnes af samfundet fra begyndelsen af ​​undersøgelsen. Før undersøgelsen gennemføres, vil lokalsamfundene blive informeret, og de lokale strukturer vil blive orienteret, så samfundet kan forstå formålet med undersøgelsen.

Undersøgelser om samfundsviden, holdninger og praksis (KAP).

Tre KAP-undersøgelser vil blive udført, i starten (basislinje), i slutningen af ​​det første år og i slutningen af ​​det andet år. Undersøgelsespopulationen vil omfatte alle husstande fra Q2, Q3, Q4 og Q6 i Tambai. Husstandsdata vil blive indsamlet ved hjælp af et spørgeskema designet til tablets, med Android-system, gennem ODK-applikationen. Samtaler til husstandens overhoved vil finde sted i deres hjem eller på et sted, de foreslår. KAP'en om malaria og de forskellige aspekter relateret til accepten af ​​brugen af ​​repellenter vil blive suppleret med fokusgrupper og interviews med lokale nøgleaktører. Indsamlingen af ​​dataene vil blive udført på basis af to teknikker: a) semistrukturerede interviews (Flick, 2006) til sundhedspersonale på Vinho Health Center (en sygeplejerske til mødre og børn og en forebyggende læge), to aktivister og lokale ledere; b) fokusgrupper (Flick, 2006) med matroner og udøvere af traditionel medicin fra de to samfund, der undersøges. Alle deltagere i denne komponent af undersøgelsen vil blive udvalgt med vilje (Hancock, Ockleford og Windridge, 2009). Deltagelse sker ved at underskrive det informerede samtykke.

Udbredelse af malaria

Malariaprævalensen vil blive bestemt hos børn under 5 år begge steder Tambai Q2 og Q6 (intervention) og Tambai Q3 og Q4 (kontrol) i begyndelsen af ​​undersøgelsen, i begyndelsen af ​​det andet år og i slutningen af det andet år (projektets afslutning). Der vil blive anmodet om samtykke til den juridiske værge. Kapillærblod vil blive opsamlet ved hjælp af en steril pipette og individuel lancet fra alle børn i undersøgelsen i alderen 6-59 måneder til: a) Rapid Diagnostic Test (RDT) for Plasmodium falciparum; b) bloddråbeudstrygninger og c) filterpapir til udvinding af nukleinsyrer (FTA Cards ThermoFisher). Prøverne vil blive kodet, og information om koordinaterne for den tilknyttede husstand vil blive registreret. Den indledende prøvebehandling vil blive udført på laboratoriet i sundhedscentret i Ponta Gea - Beira, og de molekylære analyser ved IHMT-NOVA - Lissabon, som defineret i MTA. Identifikation af Plasmodium vil ske ved PCR og genotypebestemmelse ved helgenomsekventering (Ocholla et al. 2014). Børn, der bliver diagnosticeret med malaria af RDT under undersøgelsen, vil blive henvist til Mutondo Health Center for behandling.

Hussprøjtning med afvisende middel

Sprøjtningen med IR3535 starter i begyndelsen af ​​undersøgelsen og vil blive udført månedligt i løbet af de første 3 måneder, hver anden måned i løbet af de næste 6 måneder og derefter kvartalsvis. Sprøjtningen vil foregå i og uden for husene i løbet af formiddagen. Der vil kun blive sprøjtet i interventionskvarterer, mens der ikke sprøjtes i kontrolkvarterer.

Entomologi

Til entomologisk undersøgelse vil husstande blive udvalgt tilfældigt. I tilfælde af fejl i satellitbilleder og geografisk analyse (Wampler et al. 2013, Escamilla et al. 2014), vil en klassisk tilgang baseret på husstandsopgørelser i hvert samfund blive brugt manuelt. Ved hjælp af lokal kortlægning og nummerering oprettes to lister over nummererede husstande. Efter en tilfældig talgenerator (f.eks. Random.org) vil blive brugt til tilfældigt at vælge husstandene fra hver liste (Wampler et al. 2013). Myg vil blive indsamlet 2 gange om måneden i og uden for husene hos de udvalgte husstande i 2 år i indsatsen og kontrolkvartererne. Inde i hver husstand vil hvilemyg, som fodrede den foregående nat, blive indsamlet ved hjælp af en Prokopak-aspirator. Uden for boligerne vil CDC-lysfælder blive placeret tidligt på aftenen og indsamlet den følgende morgen. Fælderne vil blive placeret udendørs, på steder lige langt fra de bygninger (huse), der udgør husstanden. Myggenes fysiologiske tilstand vil blive bestemt, og hunnerne klassificeres som ufodret, delvist fodret, fodret, semi-gravid eller gravid (Detinova, 1962). Myggehunner vil blive identificeret morfologisk og bekræftet af PCR (Abilio et al. 2015). Tætheden af ​​myg fanget i kontrol- og interventionssamfundene vil blive estimeret ved hjælp af Williams' geometriske middelværdi. GEE og LMM vil blive udforsket for at sammenligne de to grupper med tiden. Smittehastigheden vil blive bestemt ved at påvise og kvantificere sporozoitter i myg. Myggenes hoveder og thorax vil blive fjernet og klargjort til at isolere DNA (Abilio et al. 2011). Sporozoitter vil blive påvist og kvantificeret ved kvantitativ PCR (qPCR) som beskrevet i (Marie et al. 2013).

Kortlægning af ynglepladser

Myggenes ynglesteder vil blive kortlagt ved hjælp af "participatory mapping"-tilgangen (Dickin et al. 2014). Metoden vil blive brugt til at identificere de rumlige opfattelser af malariarisiko i samfundet, baseret på den rumlige identifikation af eksisterende ynglesteder. Interviewdeltagere og fokusgrupper vil blive inviteret til at tegne et kort over de områder, de forbinder med avl i lokalsamfund og beskrive de vigtige træk ved kortet. Disse kort kan derefter digitaliseres på et geografisk informationssystem (GIS) for at skabe et georefereret kort over samfundsviden.

Malariatilfælde i samfundet

I løbet af undersøgelsen vil tilfælde af malaria i Tambai blive overvåget gennem patienter, der besøger Mutondo Health Center. Patienter i alle aldre fra lokalsamfundene med mistanke om malaria vil blive rekrutteret. Et spørgeskema vil blive administreret. En RDT, en tyk dråbe og blodudstrygning vil blive udført, og en dråbe blod opsamles til efterfølgende molekylær diagnose ved PCR (som beskrevet ovenfor). Indskrivning og samtykke vil blive bedt om, efter at patienterne har modtaget al den pleje, de har brug for i sundhedsenheden. Der vil blive indhentet skriftligt informeret samtykke fra deltagerne eller deres juridiske repræsentanter for patienter under 18 år.

Undersøg variabler

Undersøgelsesvariablerne kan opdeles i variabler fra undersøgelsen (spørgeskema) og semistrukturerede interviews. Variabler kan grupperes i følgende kategorier:

• Sociodemografiske variabler: Alder; Køn; Civilstand; Erhverv; Uddannelsesniveau; Grad af slægtskab til husbonden; Husstandsstørrelse (antal huse, areal); Antal værelser i huset; antal personer pr. division; Type konstruktion.
• Ejerskab og brug af myggenet: Ejerskab af myggenet; Brug af myggenet; Husstandsmedlemmers mobilitet og aktiviteter.
• Malaria viden, holdninger og praksis: Malaria viden niveau; Malaria holdninger; Bekæmpelse af mygge og bid; Ejerskab, bevarelse og brug af myggenet; Viden om afskrækningsmidler; Efter at have analyseret spørgeskemadataene udledes variablerne; Niveau af viden, holdning og praksis om malaria (score kategoriseret som: dårlig (> 50%), medium (50% -74%) og høj (≥75%)).

Variabler i undersøgelsen vil også være dem, der stammer fra indsamling af biologisk materiale (perifert blod og myg):

• Malariatilfælde hos børn under fem år (RDT, optisk mikroskopi og PCR);
• Malariatilfælde i Vinho Health Center;
• Myggetæthed i og uden for boliger; Procentdel af inficerede myg; Udbredelse af myggearter i og uden for hjemmet;
• Ynglested (deltagende kortlægning)

Prøvestørrelse for KAP

Cirka 126 husstande vil blive undersøgt (ifølge rapporten fra National Institute of Statistics of Moçambique (INE), 2017), svarende til det samlede antal husstande i de undersøgte lokalsamfund. De valgte lokationer består af kun 126 husstande, derfor vil alle kontaktede blive inkluderet for at deltage for at garantere en maksimal effekt til undersøgelsen.

Forekomst af malaria i interventions- og kontrolsamfundet

Ifølge INE-rapporten, 2017, er det samlede antal af befolkningen i de to undersøgelsesområder 630 indbyggere. For at beregne antallet af børn under 5 år blev den samlede befolkning ganget med 17,5 %, så stikprøven vil bestå af omkring 110 børn. Forsøget på at inkludere alle børn har til formål at forsøge at opnå en stikprøvestørrelse, der garanterer os den højest mulige styrke.

Prøvestørrelse og statistisk styrke for entomologiske indikatorer

Forskellige scenarier og programmer blev undersøgt for at beregne stikprøvestørrelsen. I første omgang blev et scenarie svarende til en stikprøvestørrelse på 40 husstande (20 i hvert lokalsamfund) fulgt i 48 øjeblikke anset for at være muligt. Den statistiske effekt blev beregnet ved hjælp af G * Power v.3.2 programmet (Faul et al. 2007, 2009), med en korrelation mellem målinger foretaget på forskellige tidspunkter 0,2; med virkning af størrelse f = 0,25; en type I fejlsandsynlighed lig med 0,05. En statistisk styrke på 91,1 % blev estimeret. Omvendt, for de samme parameterværdier, fiksering af kraften til 95%, i perspektivet med at bruge ANOVA til gentagne målinger, blev der opnået 24 aggregater i hvert samfund. Men hvis antagelserne for ANOVA for gentagne målinger fejler, vil LMM eller GEE modeller blive brugt, så det er vigtigt at have en ide om den statistiske styrke for disse modeller. Brug af Longpower-pakken (https://www.rdocumentation.org/packages/longpower/versions/1.0-19/topics/longpower-package) af R-softwaren, kraften forbundet med GEE- og LMM-modellerne til det tidligere scenarie (24 husstande), ville ikke være tilfredsstillende. I betragtning af muligheden for manglende værdier (op til 20 % ved sidste besøg), en mere realistisk autoregressiv korrelationsmatrix for målinger i hvert besøg, blev adskillige scenarier undersøgt i Longpower for at garantere mindst kræfter på 80 % for de forskellige typer modeller . For at holde budget og menneskelige ressourcer til rådighed, har vi således 40 husstande på hvert sted (80 husstande i alt), med et enkelt månedligt besøg i hver husstand.

Dataanalyse

Dataene vil blive analyseret ved hjælp af SPSS version 25.0 og R-pakken. Indledningsvis vil der blive udført deskriptiv statistik og eksplorativ analyse. Parametriske og ikke-parametriske tests vil blive brugt, enten til uafhængige stikprøver (f.eks. sammenligning af de to fællesskaber på et givet tidspunkt) eller til parvise prøver (sammenligning af hvert fællesskab i begyndelsen, midten og slutningen af ​​undersøgelsen). Chi-kvadrat- eller Fishers-testen vil blive brugt til at teste sammenhængen mellem kvalitative variable eller til at sammenligne proportioner mellem uafhængige grupper. For parrede kvalitative data vil McNemar-testen og Cochrans Q-test (for binære data) blive anvendt. For kvantitative variabler vil sammenligningen af ​​to uafhængige grupper blive udført ved hjælp af T-Student-testen, i tilfælde af overensstemmelse med antagelserne om normalitet og homogenitet af varianser, eller alternativt Mann-Whitney-Wilcoxon-testen. ANOVA eller Kruskal-Wallis test vil blive brugt til mere end to grupper. Tegn, Wilcoxon og Friedman tests vil blive brugt til at sammenligne to eller flere parrede prøver. Hvis stikprøvestørrelserne tillader det, kan generaliserede lineære modeller bruges til i fællesskab at analysere flere forklarende variabler for nogle begivenheder af interesse (f.eks. brug af repellent). Til den longitudinelle sammenligning mellem interventions- og kontrolgrupperne, som for entomologiske indekser, vil blandede lineære modeller og generaliserede estimeringsligningsmodeller eller en ikke-parametrisk analyse af longitudinelle data i faktoreksperimenter (nparLD) blive anvendt ved hjælp af flere pakker af R. softwaren. . (CONsolidated Standards of Reporting Trials) CONSORT2010 standarderne, en intention-to-treat (IT) analyse vil blive brugt, og der kan være behov for at gå videre med en behandling for manglende værdier. Forskelle og associationer vil blive betragtet som statistisk signifikante, når p

Sporozoitraten (% af myg med sporozoitter i spytkirtlerne) vil blive sammenlignet mellem kontrol- og interventionssamfundet og den procentvise reduktion. Den tidsmæssige og rumlige fordeling af de forskellige myggearter og deres tætheder vil blive udforsket ved hjælp af ArcGIS 10 med rumlig analyse og statistiske værktøjer) og sammenlignet mellem de 2 lokaliteter (kontrol x intervention).

I den kvalitative komponent vil deres fulde transskription efter optagelse af interviewene blive udført. Databehandling og -analyse vil være manuel ved brug af indholdsanalyseteknikken.

Datahåndtering - Spørgeskemaer

Open Data Kit (ODK) vil blive brugt til dataindsamling og dets kvalitetskontrol. Vejlederen vil gennemgå interviewene på daglig basis, før de sendes til den sikre server, der er placeret på CIOB til opbevaring. Serveren vil kun være tilgængelig for dataadministratoren og teamet af forskere. De overførte data inkluderer ikke deltagernes navne, kun deres koder. Den dataansvarlige vil rense og validere dataene dagligt og give feedback til feltpersonalet. Alle fysiske dokumenter såsom informerede samtykker, dataindsamlingsformularer og elektroniske enheder (GPS og tablets) vil blive opbevaret og kun tilgængelige for CIOB Principal Investigator. Papirdokumenterne vil blive opbevaret i 5 år efter undersøgelsen er afsluttet og derefter destrueret.

Data Management - Prævalens og entomologi

Dataene vil blive indsamlet via en papirindsamlingsformular. Hver dag skal hver dataindsamler indtaste alle data i en database, der er tilgængelig på en computer og sende dem til dataadministratoren, efter en omhyggelig revision af teamets ansvarlige. Når dataadministratoren har modtaget dataene, kan hun/han oprette en adgangskodebeskyttet mappe til at arkivere dataene på daglig basis.

Kvalitetskontrol og overvågning - Uddannelse af personale

Undersøgelsespersonale vil blive ordentligt uddannet af undersøgelsens forskerhold. Feltholdet vil blive opdelt i tre (3) grupper:

• Indsamling af blodprøver og administration af undersøgelsen til husejere og gennemførelse af interviews med sundhedspersonale. Teamet vil bestå af 3 sundhedsteknikere med erfaring inden for forskning.
• Indsamling af myg og kortlægning af ynglesteder. Teamet vil bestå af 2 entomologiteknikere.
• Sprøjter, der skal sprøjte huse med afvisende middel. Holdet vil bestå af 4 personer.

Uddannelsen vil være fokuseret på etiske aspekter, udvælgelse af husstande, børn i alderen 6-59 måneder, afholdelse af interviews, blodprøvetagningsprocedurer, god klinisk praksis og laboratoriepraksis, myggeopsamling, manipulation, identifikation, behandling og opbevaring, avlskortlægning og sprøjteteknikker og sikkerhed.

Kvalitetskontrol og overvågning - Supervision af feltarbejde

Holdene får en feltkoordinator, som vil være ansvarlig for at overvåge feltarbejdet og sikre datakvaliteten. I løbet af undersøgelsen vil et hold af supervisorer periodisk besøge feltholdene for at sikre korrekt praksis. Kvalitetskontrollen (QC) af dataene starter i pilotfasen med identifikation og udskiftning af uklare termer og undersøgelsesspørgsmål. Feltkoordinatoren vil også løbende vurdere overholdelse af standarddriftsprocedurer (SOP) og etiske principper.

Datakvalitet og kvalitetssikring

Basisundersøgelsen vil omfatte en pilot, der vil blive udført under træning i et samfund, der ikke er en del af undersøgelsen. Piloten vil have følgende mål (i) at evaluere og validere indholdet af dataindsamlingsinstrumenterne, (ii) at sikre overholdelse af de etiske aspekter i forbindelse med undersøgelsen. Piloten vil hjælpe med at identificere vanskelighederne og udeladelserne under spørgeskemaet. Piloten vil analysere feltarbejdets strategi, teamsammensætning, personaleansvar og tid, der kræves for at gennemføre alle aktiviteter.

Feltkoordinatoren vil foretage kvalitetskontrollen af ​​de forespørgsler, der foretages, før de sendes til CIOB, og ud over den kvalitetskontrol, som feltkoordinatoren udfører, vil hovedefterforskerne også foretage tilsynet for at garantere kvaliteten af ​​dataene.

Opbevaring af data

Dataene vil blive gemt på CIOB. Undersøgelsesdokumenter og dataindsamlingsinstrumenter, herunder informeret samtykke i fysisk format, der vil blive placeret i arkivmapper og opbevaret låst med begrænset adgang til forskere. Alle dokumenter relateret til forskningen vil blive arkiveret i henhold til lovgivningens regler og vil blive opbevaret hos CIOB i en periode på 5 år.

Opbevaring af biologiske prøver

En del af blod- og myggeprøven vil blive behandlet i laboratoriet i IHMT-NOVA, Portugal, til det formål er der underskrevet en materialeoverførselsaftale (MTA) mellem CIOB og IHMT-NOVA, Portugal. En del af blodprøven vil blive opbevaret i CIOB til fremtidig analyse inden for rammerne af ph.d.'er og/eller masteruddannelser, eksplicit med henvisning til nærværende projekt. Prøverne vil blive opbevaret i en fryser ved CIOB ved -80 ° C, i 5 år efter afslutningen af ​​undersøgelsen. Biologiske prøver, der ikke vil blive brugt til yderligere analyse, vil blive destrueret ved afslutningen af ​​analysen i undersøgelsen.

Etisk gennemgang

Denne undersøgelsesprotokol er blevet forelagt til etisk godkendelse til den institutionelle komité for bioetik for sundhed ved National Institute of Health (CIBS-INS) og til den nationale komité for bioetik for sundhed (CNBS) - godkendelsesref. 63/CNBS/20 og tillæg Ref. 11/CNBS/21. Undersøgelsen vil blive udført i overensstemmelse med reglerne for "god klinisk praksis (GCP)", "god klinisk og laboratoriepraksis (GCLP)" og alle gældende lovkrav, såsom Helsinki-erklæringen 2013, på dens 64. generalforsamling .

Informeret samtykke

Samtykke fra husstandsoverhoveder, forældre eller juridiske repræsentanter for de børn og sundhedsprofessionelle udvalgt til undersøgelsen vil blive indhentet af uddannede interviewere. De vil være flydende i de lokale sprog (Sena og Ndau) eller ledsaget af en tolk under anmodningen om informeret samtykke og interviews. Alle deltagere vil blive informeret om formålet med undersøgelsen, procedurer, der skal udføres under undersøgelsen og potentielle associerede ulemper, samt muligheden for at forlade undersøgelsen, selv efter at have underskrevet det informerede samtykke uden nogen implikationer for dem.

Deltageren vil have ret til privatlivets fred under interviewøjeblikket, det vil blive afholdt et sted, hvor deltageren føler sig godt tilpas, idet han forklarer, at alle de oplysninger, han har givet, vil være fortrolige, autorisation til lydoptagelse af interviewet vil være specifikt anmodet om. Der vil blive bedt om tilladelse fra husejeren til udtagning af en fingerprikkeblodprøve fra børn i husstanden i alderen 6-59 måneder. Hvis barnets juridiske repræsentant er forskellig fra husstandens overhoved, vil informeret samtykke også blive givet til barnet. Hvis barnets forælder/værge er under 18 år, vil der blive givet informeret samtykke for at autorisere barnet til at deltage.

Der vil blive anmodet om tilladelser til periodiske besøg under hele undersøgelsen, samtidig med at vigtigheden af ​​procedurerne for:

• sprøjtning af deres hjem (indendørs og udendørs) med myggemiddel (månedligt). Kun i Tambai Q2 og Q6;
• indsamling af myg fra det indre og ydre af deres huse (to gange om måneden) på to lokaliteter.

Spørgerne og hver deltager underskriver 2 kopier af den informerede samtykkeerklæring, hvor den ene kopi forbliver hos deltageren, og den anden forbliver hos spørger til senere arkivering i undersøgelsesmappen. Kontakten til undersøgelsens hovedinvestigator er en integreret del af dokumentet. Formularen til informeret samtykke vil tjene som bevis på, at deltageren har accepteret at være en del af undersøgelsen af ​​egen fri vilje. For at garantere fortroligheden vil hver deltager blive tildelt en identifikationskode til spørgeskemaet. Hvert spørgeskema, der laves, vil have en kode, der svarer til samtykke.

Deltagelsesrisici

Risikoen ved deltagelse er minimal, men i tilfælde af at en deltager føler sig utilpas under interviewet med et spørgsmål, kan de bede om at give spørgsmålet videre. Under blodprøvetagningen kan der være samme risiko for blødning eller betændelse fra prøvetagningsstedet. For at minimere, at der vil blive leveret tilstrækkeligt materiale til at indsamle kapillarblod (steriliserede lancetter og engangshandsker) gennem sundhedspersonale, der er uddannet til den specifikke aktivitet. Vedrørende sprøjtning af huse med afskrækningsmiddel vil deltagerne blive informeret om potentielle sjældne bivirkninger. Hvis nogen i boligen, hvor sprøjtningen er foretaget, får en reaktion, der mistænkes for at være forbundet med produktet, afbrydes sprøjtningen i den bolig, og den enkelte henvises til sundhedsvæsenet.

Fordele ved deltagelse

Efter at have gennemført interviews bemærkes der ofte en stigning i viden i lokalsamfundene. Dette skyldes det faktum, at de, der anvender spørgeskemaet, ofte kan gøre opmærksom på bedste praksis, som kan bidrage til forbedringer i samfundets sundhed. En af fordelene vil være at vide, om du har malaria eller ej, plus børn diagnosticeret med malaria vil kunne drage fordel af behandling.