ND の子供の情緒調節: ゲノム変異、プロテオミクス パターン、および初期の経験の役割
神経発達障害児の感情行動調節:ゲノム変異、プロテオミクスパターン、初期経験の質の役割に関する探索的調査
調査の概要
詳細な説明
背景: 神経発達障害 (ND) の子供は、乳児期および小児期に出現するさまざまな欠陥に関連するさまざまな臨床診断を特徴とする異質な集団です。 診断の枠組みは異なる場合がありますが、いくつかの研究では、ND の子供は社会的関係スキルが低下しており、インタラクティブな注意スキルと対人コミュニケーションの手がかりの使用が減少していることを特徴とすることが観察されています。 神経変性疾患の子供は、社会的感情的スキルと感情的行動の調節においていくつかの違いを示すことが広く実証されていますが、多かれ少なかれ障害のある軌道に関連する根本的なメカニズムは部分的に未踏のままです.
主な目的: 生後 3 ~ 24 か月の ND の子供のサンプルで、1) 候補遺伝子のメチル化 (例: OXTR、SLC6A4、BDNF、および DRD4)、2) 感情行動調節における多型、および 3 の寄与を調査すること) 環境経験 (すなわち、不利な経験と親の行動の質) 感情行動規制.
二次的な目的: 1) 生後 3 ~ 24 か月の ND の子供のサンプルにおいて、プロテオミクスと感情行動調節との間の関連性を調査すること。 2) 計算アプローチを適用することにより、感情行動調節に関連する候補遺伝子の機能的および構造的パターンを特定する。 相互作用のネットワークにおける社会的感情的発達と、脳における時空間的共発現に潜在的に関連する遺伝子のモジュールも特定されます。
予定されている活動:
方法: このプロジェクトには、ND の子供とその母親の臨床グループと、通常発達中の子供とその母親の対照グループが含まれます。 グループの性質上、この研究は準実験的な研究デザインです。
この調査には、次の手順が含まれます。
- 生物学的材料の収集: 非侵襲的モダリティと Oragene OG575 キット (Genotek DNA) を使用した唾液収集、および非侵襲的モダリティを使用した尿収集。
- アンケートの管理と近さの日記:母親(臨床グループと対照グループの両方)は、気分、習慣的な行動、子供の発達に関するいくつかのアンケートに記入するよう求められます。 また、母親が身体的接触に費やす金額と方法も評価されます (例: 赤ちゃんを愛撫するのに費やした時間。赤ちゃんを抱っこする時間。赤ちゃんが母親の乳房にくっついている時間)。 このデータは、アプリ (APP: inContatto) の形式で、電子形式で実装された Raiskila らの「近さ日記」の再利用バージョンを使用して取得されます。
- Still Face パラダイム (Tronick et al., 1978): Play, Still#1, Reunion#1, Still#2, Reunion#2.
インタラクションは、さまざまなコーディング ツールを使用して、その後の行動コーディングのためにビデオに録画されます。 子どもの情緒的行動の調節は、次のコーディング システムを使用してコード化されます。 さらに、乳児と母親の行動は、Murray による Global Rating Scale コーディング システムを使用してコード化され、母親のタッチ行動は、Provenzi による Maternal Touch Coding System を使用してコード化されます。
研究の種類
入学 (推定)
連絡先と場所
研究連絡先
- 名前:Rosario Montirosso
- 電話番号:+39031877494
- メール:rosario.montirosso@lanostrafamiglia.it
研究場所
-
-
Lecco
-
Bosisio Parini、Lecco、イタリア、23842
- 募集
- IRCCS E. Medea
-
コンタクト:
- Rosario Montirosso
- 電話番号:+39031877494
- メール:rosario.montirosso@lanostrafamiglia.it
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参加基準
適格基準
就学可能な年齢
健康ボランティアの受け入れ
サンプリング方法
調査対象母集団
説明
包含基準:
NDの子供:
- 3〜24か月の年齢(年代順または早産児の場合は修正);
- 軽度から中等度の発達遅滞が、臨床徴候(神経学的検査または神経画像検査での脳損傷の症状など)またはさまざまな診断(脳性麻痺、未熟児など)に関連する発達尺度(グリフィス III 尺度など)によって記録されている。
- 遺伝性症候群の欠如。 グリフィス III スケールは、子供の全体的な発達レベルを評価するために使用されます。
典型的な発達の子供:
- 出産から出産まで;
- 3〜24か月(年代順)の年齢;
- 周産期または出生後の病理の欠如。
母親の包含基準(DNおよび典型的な発達):
- 18歳以上;
- イタリア語の十分な理解;
- 認知障害および/または精神障害がない;
- 向精神薬の摂取なし;
- ひとり親家庭ではありません。
除外基準: 包含基準を参照してください。
研究計画
研究はどのように設計されていますか?
デザインの詳細
- 観測モデル:ケースコントロール
- 時間の展望:断面図
コホートと介入
グループ/コホート |
介入・治療 |
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NDの子供
神経発達障害 (ND) の子供で、生後 3 ~ 24 か月 (時系列順、または早産児の場合は修正)。
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ゲノム DNA は、キットの製造元が推奨するプロトコルを使用して各唾液サンプルの 0.4 ml アリコートから抽出され、Qubit 2.0 (Invitrogen) で定量化され、-20°C で保存されます。
各 DNA の 250 ng のアリコートは、EZ DNA メチル化ライトニング キット (Zymo Research) を使用したメチル化分析のために編集されます。
サンプルの増幅とNGSシーケンシングのためのそれらの準備は、記載されているように実行されます。
サンプルは、NextSeq 500 (イルミナ) でシーケンスされます。
個々の処理されたシーケンス (PE 読み取り) は、並列の Smith-Waterman アルゴリズムを使用して参照シーケンスに個別に整列されます。
同じ参照配列に一貫して整列する読み取りのみが保持されます。
分析された各配列の各 CpG サイトで、4 つの塩基の頻度が評価され、集計されます。
尿サンプルは、非侵襲的な方法を使用して収集され、エキソソームの定量的回収の準備手順に従って調製されます。解凍後、4°C で 17,000 x g で 10 分間遠心分離すると、回収された上清が分離され、200,000 x g で 1 分間遠心分離されます。 4℃で1時間。
エキソソーム ペレットを分離し、繰り返し洗浄し、バッファー (NH4HCO3、0.1 mM ph = 7.8) に再懸濁します。
タンパク質濃度は、SPNTM Protein Assay キットで推定され、各サンプル (50 ± 0.5 μg タンパク質) は、1:50 (w/w) の酵素/基質比を使用して、37 °C で一晩 (o/w) トリプシンで消化されます。
2 番目のトリプシン消化は、酵素: 基質比 1:100 (w/w) で 4 時間実行されます。
消化されたサンプルは、13,000 × g で 10 分間遠心分離され、PepClean C-18 カラムを使用して精製および濃縮されます。
得られたサンプルは、高分解能質量分析と組み合わせた逆相液体クロマトグラフィーによって分析されます。
観察セッション中、子供の感情的調節と社会的行動を評価するために、半構造化された設定で約10分間の母子相互作用の短いビデオ記録が作成されます。
相互作用は、Still Face パラダイム (Tronick et al., 1978) に従って、5 つの異なるフェーズで構成されます: プレイ、Still#1、Reunion#1、Still#2、Reunion#2。
遊び: 母親は 10 分間、赤ちゃんと触れ合うよう招待されます。静止: 母親は無反応の無表情な顔を維持したまま静止し、2 分間子供に微笑んだり、触れたり、話したりしないように求められます (静止 #1: 2 分; 静止 #2: 2 分)。再会: 母親は、さらに 2 分間、自分の遊びを再開するよう求められます (再会 #1: 2 分; 再会 #2: 2 分)。
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典型的な発達した子供 (TD)
典型的な発育年齢が 3 ~ 24 か月(年代順)の子供。
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ゲノム DNA は、キットの製造元が推奨するプロトコルを使用して各唾液サンプルの 0.4 ml アリコートから抽出され、Qubit 2.0 (Invitrogen) で定量化され、-20°C で保存されます。
各 DNA の 250 ng のアリコートは、EZ DNA メチル化ライトニング キット (Zymo Research) を使用したメチル化分析のために編集されます。
サンプルの増幅とNGSシーケンシングのためのそれらの準備は、記載されているように実行されます。
サンプルは、NextSeq 500 (イルミナ) でシーケンスされます。
個々の処理されたシーケンス (PE 読み取り) は、並列の Smith-Waterman アルゴリズムを使用して参照シーケンスに個別に整列されます。
同じ参照配列に一貫して整列する読み取りのみが保持されます。
分析された各配列の各 CpG サイトで、4 つの塩基の頻度が評価され、集計されます。
尿サンプルは、非侵襲的な方法を使用して収集され、エキソソームの定量的回収の準備手順に従って調製されます。解凍後、4°C で 17,000 x g で 10 分間遠心分離すると、回収された上清が分離され、200,000 x g で 1 分間遠心分離されます。 4℃で1時間。
エキソソーム ペレットを分離し、繰り返し洗浄し、バッファー (NH4HCO3、0.1 mM ph = 7.8) に再懸濁します。
タンパク質濃度は、SPNTM Protein Assay キットで推定され、各サンプル (50 ± 0.5 μg タンパク質) は、1:50 (w/w) の酵素/基質比を使用して、37 °C で一晩 (o/w) トリプシンで消化されます。
2 番目のトリプシン消化は、酵素: 基質比 1:100 (w/w) で 4 時間実行されます。
消化されたサンプルは、13,000 × g で 10 分間遠心分離され、PepClean C-18 カラムを使用して精製および濃縮されます。
得られたサンプルは、高分解能質量分析と組み合わせた逆相液体クロマトグラフィーによって分析されます。
観察セッション中、子供の感情的調節と社会的行動を評価するために、半構造化された設定で約10分間の母子相互作用の短いビデオ記録が作成されます。
相互作用は、Still Face パラダイム (Tronick et al., 1978) に従って、5 つの異なるフェーズで構成されます: プレイ、Still#1、Reunion#1、Still#2、Reunion#2。
遊び: 母親は 10 分間、赤ちゃんと触れ合うよう招待されます。静止: 母親は無反応の無表情な顔を維持したまま静止し、2 分間子供に微笑んだり、触れたり、話したりしないように求められます (静止 #1: 2 分; 静止 #2: 2 分)。再会: 母親は、さらに 2 分間、自分の遊びを再開するよう求められます (再会 #1: 2 分; 再会 #2: 2 分)。
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この研究は何を測定していますか?
主要な結果の測定
結果測定 |
メジャーの説明 |
時間枠 |
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乳児の DNA メチル化状態
時間枠:1日、募集時
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DNA メチル化状態 (つまり、
乳児から得られた唾液サンプルから候補遺伝子 (例: OXTR、SLC6A4、BDNF、および DRD4) を評価します。
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1日、募集時
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幼児の行動調節
時間枠:1日、募集時
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乳児の行動規制 (すなわち、負の感情) は、母子相互作用のビデオテープからマイクロ分析的に (すなわち、秒単位で) コード化されます。
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1日、募集時
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二次結果の測定
結果測定 |
メジャーの説明 |
時間枠 |
|---|---|---|
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幼児のプロテオミクス パターン
時間枠:1日、募集時
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プロテオミクスパターンは、幼児のストレス反応に関与すると考えられている候補タンパク質の相対量と翻訳後修飾について評価されます。
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1日、募集時
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協力者と研究者
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研究記録日
主要日程の研究
研究開始 (実際)
一次修了 (推定)
研究の完了 (推定)
試験登録日
最初に提出
QC基準を満たした最初の提出物
最初の投稿 (実際)
学習記録の更新
投稿された最後の更新 (実際)
QC基準を満たした最後の更新が送信されました
最終確認日
詳しくは
本研究に関する用語
その他の研究ID番号
- RC2021_820
医薬品およびデバイス情報、研究文書
米国FDA規制医薬品の研究
米国FDA規制機器製品の研究
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