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Regulação emocional em crianças com ND: o papel da variação genômica, padrões proteômicos e experiência precoce

17 de outubro de 2023 atualizado por: IRCCS Eugenio Medea

Regulação emocional-comportamental em crianças com deficiências do neurodesenvolvimento: uma investigação exploratória do papel da variação genômica, padrões proteômicos e qualidade da experiência inicial

Crianças com deficiências do neurodesenvolvimento (DN) representam uma população heterogênea caracterizada por uma ampla gama de diagnósticos clínicos (por exemplo, paralisia cerebral, deficiência sensorial, retardo psicomotor), que estão associados a vários déficits que surgem no início da vida da criança. Embora tenha sido amplamente demonstrado que crianças com DN exibem várias diferenças em habilidades socioemocionais e regulação emocional-comportamental, os mecanismos subjacentes que estão associados a trajetórias de desenvolvimento mais ou menos prejudicadas ainda permanecem parcialmente inexplorados. Embora vários estudos tenham investigado o papel de fatores biológicos e ambientais na regulação do comportamento emocional de crianças com desenvolvimento típico ou com condições de risco diferentes da ND (por exemplo, crianças vítimas de maus-tratos), poucas pesquisas exploraram conjuntamente o papel da metilação, polimorfismos e experiência ambiental na regulação emocional-comportamental de crianças com DN nos primeiros anos de vida. O objetivo deste projeto é investigar fatores biológicos (metilação do DNA, variantes polimórficas e proteômica) e ambientais (por exemplo, procedimentos de enfermagem dolorosos e/ou invasivos, proximidade e contato físico) que possam estar associados à regulação comportamental emocional de crianças com ND.

Visão geral do estudo

Status

Recrutamento

Condições

Intervenção / Tratamento

Descrição detalhada

Enquadramento: As crianças com perturbações do neurodesenvolvimento (DN) constituem uma população heterogénea caracterizada por uma grande variedade de diagnósticos clínicos, que estão associados a diferentes défices que surgem durante a infância. Embora o enquadramento diagnóstico possa variar, vários estudos observaram que crianças com DN compartilham habilidades sociorrelacionais reduzidas, caracterizadas por habilidades interativas e de atenção diádica mais baixas e uso reduzido de pistas de comunicação interpessoal. Embora tenha sido amplamente demonstrado que crianças com DN exibem várias diferenças nas habilidades socioemocionais e na regulação comportamental emocional, os mecanismos subjacentes que estão associados a trajetórias mais ou menos prejudicadas permanecem parcialmente inexplorados.

Objetivo primário: explorar em uma amostra de crianças com DN de 3 a 24 meses a contribuição de 1) metilação de genes candidatos (por exemplo, OXTR, SLC6A4, BDNF e DRD4), 2) polimorfismos na regulação emocional-comportamental e 3 ) experiência ambiental (ou seja, experiências adversas e qualidade do comportamento parental) na regulação emocional-comportamental.

Objetivo secundário: 1) explorar uma possível associação entre proteômica e regulação emocional-comportamental em uma amostra de crianças com DN com idade entre 3 e 24 meses; 2) identificar padrões funcionais e estruturais de genes candidatos associados à regulação do comportamento emocional por meio de uma abordagem computacional. Serão também identificados módulos de genes potencialmente associados ao desenvolvimento sócio-emocional em redes de interação e co-expressão espaço-temporal no encéfalo.

Atividades planejadas:

Métodos: o projeto envolve um grupo clínico de crianças com DN e suas mães e um grupo controle de crianças com desenvolvimento típico e suas mães. Devido à natureza dos grupos, o estudo é um projeto de pesquisa quase experimental.

O estudo envolve os seguintes procedimentos:

  • coleta de material biológico: coleta de saliva por métodos não invasivos e o kit Oragene OG575 (Genotek DNA) e coleta de urina por métodos não invasivos.
  • aplicação de questionários e diário de proximidade: será pedido à mãe (tanto para o grupo clínico como para o grupo de controlo) o preenchimento de alguns questionários relativos ao seu humor, comportamento habitual e desenvolvimento da criança. Também será avaliado quanto e de que forma a mãe gasta em contato físico (ex. tempo gasto acariciando o bebê; tempo gasto segurando o bebê; tempo gasto quando o bebê está preso ao seio da mãe). Esses dados serão obtidos através do uso de uma versão reaproveitada do "diário de proximidade" de Raiskila et al. implementado em formato eletrônico, na forma de um APP (APP: inContatto);
  • filmar a Interação Pai-Filho em um contexto semi-estruturado em 5 fases diferentes de acordo com o paradigma Still Face (Tronick et al., 1978): Play, Still#1, Reunion#1, Still#2, Reunion#2.

As interações serão gravadas em vídeo para posterior codificação comportamental usando várias ferramentas de codificação. A regulação emocional-comportamental da criança será codificada usando os sistemas de codificação: a) Fase de Engajamento do Bebê e do Cuidador, b) Sistema de Pontuação Regulatória Infantil e Sistema de Pontuação Reguladora Materna da Tronik. Além disso, o comportamento infantil e materno será codificado usando o sistema de codificação Global Rating Scale de Murray e o comportamento de toque materno usando o Maternal Touch Coding System de Provenzi.

Tipo de estudo

Observacional

Inscrição (Estimado)

248

Contactos e Locais

Esta seção fornece os detalhes de contato para aqueles que conduzem o estudo e informações sobre onde este estudo está sendo realizado.

Contato de estudo

Locais de estudo

Critérios de participação

Os pesquisadores procuram pessoas que se encaixem em uma determinada descrição, chamada de critérios de elegibilidade. Alguns exemplos desses critérios são a condição geral de saúde de uma pessoa ou tratamentos anteriores.

Critérios de elegibilidade

Idades elegíveis para estudo

3 meses a 2 anos (Filho)

Aceita Voluntários Saudáveis

Sim

Método de amostragem

Amostra Não Probabilística

População do estudo

Crianças com ND e suas mães serão recrutadas por meio de amostragem consecutiva e de conveniência na U.O.C. "Reabilitação Especializada - Patologias Neuropsiquiátricas da Idade do Desenvolvimento" e o U.O.C. "Reabilitação Funcional" do Instituto Científico "E. Medeia" (local de Bosisio Parini). As crianças com desenvolvimento típico e suas mães serão recrutadas em creches da província de Lecco. Após a visualização de uma carta informativa descrevendo a pesquisa geral, as mães serão contatadas por telefone e convidadas a participar voluntariamente.

Descrição

Critério de inclusão:

Crianças com DN:

  • Idade entre 3 e 24 meses (cronologicamente ou corrigida no caso de crianças nascidas pré-termo);
  • atraso de desenvolvimento leve a moderado documentado por sinais clínicos (por exemplo, sintomas de lesão cerebral em exame neurológico ou neuroimagem) ou por escalas de desenvolvimento (ou seja, escalas Griffiths III) associadas a vários diagnósticos (por exemplo, paralisia cerebral, prematuridade);
  • ausência de síndromes genéticas. A escala Griffiths III será utilizada para avaliar o nível geral de desenvolvimento da criança.

Crianças com desenvolvimento típico:

  • nascimento a termo;
  • idade entre 3 e 24 meses (cronológica);
  • ausência de patologia peri ou pós-natal.

Critérios de inclusão das mães (DN e desenvolvimento típico):

  • idade acima de 18 anos;
  • boa compreensão da língua italiana;
  • ausência de dificuldades cognitivas e/ou transtornos psiquiátricos;
  • não ingestão de medicamentos psicotrópicos;
  • não faz parte de uma família monoparental.

Critérios de Exclusão: consulte os critérios de inclusão.

Plano de estudo

Esta seção fornece detalhes do plano de estudo, incluindo como o estudo é projetado e o que o estudo está medindo.

Como o estudo é projetado?

Detalhes do projeto

  • Modelos de observação: Controle de caso
  • Perspectivas de Tempo: Transversal

Coortes e Intervenções

Grupo / Coorte
Intervenção / Tratamento
crianças com ND
crianças com deficiência do neurodesenvolvimento (DN) com idade entre 3 e 24 meses (cronologicamente ou corrigidas no caso de crianças nascidas pré-termo).
Teste de diagnostico: Análise de metilação do DNA
O DNA genômico será extraído de alíquotas de 0,4 ml de cada amostra de saliva usando o protocolo sugerido pelo fabricante do kit, quantificado com Qubit 2.0 (Invitrogen) e armazenado a -20°C. Alíquotas de 250 ng de cada DNA serão editadas para análise de metilação com o kit EZ DNA Methylation Lightning (Zymo Research). A amplificação das amostras e sua preparação para sequenciamento NGS serão realizadas conforme descrito. As amostras serão sequenciadas no NextSeq 500 (Illumina). Sequências processadas individuais (leituras de PE) serão alinhadas independentemente para sequências de referência usando um algoritmo Smith-Waterman paralelo. Somente as leituras que se alinham consistentemente à mesma sequência de referência serão retidas. Em cada sítio CpG em cada sequência analisada, as frequências das quatro bases serão avaliadas e tabuladas.
Teste de diagnostico: Análise proteômica
As amostras de urina são coletadas por métodos não invasivos e preparadas de acordo com um procedimento preparatório para recuperação quantitativa de exossomos: uma vez descongelados e centrifugados a 17.000 x g por 10 min a 4°C, os sobrenadantes recuperados são separados e centrifugados a 200.000 x g por 1 h a 4°C. Os pellets de exossomos são separados, lavados repetidamente e ressuspensos em tampão (NH4HCO3, 0,1 mM ph=7,8). A concentração de proteína é estimada com o kit SPNTM Protein Assay e cada amostra (50 ± 0,5 μg de proteína) é digerida com tripsina usando uma razão enzima/substrato de 1:50 (p/p) a 37 °C durante a noite (o/p). Uma segunda digestão tríptica é realizada com uma razão enzima:substrato de 1:100 (p/p) por 4h. As amostras digeridas, centrifugadas a 13.000 × g por 10 min, são purificadas e concentradas usando colunas PepClean C-18. As amostras obtidas são analisadas por cromatografia líquida de fase reversa acoplada à espectrometria de massas de alta resolução.
Teste de diagnostico: Ainda Enfrente o Paradigma
Durante uma sessão de observação, uma pequena gravação em vídeo da interação mãe-filho de aproximadamente 10 minutos será feita em um ambiente semi-estruturado para avaliar a regulação emocional e o comportamento social da criança. A interação será estruturada em 5 fases diferentes de acordo com o paradigma Still Face (Tronick et al., 1978): Play, Still#1, Reunion#1, Still#2, Reunion#2. Brincar: as mães serão convidadas a interagir com seus bebês por 10 minutos; Ainda: será solicitado às mães que permaneçam imóveis, mantendo um rosto inexpressivo e sem resposta e que não sorriam, toquem ou falem com a criança por 2 minutos (Still#1: 2 minutos; Still#2: 2 minutos); Reencontro: será solicitado às mães que retomem a atividade lúdica por mais 2 minutos (Reunião#1: 2 minutos; Reunião#2: 2 minutos).
Crianças desenvolvidas típicas (DT)
crianças com idade de desenvolvimento típico entre 3 e 24 meses (cronológica).
Teste de diagnostico: Análise de metilação do DNA
O DNA genômico será extraído de alíquotas de 0,4 ml de cada amostra de saliva usando o protocolo sugerido pelo fabricante do kit, quantificado com Qubit 2.0 (Invitrogen) e armazenado a -20°C. Alíquotas de 250 ng de cada DNA serão editadas para análise de metilação com o kit EZ DNA Methylation Lightning (Zymo Research). A amplificação das amostras e sua preparação para sequenciamento NGS serão realizadas conforme descrito. As amostras serão sequenciadas no NextSeq 500 (Illumina). Sequências processadas individuais (leituras de PE) serão alinhadas independentemente para sequências de referência usando um algoritmo Smith-Waterman paralelo. Somente as leituras que se alinham consistentemente à mesma sequência de referência serão retidas. Em cada sítio CpG em cada sequência analisada, as frequências das quatro bases serão avaliadas e tabuladas.
Teste de diagnostico: Análise proteômica
As amostras de urina são coletadas por métodos não invasivos e preparadas de acordo com um procedimento preparatório para recuperação quantitativa de exossomos: uma vez descongelados e centrifugados a 17.000 x g por 10 min a 4°C, os sobrenadantes recuperados são separados e centrifugados a 200.000 x g por 1 h a 4°C. Os pellets de exossomos são separados, lavados repetidamente e ressuspensos em tampão (NH4HCO3, 0,1 mM ph=7,8). A concentração de proteína é estimada com o kit SPNTM Protein Assay e cada amostra (50 ± 0,5 μg de proteína) é digerida com tripsina usando uma razão enzima/substrato de 1:50 (p/p) a 37 °C durante a noite (o/p). Uma segunda digestão tríptica é realizada com uma razão enzima:substrato de 1:100 (p/p) por 4h. As amostras digeridas, centrifugadas a 13.000 × g por 10 min, são purificadas e concentradas usando colunas PepClean C-18. As amostras obtidas são analisadas por cromatografia líquida de fase reversa acoplada à espectrometria de massas de alta resolução.
Teste de diagnostico: Ainda Enfrente o Paradigma
Durante uma sessão de observação, uma pequena gravação em vídeo da interação mãe-filho de aproximadamente 10 minutos será feita em um ambiente semi-estruturado para avaliar a regulação emocional e o comportamento social da criança. A interação será estruturada em 5 fases diferentes de acordo com o paradigma Still Face (Tronick et al., 1978): Play, Still#1, Reunion#1, Still#2, Reunion#2. Brincar: as mães serão convidadas a interagir com seus bebês por 10 minutos; Ainda: será solicitado às mães que permaneçam imóveis, mantendo um rosto inexpressivo e sem resposta e que não sorriam, toquem ou falem com a criança por 2 minutos (Still#1: 2 minutos; Still#2: 2 minutos); Reencontro: será solicitado às mães que retomem a atividade lúdica por mais 2 minutos (Reunião#1: 2 minutos; Reunião#2: 2 minutos).

O que o estudo está medindo?

Medidas de resultados primários

Medida de resultado
Descrição da medida
Prazo
Status de metilação do DNA infantil
Prazo: 1 dia, no recrutamento
O status de metilação do DNA (i.e. porcentagem) de genes candidatos (por exemplo, OXTR, SLC6A4, BDNF e DRD4) serão avaliados a partir de amostras salivares obtidas de bebês.
1 dia, no recrutamento
Regulação comportamental infantil
Prazo: 1 dia, no recrutamento
A regulação comportamental do bebê (ou seja, emocionalidade negativa) será codificada microanaliticamente (ou seja, segundo a segundo) a partir de fitas de vídeo das interações mãe-bebê.
1 dia, no recrutamento

Medidas de resultados secundários

Medida de resultado
Descrição da medida
Prazo
Padrões proteômicos infantis
Prazo: 1 dia, no recrutamento
Padrões proteômicos serão avaliados quanto à quantidade relativa e modificações pós-traducionais de proteínas candidatas, supostamente envolvidas com a resposta ao estresse em lactentes.
1 dia, no recrutamento

Colaboradores e Investigadores

É aqui que você encontrará pessoas e organizações envolvidas com este estudo.

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IRCCS Eugenio Medea

Datas de registro do estudo

Essas datas acompanham o progresso do registro do estudo e os envios de resumo dos resultados para ClinicalTrials.gov. Os registros do estudo e os resultados relatados são revisados ​​pela National Library of Medicine (NLM) para garantir que atendam aos padrões específicos de controle de qualidade antes de serem publicados no site público.

Datas Principais do Estudo

Início do estudo (Real)

7 de abril de 2021

Conclusão Primária (Estimado)

30 de novembro de 2023

Conclusão do estudo (Estimado)

31 de dezembro de 2023

Datas de inscrição no estudo

Enviado pela primeira vez

30 de julho de 2021

Enviado pela primeira vez que atendeu aos critérios de CQ

12 de agosto de 2021

Primeira postagem (Real)

13 de agosto de 2021

Atualizações de registro de estudo

Última Atualização Postada (Real)

18 de outubro de 2023

Última atualização enviada que atendeu aos critérios de controle de qualidade

17 de outubro de 2023

Última verificação

1 de outubro de 2023

Mais Informações

Termos relacionados a este estudo

Outros números de identificação do estudo

  • RC2021_820

Informações sobre medicamentos e dispositivos, documentos de estudo

Estuda um medicamento regulamentado pela FDA dos EUA

Não

Estuda um produto de dispositivo regulamentado pela FDA dos EUA

Não

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