Emotionaalinen säätely lapsilla, joilla on ND: genomisen vaihtelun rooli, proteomiset mallit ja varhainen kokemus
tiistai 17. lokakuuta 2023 päivittänyt: IRCCS Eugenio Medea
Tunne-käyttäytymissääntely lapsilla, joilla on neurokehitysvamma: Genomisen vaihtelun roolin, proteomisten mallien ja varhaisen kokemuksen laadun tutkiva tutkimus
Lapset, joilla on hermoston kehitysvamma (ND), edustavat heterogeenista populaatiota, jolle on ominaista laaja valikoima kliinisiä diagnooseja (esim. aivohalvaus, sensorinen vajaatoiminta, psykomotorinen hidastuminen), jotka liittyvät erilaisiin puutteisiin, jotka ilmenevät lapsen varhaisessa vaiheessa.
Vaikka on laajalti osoitettu, että ND-lapsilla on useita eroja sosiaalis-emotionaalisissa taidoissa ja tunne-käyttäytymisen säätelyssä, taustalla olevat mekanismit, jotka liittyvät enemmän tai vähemmän heikentyneeseen kehityskulkuun, ovat edelleen osittain tutkimatta.
Vaikka useat tutkimukset ovat tutkineet biologisten ja ympäristötekijöiden roolia tyypillisesti kehittyvien lasten tai lasten, joilla on muita riskisairauksia kuin ND:tä (esim. pahoinpitelyn uhreiksi joutuneet lapset), emotionaalisen käyttäytymisen säätelyssä, metylaation roolia on tutkittu vain vähän. polymorfismit ja ympäristökokemukset ND-lasten tunne-käyttäytymisen säätelyssä ensimmäisten elinvuosien aikana.
Tämän projektin tavoitteena on tutkia biologisia (DNA-metylaatio, polymorfiset variantit ja proteomiikka) ja ympäristötekijöitä (esim. kivuliaita ja/tai invasiivisia hoitotoimenpiteitä, läheisyyttä ja fyysistä kontaktia) tekijöitä, jotka voivat liittyä lasten emotionaaliseen käyttäytymisen säätelyyn. ND:n kanssa.
Tutkimuksen yleiskatsaus
Tila
Rekrytointi
Yksityiskohtainen kuvaus
Tausta: Lapset, joilla on hermoston kehitysvamma (ND) ovat heterogeeninen populaatio, jolle on ominaista laaja valikoima kliinisiä diagnooseja, jotka liittyvät erilaisiin vammaisiin, jotka ilmenevät vauva- ja lapsuudessa. Vaikka diagnostinen kehys voi vaihdella, useissa tutkimuksissa havaittiin, että ND-lapsilla on heikentyneet sosiaaliset suhteet taidot, joille on ominaista heikommat vuorovaikutteiset ja dyadiset huomiotaidot ja vähentynyt ihmisten välisten kommunikaatiovihjeiden käyttö. Vaikka on laajalti osoitettu, että ND-lapsilla on useita eroja sosiaalis-emotionaalisissa taidoissa ja emotionaalisen käyttäytymisen säätelyssä, taustalla olevat mekanismit, jotka liittyvät enemmän tai vähemmän huonontuneisiin kehityskulkuihin, jäävät osittain tutkimatta.
Ensisijainen tavoite: tutkia otoksessa 3–24 kuukauden ikäisiä ND-lapsia 1) ehdokasgeenien metylaation (esim. OXTR, SLC6A4, BDNF ja DRD4), 2) tunne-käyttäytymisen säätelyn polymorfismien ja 3 osuutta. ) ympäristökokemus (eli haitalliset kokemukset ja vanhempien käyttäytymisen laatu) tunne-käyttäytymisen säätelyssä.
Toissijainen tavoite: 1) tutkia mahdollista yhteyttä proteomiikan ja tunne-käyttäytymisen säätelyn välillä otoksessa 3–24 kuukauden ikäisistä lapsista, joilla on ND; 2) tunnistaa emotionaalisen käyttäytymisen säätelyyn liittyviä ehdokasgeenien toiminnallisia ja rakenteellisia malleja laskennallista lähestymistapaa soveltaen. Lisäksi tunnistetaan geenimoduulit, jotka mahdollisesti liittyvät sosiaalis-emotionaaliseen kehitykseen vuorovaikutusverkostoissa ja aika-aika-aika-ilmiössä enkefalonissa.
Suunnitellut aktiviteetit:
Menetelmät: Hankkeessa on mukana kliininen ryhmä ND-lapsia ja heidän äitejään sekä kontrolliryhmä tyypillisesti kehittyvistä lapsista ja heidän äideitään. Ryhmien luonteesta johtuen tutkimus on lähes kokeellinen tutkimussuunnitelma.
Tutkimus sisältää seuraavat menettelyt:
- biologisen materiaalin kerääminen: syljen kerääminen ei-invasiivisilla menetelmillä ja Oragene OG575 -sarjalla (Genotek DNA) ja virtsan kerääminen ei-invasiivisilla menetelmillä.
- kyselylomakkeiden ja läheisyyspäiväkirjan hallinta: äitiä (sekä kliinisen ryhmän että kontrolliryhmän osalta) pyydetään täyttämään kyselylomakkeita, jotka liittyvät hänen mielialaansa, tavanomaiseen käyttäytymiseensa ja lapsen kehitykseen. Arvioidaan myös kuinka paljon ja millä tavalla äiti viettää fyysisessä kontaktissa (esim. vauvan hyväillen käytetty aika; vauvan pitämiseen käytetty aika; aika, joka kuluu vauvan ollessa kiinni äidin rinnassa). Nämä tiedot johdetaan käyttämällä Raiskilan et al.:n "läheisyyspäiväkirjan" uudelleenkäyttöistä versiota, joka on toteutettu sähköisessä muodossa APP-muodossa (APP: inContatto);
- vanhemman ja lapsen vuorovaikutuksen videonauhoittaminen puolistrukturoidussa kontekstissa viidessä eri vaiheessa Still Face -paradigman mukaisesti (Tronick et al., 1978): Play, Still#1, Reunion#1, Still#2, Reunion#2.
Vuorovaikutukset videoidaan myöhempää käyttäytymiskoodausta varten käyttämällä erilaisia koodaustyökaluja. Lapsen tunne-käyttäytymissääntely koodataan käyttämällä koodausjärjestelmiä: a) Lapsen ja hoitajan sitoutumisvaihe, b) Tronikin pikkulasten säätelypisteytysjärjestelmä ja äidin säätelyjärjestelmä. Lisäksi vauvan ja äidin käyttäytyminen koodataan Murrayn Global Rating Scale -koodausjärjestelmällä ja äidin kosketuskäyttäytyminen Provenzin Maternal Touch Coding System -järjestelmällä.
Opintotyyppi
Havainnollistava
Ilmoittautuminen (Arvioitu)
248
Yhteystiedot ja paikat
Tässä osiossa on tutkimuksen suorittajien yhteystiedot ja tiedot siitä, missä tämä tutkimus suoritetaan.
Opiskeluyhteys
- Nimi: Rosario Montirosso
- Puhelinnumero: +39031877494
- Sähköposti: rosario.montirosso@lanostrafamiglia.it
Opiskelupaikat
-
-
Lecco
-
Bosisio Parini, Lecco, Italia, 23842
- Rekrytointi
- IRCCS E. Medea
-
Ottaa yhteyttä:
- Rosario Montirosso
- Puhelinnumero: +39031877494
- Sähköposti: rosario.montirosso@lanostrafamiglia.it
-
-
Osallistumiskriteerit
Tutkijat etsivät ihmisiä, jotka sopivat tiettyyn kuvaukseen, jota kutsutaan kelpoisuuskriteereiksi. Joitakin esimerkkejä näistä kriteereistä ovat henkilön yleinen terveydentila tai aiemmat hoidot.
Kelpoisuusvaatimukset
Opintokelpoiset iät
3 kuukautta - 2 vuotta (Lapsi)
Hyväksyy terveitä vapaaehtoisia
Joo
Näytteenottomenetelmä
Ei-todennäköisyysnäyte
Tutkimusväestö
ND:tä sairastavat lapset ja heidän äitinsä rekrytoidaan U.O.C.:ssa peräkkäisen ja mukavuusnäytteen avulla. "Specialistic Rehabilitation - Neuropsychiatric Pathologies of Developmental Age" ja U.O.C. Tieteellisen instituutin "Funktionaalinen kuntoutus" "E.
Medea" (Bosisio Parinin paikka).
Tyypillisen kehityksen omaavia lapsia ja heidän äitiään rekrytoidaan Leccon maakunnan esikouluista.
Yleistä tutkimusta kuvaavan informatiivisen kirjeen katsomisen jälkeen äideihin otetaan yhteyttä puhelimitse ja heidät kutsutaan osallistumaan vapaaehtoisesti.
Kuvaus
Sisällyttämiskriteerit:
Lapset, joilla on ND:
- Ikä 3–24 kuukautta (kronologisesti tai korjattuna, jos kyseessä ovat keskosena syntyneet lapset);
- lievä tai kohtalainen kehityksen viivästyminen, joka on dokumentoitu kliinisillä oireilla (esim. aivovaurion oireilla neurologisessa tutkimuksessa tai hermokuvauksessa) tai kehitysasteikoilla (eli Griffiths III -asteikot), jotka liittyvät erilaisiin diagnooseihin (esim. aivohalvaus, keskosuus);
- geneettisten oireyhtymien puuttuminen. Griffiths III -asteikolla arvioidaan lapsen yleistä kehitystasoa.
Tyypilliset kehityslapset:
- syntymästä aikaväliin;
- ikä 3–24 kuukautta (kronologinen);
- peri- tai postnataalisen patologian puuttuminen.
Kriteerit äideille (DN ja tyypillinen kehitys):
- ikä yli 18 vuotta;
- hyvä italian kielen ymmärtäminen;
- kognitiivisten vaikeuksien ja/tai psykiatristen häiriöiden puuttuminen;
- ei psykotrooppisten lääkkeiden nauttimista;
- ei kuulu yksinhuoltajaperheeseen.
Poissulkemiskriteerit: katso sisällyttämiskriteerit.
Opintosuunnitelma
Tässä osiossa on tietoja tutkimussuunnitelmasta, mukaan lukien kuinka tutkimus on suunniteltu ja mitä tutkimuksella mitataan.
Miten tutkimus on suunniteltu?
Suunnittelun yksityiskohdat
- Havaintomallit: Case-Control
- Aikanäkymät: Poikkileikkaus
Kohortit ja interventiot
Ryhmä/Kohortti |
Interventio / Hoito |
|---|---|
|
lapset, joilla on ND
lapset, joilla on hermoston kehitysvamma (ND) iässä 3–24 kuukautta (kronologisesti tai korjattuna keskosena syntyneiden lasten osalta).
|
Genominen DNA uutetaan 0,4 ml:n eristä kustakin sylkinäytteestä pakkauksen valmistajan ehdottaman protokollan mukaisesti, kvantifioidaan Qubit 2.0:lla (Invitrogen) ja säilytetään -20 °C:ssa.
Jokaisen DNA:n 250 ng:n alikvootit muokataan metylaatioanalyysiä varten EZ DNA Methylation Lightning -pakkauksella (Zymo Research).
Näytteiden monistaminen ja niiden valmistelu NGS-sekvensointia varten suoritetaan kuvatulla tavalla.
Näytteet sekvensoidaan NextSeq 500:lla (Illumina).
Yksittäiset käsitellyt sekvenssit (PE-lukemat) kohdistetaan itsenäisesti vertailusekvensseihin käyttämällä rinnakkaista Smith-Waterman-algoritmia.
Vain sellaiset lukemat, jotka ovat johdonmukaisesti samassa vertailusekvenssissä, säilytetään.
Jokaisessa analysoidun sekvenssin jokaisessa CpG-kohdassa neljän emäksen taajuudet arvioidaan ja taulukoidaan.
Virtsanäytteet kerätään ei-invasiivisilla menetelmillä ja valmistetaan menetelmän mukaisesti, joka valmistelee eksosomien kvantitatiivista talteenottoa: sulatuksen ja sentrifugoinnin jälkeen 17 000 x g:ssä 10 minuuttia 4 °C:ssa talteenotetut supernatantit erotetaan ja sentrifugoidaan 200 000 x g:llä 1 tuntia 4 °C:ssa.
Eksosomipelletit erotetaan, pestään toistuvasti ja suspendoidaan uudelleen puskuriin (NH4HC03, 0,1 mM ph = 7,8).
Proteiinipitoisuus arvioidaan SPNTM Protein Assay -sarjalla ja jokainen näyte (50 ± 0,5 μg proteiinia) digestoidaan trypsiinillä käyttämällä entsyymi/substraatti-suhdetta 1:50 (w/w) 37 °C:ssa yön yli (o/w).
Toinen tryptinen digestio suoritetaan entsyymi:substraatti-suhteella 1:100 (w/w) 4 tunnin ajan.
Digestoidut näytteet, sentrifugoitu 13 000 x g:ssä 10 minuuttia, puhdistetaan ja konsentroidaan käyttäen PepClean C-18 -pylväitä.
Saadut näytteet analysoidaan käänteisfaasinestekromatografialla, joka on kytketty korkearesoluutioiseen massaspektrometriaan.
Havaintoistunnon aikana tehdään lyhyt noin 10 minuutin videotallenne äidin ja lapsen välisestä vuorovaikutuksesta puolistrukturoidussa ympäristössä arvioimaan lapsen tunnesäätelyä ja sosiaalista käyttäytymistä.
Vuorovaikutus rakentuu viiteen eri vaiheeseen Still Face -paradigman mukaisesti (Tronick et al., 1978): Play, Still#1, Reunion#1, Still#2, Reunion#2.
Leikkiä: Äitejä kutsutaan olemaan vuorovaikutuksessa vauvojensa kanssa 10 minuutin ajan; Silti: äitejä pyydetään pysymään paikallaan ja säilyttämään reagoimattomat ilmeettömät kasvot ja olemaan hymyilemättä, koskettamatta tai puhumatta lapselle 2 minuuttiin (Still#1: 2 minutes; Still#2: 2 minutes); Reunion: äitejä pyydetään jatkamaan leikkitoimintaa omiensa kanssa vielä 2 minuutin ajaksi (Reunion#1: 2 minuuttia; Reunion#2: 2 minuuttia).
|
|
Tyypilliset kehittyneet lapset (TD)
lapset, joiden tyypillinen kehitysikä on 3–24 kuukautta (kronologinen).
|
Genominen DNA uutetaan 0,4 ml:n eristä kustakin sylkinäytteestä pakkauksen valmistajan ehdottaman protokollan mukaisesti, kvantifioidaan Qubit 2.0:lla (Invitrogen) ja säilytetään -20 °C:ssa.
Jokaisen DNA:n 250 ng:n alikvootit muokataan metylaatioanalyysiä varten EZ DNA Methylation Lightning -pakkauksella (Zymo Research).
Näytteiden monistaminen ja niiden valmistelu NGS-sekvensointia varten suoritetaan kuvatulla tavalla.
Näytteet sekvensoidaan NextSeq 500:lla (Illumina).
Yksittäiset käsitellyt sekvenssit (PE-lukemat) kohdistetaan itsenäisesti vertailusekvensseihin käyttämällä rinnakkaista Smith-Waterman-algoritmia.
Vain sellaiset lukemat, jotka ovat johdonmukaisesti samassa vertailusekvenssissä, säilytetään.
Jokaisessa analysoidun sekvenssin jokaisessa CpG-kohdassa neljän emäksen taajuudet arvioidaan ja taulukoidaan.
Virtsanäytteet kerätään ei-invasiivisilla menetelmillä ja valmistetaan menetelmän mukaisesti, joka valmistelee eksosomien kvantitatiivista talteenottoa: sulatuksen ja sentrifugoinnin jälkeen 17 000 x g:ssä 10 minuuttia 4 °C:ssa talteenotetut supernatantit erotetaan ja sentrifugoidaan 200 000 x g:llä 1 tuntia 4 °C:ssa.
Eksosomipelletit erotetaan, pestään toistuvasti ja suspendoidaan uudelleen puskuriin (NH4HC03, 0,1 mM ph = 7,8).
Proteiinipitoisuus arvioidaan SPNTM Protein Assay -sarjalla ja jokainen näyte (50 ± 0,5 μg proteiinia) digestoidaan trypsiinillä käyttämällä entsyymi/substraatti-suhdetta 1:50 (w/w) 37 °C:ssa yön yli (o/w).
Toinen tryptinen digestio suoritetaan entsyymi:substraatti-suhteella 1:100 (w/w) 4 tunnin ajan.
Digestoidut näytteet, sentrifugoitu 13 000 x g:ssä 10 minuuttia, puhdistetaan ja konsentroidaan käyttäen PepClean C-18 -pylväitä.
Saadut näytteet analysoidaan käänteisfaasinestekromatografialla, joka on kytketty korkearesoluutioiseen massaspektrometriaan.
Havaintoistunnon aikana tehdään lyhyt noin 10 minuutin videotallenne äidin ja lapsen välisestä vuorovaikutuksesta puolistrukturoidussa ympäristössä arvioimaan lapsen tunnesäätelyä ja sosiaalista käyttäytymistä.
Vuorovaikutus rakentuu viiteen eri vaiheeseen Still Face -paradigman mukaisesti (Tronick et al., 1978): Play, Still#1, Reunion#1, Still#2, Reunion#2.
Leikkiä: Äitejä kutsutaan olemaan vuorovaikutuksessa vauvojensa kanssa 10 minuutin ajan; Silti: äitejä pyydetään pysymään paikallaan ja säilyttämään reagoimattomat ilmeettömät kasvot ja olemaan hymyilemättä, koskettamatta tai puhumatta lapselle 2 minuuttiin (Still#1: 2 minutes; Still#2: 2 minutes); Reunion: äitejä pyydetään jatkamaan leikkitoimintaa omiensa kanssa vielä 2 minuutin ajaksi (Reunion#1: 2 minuuttia; Reunion#2: 2 minuuttia).
|
Mitä tutkimuksessa mitataan?
Ensisijaiset tulostoimenpiteet
Tulosmittaus |
Toimenpiteen kuvaus |
Aikaikkuna |
|---|---|---|
|
Vauvan DNA-metylaatiotila
Aikaikkuna: 1 päivä rekrytoinnissa
|
DNA:n metylaatiostatus (ts.
prosenttiosuus) ehdokasgeeneistä (esim. OXTR, SLC6A4, BDNF ja DRD4) arvioidaan imeväisiltä saaduista sylkinäytteistä.
|
1 päivä rekrytoinnissa
|
|
Vauvan käyttäytymisen säätely
Aikaikkuna: 1 päivä rekrytoinnissa
|
Vauvan käyttäytymisen säätely (eli negatiivinen emotionaalisuus) koodataan mikroanalyyttisesti (eli sekunti kerrallaan) äidin ja lapsen vuorovaikutuksista videonauhoilta.
|
1 päivä rekrytoinnissa
|
Toissijaiset tulostoimenpiteet
Tulosmittaus |
Toimenpiteen kuvaus |
Aikaikkuna |
|---|---|---|
|
Pikkulasten proteomiset kuviot
Aikaikkuna: 1 päivä rekrytoinnissa
|
Proteomisia malleja arvioidaan ehdokasproteiinien suhteellisesta määrästä ja translaation jälkeisistä modifikaatioista, joiden uskotaan liittyvän imeväisten stressivasteeseen.
|
1 päivä rekrytoinnissa
|
Yhteistyökumppanit ja tutkijat
Täältä löydät tähän tutkimukseen osallistuvat ihmiset ja organisaatiot.
Sponsori
Opintojen ennätyspäivät
Nämä päivämäärät seuraavat ClinicalTrials.gov-sivustolle lähetettyjen tutkimustietueiden ja yhteenvetojen edistymistä. National Library of Medicine (NLM) tarkistaa tutkimustiedot ja raportoidut tulokset varmistaakseen, että ne täyttävät tietyt laadunvalvontastandardit, ennen kuin ne julkaistaan julkisella verkkosivustolla.
Opi tärkeimmät päivämäärät
Opiskelun aloitus (Todellinen)
Keskiviikko 7. huhtikuuta 2021
Ensisijainen valmistuminen (Arvioitu)
Torstai 30. marraskuuta 2023
Opintojen valmistuminen (Arvioitu)
Sunnuntai 31. joulukuuta 2023
Opintoihin ilmoittautumispäivät
Ensimmäinen lähetetty
Perjantai 30. heinäkuuta 2021
Ensimmäinen toimitettu, joka täytti QC-kriteerit
Torstai 12. elokuuta 2021
Ensimmäinen Lähetetty (Todellinen)
Perjantai 13. elokuuta 2021
Tutkimustietojen päivitykset
Viimeisin päivitys julkaistu (Todellinen)
Keskiviikko 18. lokakuuta 2023
Viimeisin lähetetty päivitys, joka täytti QC-kriteerit
Tiistai 17. lokakuuta 2023
Viimeksi vahvistettu
Sunnuntai 1. lokakuuta 2023
Lisää tietoa
Tähän tutkimukseen liittyvät termit
Muut tutkimustunnusnumerot
- RC2021_820
Lääke- ja laitetiedot, tutkimusasiakirjat
Tutkii yhdysvaltalaista FDA sääntelemää lääkevalmistetta
Ei
Tutkii yhdysvaltalaista FDA sääntelemää laitetuotetta
Ei
Nämä tiedot haettiin suoraan verkkosivustolta clinicaltrials.gov ilman muutoksia. Jos sinulla on pyyntöjä muuttaa, poistaa tai päivittää tutkimustietojasi, ota yhteyttä register@clinicaltrials.gov. Heti kun muutos on otettu käyttöön osoitteessa clinicaltrials.gov, se päivitetään automaattisesti myös verkkosivustollemme .