Эта страница была переведена автоматически, точность перевода не гарантируется. Пожалуйста, обратитесь к английской версии для исходного текста.

Эмоциональная регуляция у детей с НД: роль геномной изменчивости, протеомных паттернов и раннего опыта

17 октября 2023 г. обновлено: IRCCS Eugenio Medea

Эмоционально-поведенческая регуляция у детей с отклонениями в развитии нервной системы: исследовательское исследование роли геномной изменчивости, протеомных паттернов и качества раннего опыта

Дети с отклонениями в развитии нервной системы (НД) представляют собой гетерогенную популяцию, характеризующуюся широким спектром клинических диагнозов (например, детский церебральный паралич, сенсорные нарушения, задержка психомоторного развития), которые связаны с различными дефицитами, возникающими в раннем возрасте ребенка. Хотя было широко продемонстрировано, что дети с НД демонстрируют некоторые различия в социально-эмоциональных навыках и эмоционально-поведенческой регуляции, основные механизмы, связанные с более или менее нарушенными траекториями развития, остаются частично неизученными. В то время как в нескольких исследованиях изучалась роль биологических факторов и факторов окружающей среды в эмоционально-поведенческой регуляции типично развивающихся детей или детей с состояниями риска, отличными от НД (например, дети, ставшие жертвами жестокого обращения), мало исследований совместно изучали роль метилирования, полиморфизмы и средовой опыт в эмоционально-поведенческой регуляции детей с НД первых лет жизни. Целью этого проекта является исследование биологических (метилирование ДНК, полиморфные варианты и протеомика) и экологических (например, болезненные и/или инвазивные процедуры ухода за больными, близость и физический контакт) факторов, которые могут быть связаны с эмоциональной регуляцией поведения детей. с НД.

Обзор исследования

Статус

Рекрутинг

Условия

Вмешательство/лечение

Подробное описание

Актуальность: Дети с отклонениями в развитии нервной системы (НД) представляют собой гетерогенную популяцию, характеризующуюся широким разнообразием клинических диагнозов, которые связаны с различными нарушениями, возникающими в младенчестве и детстве. Хотя диагностические рамки могут различаться, в нескольких исследованиях было отмечено, что у детей с НД снижены навыки социальных отношений, характеризующиеся более низкими навыками интерактивного и диадного внимания и меньшим использованием сигналов межличностного общения. Хотя было широко продемонстрировано, что дети с НД демонстрируют некоторые различия в социально-эмоциональных навыках и регуляции эмоционального поведения, основные механизмы, связанные с более или менее нарушенными траекториями, остаются частично неизученными.

Основная цель: изучить в выборке детей с НД в возрасте от 3 до 24 месяцев вклад 1) метилирования генов-кандидатов (например, OXTR, SLC6A4, BDNF и DRD4), 2) полиморфизмов в эмоционально-поведенческой регуляции и 3 ) средовой опыт (т.е. неблагоприятный опыт и качество родительского поведения) в эмоционально-поведенческой регуляции.

Вторичная цель: 1) изучить возможную связь между протеомикой и эмоционально-поведенческой регуляцией в выборке детей с НД в возрасте от 3 до 24 месяцев; 2) выявить функциональные и структурные паттерны генов-кандидатов, связанных с регуляцией эмоционального поведения, применяя вычислительный подход. Также будут идентифицированы модули генов, потенциально связанные с социально-эмоциональным развитием в сетях взаимодействия и пространственно-временной коэкспрессии в головном мозге.

Планируемые мероприятия:

Методы: в проекте участвуют клиническая группа детей с НД и их матерей и контрольная группа из типично развивающихся детей и их матерей. Из-за характера групп исследование является квазиэкспериментальным.

Исследование включает в себя следующие процедуры:

  • сбор биологического материала: сбор слюны неинвазивными методами и набором Oragene OG575 (Genotek DNA) и сбор мочи неинвазивными методами.
  • введение анкет и дневника близости: матери (как для клинической группы, так и для контрольной группы) будет предложено заполнить некоторые анкеты, касающиеся их настроения, привычного поведения и развития ребенка. Также будет оцениваться, сколько и каким образом мать проводит в физическом контакте (напр. время, потраченное на ласку ребенка; время, проведенное на руках у ребенка; время прикладывания ребенка к груди матери). Эти данные будут получены с помощью перепрофилированной версии «дневника близости» Райскилы и др., реализованной в электронном формате в форме приложения (приложение: inContatto);
  • видеозапись взаимодействия родителей и детей в полуструктурированном контексте в 5 разных фазах в соответствии с парадигмой неподвижного лица (Tronick et al., 1978): игра, неподвижный № 1, воссоединение № 1, неподвижный № 2, воссоединение № 2.

Взаимодействия будут записываться на видео для последующего кодирования поведения с использованием различных инструментов кодирования. Эмоционально-поведенческая регуляция ребенка будет кодироваться с использованием систем кодирования: а) Фаза взаимодействия с младенцем и опекуном, б) Система оценки регуляции младенцев и Система оценки регуляции матери от Tronik. Кроме того, младенческое и материнское поведение будет кодироваться с использованием системы кодирования Глобальной рейтинговой шкалы Мюррея, а поведение матери при прикосновении — с помощью системы кодирования материнского прикосновения от Provenzi.

Тип исследования

Наблюдательный

Регистрация (Оцененный)

248

Контакты и местонахождение

В этом разделе приведены контактные данные лиц, проводящих исследование, и информация о том, где проводится это исследование.

Контакты исследования

Места учебы

Критерии участия

Исследователи ищут людей, которые соответствуют определенному описанию, называемому критериям приемлемости. Некоторыми примерами этих критериев являются общее состояние здоровья человека или предшествующее лечение.

Критерии приемлемости

Возраст, подходящий для обучения

От 3 месяца до 2 года (Ребенок)

Принимает здоровых добровольцев

Да

Метод выборки

Невероятностная выборка

Исследуемая популяция

Дети с НД и их матери будут набраны путем последовательной и удобной выборки в U.O.C. «Специалистическая реабилитация - нервно-психические патологии возраста развития» и УПЦ. «Функциональная реабилитация» НИИ «Э. Медея» (сайт Бозисио Парини). Дети с типичным развитием и их матери будут набраны из детских садов в провинции Лекко. После просмотра информационного письма с описанием общего исследования с матерями свяжутся по телефону и пригласят принять участие в нем добровольно.

Описание

Критерии включения:

Дети с НД:

  • Возраст от 3 до 24 месяцев (в хронологическом порядке или с поправкой в ​​случае недоношенных детей);
  • от легкой до умеренной задержки развития, подтвержденной клиническими признаками (например, симптомами повреждения головного мозга при неврологическом обследовании или нейровизуализации) или шкалами развития (например, по шкале Гриффитса III), связанной с различными диагнозами (например, церебральным параличом, недоношенностью);
  • отсутствие генетических синдромов. Для оценки общего уровня развития ребенка будет использоваться шкала Гриффитса III.

Типичное развитие детей:

  • от рождения до срока;
  • возраст от 3 до 24 месяцев (в хронологическом порядке);
  • отсутствие пери- или постнатальной патологии.

Критерии включения для матерей (DN и типичное развитие):

  • возраст старше 18 лет;
  • хорошее знание итальянского языка;
  • отсутствие когнитивных трудностей и/или психических расстройств;
  • отказ от приема психотропных препаратов;
  • не из неполной семьи.

Критерии исключения: см. критерии включения.

Учебный план

В этом разделе представлена ​​подробная информация о плане исследования, в том числе о том, как планируется исследование и что оно измеряет.

Как устроено исследование?

Детали дизайна

  • Наблюдательные модели: Кейс-контроль
  • Временные перспективы: Поперечный разрез

Когорты и вмешательства

Группа / когорта
Вмешательство/лечение
дети с НД
дети с отклонениями в развитии нервной системы (НД) в возрасте от 3 до 24 месяцев (в хронологическом порядке или с поправкой в ​​случае недоношенных детей).
Диагностический тест: Анализ метилирования ДНК
Геномная ДНК будет извлечена из 0,4 мл аликвоты каждого образца слюны с использованием протокола, предложенного производителем набора, количественно определена с помощью Qubit 2.0 (Invitrogen) и сохранена при -20°C. Аликвоты по 250 нг каждой ДНК будут редактировать для анализа метилирования с помощью набора EZ DNA Methylation Lightning (Zymo Research). Амплификация образцов и их подготовка к секвенированию NGS будут выполняться, как описано. Образцы будут секвенированы на NextSeq 500 (Illumina). Отдельные обработанные последовательности (чтения PE) будут независимо выровнены с эталонными последовательностями с использованием параллельного алгоритма Смита-Уотермана. Будут сохранены только чтения, которые последовательно выровнены с одной и той же эталонной последовательностью. В каждом сайте CpG в каждой проанализированной последовательности будут оцениваться и табулироваться частоты четырех оснований.
Диагностический тест: Протеомный анализ
Образцы мочи собирают с использованием неинвазивных методов и готовят в соответствии с процедурой, подготавливающей к количественному выделению экзосом: после оттаивания и центрифугирования при 17 000 g в течение 10 мин при 4°C извлеченные супернатанты отделяют и центрифугируют при 200 000 g в течение 1 ч при 4°С. Осадки экзосом отделяют, многократно промывают и ресуспендируют в буфере (NH4HCO3, 0,1 мМ, рН=7,8). Концентрацию белка оценивают с помощью набора для анализа белка SPNTM, и каждый образец (50 ± 0,5 мкг белка) расщепляют трипсином с использованием соотношения фермент/субстрат 1:50 (вес/вес) при 37 °C в течение ночи (м/вес). Второе триптическое расщепление проводят при соотношении фермент:субстрат 1:100 (вес/вес) в течение 4 часов. Расщепленные образцы центрифугируют при 13 000 g в течение 10 мин, очищают и концентрируют с использованием колонок PepClean C-18. Полученные образцы анализируют методом обращенно-фазовой жидкостной хроматографии в сочетании с масс-спектрометрией высокого разрешения.
Диагностический тест: Парадигма неподвижного лица
Во время сеанса наблюдения будет сделана короткая видеозапись взаимодействия матери и ребенка продолжительностью около 10 минут в полуструктурированной обстановке, чтобы оценить эмоциональную регуляцию ребенка и социальное поведение. Взаимодействие будет структурировано в 5 разных фаз в соответствии с парадигмой неподвижного лица (Tronick et al., 1978): игра, неподвижность №1, воссоединение №1, неподвижность №2, воссоединение №2. Игра: матерям будет предложено пообщаться со своими детьми в течение 10 минут; Неподвижно: матерей попросят оставаться на месте, сохраняя невозмутимое выражение лица, и не улыбаться, не прикасаться к ребенку и не разговаривать с ним в течение 2 минут (Неподвижный № 1: 2 минуты; Неподвижный № 2: 2 минуты); Воссоединение: матерей попросят возобновить игровую деятельность со своими собственными еще на 2 минуты (Воссоединение № 1: 2 минуты; Воссоединение № 2: 2 минуты).
Типично развитые дети (ТД)
дети с типичным возрастом развития от 3 до 24 месяцев (в хронологическом порядке).
Диагностический тест: Анализ метилирования ДНК
Геномная ДНК будет извлечена из 0,4 мл аликвоты каждого образца слюны с использованием протокола, предложенного производителем набора, количественно определена с помощью Qubit 2.0 (Invitrogen) и сохранена при -20°C. Аликвоты по 250 нг каждой ДНК будут редактировать для анализа метилирования с помощью набора EZ DNA Methylation Lightning (Zymo Research). Амплификация образцов и их подготовка к секвенированию NGS будут выполняться, как описано. Образцы будут секвенированы на NextSeq 500 (Illumina). Отдельные обработанные последовательности (чтения PE) будут независимо выровнены с эталонными последовательностями с использованием параллельного алгоритма Смита-Уотермана. Будут сохранены только чтения, которые последовательно выровнены с одной и той же эталонной последовательностью. В каждом сайте CpG в каждой проанализированной последовательности будут оцениваться и табулироваться частоты четырех оснований.
Диагностический тест: Протеомный анализ
Образцы мочи собирают с использованием неинвазивных методов и готовят в соответствии с процедурой, подготавливающей к количественному выделению экзосом: после оттаивания и центрифугирования при 17 000 g в течение 10 мин при 4°C извлеченные супернатанты отделяют и центрифугируют при 200 000 g в течение 1 ч при 4°С. Осадки экзосом отделяют, многократно промывают и ресуспендируют в буфере (NH4HCO3, 0,1 мМ, рН=7,8). Концентрацию белка оценивают с помощью набора для анализа белка SPNTM, и каждый образец (50 ± 0,5 мкг белка) расщепляют трипсином с использованием соотношения фермент/субстрат 1:50 (вес/вес) при 37 °C в течение ночи (м/вес). Второе триптическое расщепление проводят при соотношении фермент:субстрат 1:100 (вес/вес) в течение 4 часов. Расщепленные образцы центрифугируют при 13 000 g в течение 10 мин, очищают и концентрируют с использованием колонок PepClean C-18. Полученные образцы анализируют методом обращенно-фазовой жидкостной хроматографии в сочетании с масс-спектрометрией высокого разрешения.
Диагностический тест: Парадигма неподвижного лица
Во время сеанса наблюдения будет сделана короткая видеозапись взаимодействия матери и ребенка продолжительностью около 10 минут в полуструктурированной обстановке, чтобы оценить эмоциональную регуляцию ребенка и социальное поведение. Взаимодействие будет структурировано в 5 разных фаз в соответствии с парадигмой неподвижного лица (Tronick et al., 1978): игра, неподвижность №1, воссоединение №1, неподвижность №2, воссоединение №2. Игра: матерям будет предложено пообщаться со своими детьми в течение 10 минут; Неподвижно: матерей попросят оставаться на месте, сохраняя невозмутимое выражение лица, и не улыбаться, не прикасаться к ребенку и не разговаривать с ним в течение 2 минут (Неподвижный № 1: 2 минуты; Неподвижный № 2: 2 минуты); Воссоединение: матерей попросят возобновить игровую деятельность со своими собственными еще на 2 минуты (Воссоединение № 1: 2 минуты; Воссоединение № 2: 2 минуты).

Что измеряет исследование?

Первичные показатели результатов

Мера результата
Мера Описание
Временное ограничение
Статус метилирования ДНК младенцев
Временное ограничение: 1 день, при наборе
Статус метилирования ДНК (т.е. процентное содержание) генов-кандидатов (например, OXTR, SLC6A4, BDNF и DRD4) будет оцениваться из образцов слюны, полученных от младенцев.
1 день, при наборе
Регуляция поведения младенцев
Временное ограничение: 1 день, при наборе
Поведенческая регуляция младенца (т. е. негативная эмоциональность) будет кодироваться микроаналитически (т. е. посекундно) из видеозаписей взаимодействий матери и младенца.
1 день, при наборе

Вторичные показатели результатов

Мера результата
Мера Описание
Временное ограничение
Детские протеомные паттерны
Временное ограничение: 1 день, при наборе
Протеомные паттерны будут оцениваться по относительному количеству и посттрансляционным модификациям белков-кандидатов, которые, как считается, связаны с реакцией на стресс у младенцев.
1 день, при наборе

Соавторы и исследователи

Здесь вы найдете людей и организации, участвующие в этом исследовании.

Спонсор

IRCCS Eugenio Medea

Даты записи исследования

Эти даты отслеживают ход отправки отчетов об исследованиях и сводных результатов на сайт ClinicalTrials.gov. Записи исследований и сообщаемые результаты проверяются Национальной медицинской библиотекой (NLM), чтобы убедиться, что они соответствуют определенным стандартам контроля качества, прежде чем публиковать их на общедоступном веб-сайте.

Изучение основных дат

Начало исследования (Действительный)

7 апреля 2021 г.

Первичное завершение (Оцененный)

30 ноября 2023 г.

Завершение исследования (Оцененный)

31 декабря 2023 г.

Даты регистрации исследования

Первый отправленный

30 июля 2021 г.

Впервые представлено, что соответствует критериям контроля качества

12 августа 2021 г.

Первый опубликованный (Действительный)

13 августа 2021 г.

Обновления учебных записей

Последнее опубликованное обновление (Действительный)

18 октября 2023 г.

Последнее отправленное обновление, отвечающее критериям контроля качества

17 октября 2023 г.

Последняя проверка

1 октября 2023 г.

Дополнительная информация

Термины, связанные с этим исследованием

Другие идентификационные номера исследования

  • RC2021_820

Информация о лекарствах и устройствах, исследовательские документы

Изучает лекарственный продукт, регулируемый FDA США.

Нет

Изучает продукт устройства, регулируемый Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США.

Нет

Эта информация была получена непосредственно с веб-сайта clinicaltrials.gov без каких-либо изменений. Если у вас есть запросы на изменение, удаление или обновление сведений об исследовании, обращайтесь по адресу register@clinicaltrials.gov. Как только изменение будет реализовано на clinicaltrials.gov, оно будет автоматически обновлено и на нашем веб-сайте. .

Подписаться