ND 儿童的情绪调节:基因组变异、蛋白质组模式和早期经验的作用
神经发育障碍儿童的情绪行为调节:基因组变异、蛋白质组模式和早期体验质量作用的探索性研究
研究概览
详细说明
背景:患有神经发育障碍 (ND) 的儿童是一个异质人群,其特征是临床诊断多种多样,这与婴儿期和儿童期出现的不同缺陷有关。 尽管诊断框架可能有所不同,但多项研究观察到患有 ND 的儿童的社会关系技能均有所下降,其特点是互动和二元注意力技能较低,以及人际交流线索的使用减少。 尽管已广泛证明患有 ND 的儿童在社交情绪技能和情绪行为调节方面表现出多种差异,但与或多或少受损轨迹相关的潜在机制仍未得到部分探索。
主要目的:在 3 至 24 个月的 ND 儿童样本中探索 1) 候选基因甲基化(例如,OXTR、SLC6A4、BDNF 和 DRD4)、2) 情绪行为调节中的多态性以及 3 ) 情绪行为调节中的环境体验(即不利体验和父母行为的质量)。
次要目标:1) 在 3 至 24 个月的 ND 儿童样本中探索蛋白质组学与情绪行为调节之间的可能关联; 2) 通过应用计算方法识别与情绪行为调节相关的候选基因的功能和结构模式。 还将识别可能与脑中相互作用网络和时空共表达网络中的社会情感发展相关的基因模块。
计划开展的活动:
方法:该项目包括一个由 ND 患儿及其母亲组成的临床组和一个由正常发育的儿童及其母亲组成的对照组。 由于群体的性质,该研究是一种准实验研究设计。
该研究涉及以下程序:
- 生物材料的收集:使用无创方式和 Oragene OG575 试剂盒(Genotek DNA)收集唾液,使用无创方式收集尿液。
- 问卷调查和亲近日记的管理:母亲(临床组和对照组)将被要求填写一些关于他们的情绪、习惯行为和孩子发育的问卷。 还将评估母亲花费多少以及以何种方式进行身体接触(例如 花时间爱抚婴儿;抱婴儿的时间;宝宝含在妈妈乳房上的时间)。 这些数据将通过使用以电子格式实施的 Raiskila 等人的“亲密日记”的重新用途版本,以 APP(APP:inContatto)的形式获得;
- 根据 Still Face 范式 (Tronick et al., 1978),在半结构化上下文中的 5 个不同阶段对亲子互动进行录像:Play、Still#1、Reunion#1、Still#2、Reunion#2。
将使用各种编码工具对交互进行录像,以便进行后续的行为编码。 孩子的情绪行为调节将使用以下编码系统进行编码:a) 婴儿和看护者参与阶段,b) Tronik 的婴儿调节评分系统和母亲调节评分系统。 此外,将使用 Murray 的 Global Rating Scale 编码系统对婴儿和母亲的行为进行编码,并使用 Provenzi 的 Maternal Touch Coding System 对母亲的触摸行为进行编码。
研究类型
注册 (估计的)
联系人和位置
学习联系方式
- 姓名:Rosario Montirosso
- 电话号码:+39031877494
- 邮箱:rosario.montirosso@lanostrafamiglia.it
学习地点
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Lecco
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Bosisio Parini、Lecco、意大利、23842
- 招聘中
- IRCCS E. Medea
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接触:
- Rosario Montirosso
- 电话号码:+39031877494
- 邮箱:rosario.montirosso@lanostrafamiglia.it
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参与标准
资格标准
适合学习的年龄
接受健康志愿者
取样方法
研究人群
描述
纳入标准:
患有 ND 的儿童:
- 年龄在 3 到 24 个月之间(按时间顺序或在早产儿的情况下更正);
- 临床体征(例如,神经学检查或神经影像学上的脑损伤症状)或与各种诊断(例如,脑瘫、早产)相关的发育量表(即格里菲思 III 量表)记录的轻度至中度发育迟缓;
- 没有遗传综合征。 Griffiths III 量表将用于评估孩子的整体发展水平。
典型发育儿童:
- 足月出生;
- 年龄在 3 到 24 个月之间(按时间顺序);
- 没有围产期或产后病理。
母亲的纳入标准(DN 和典型发育):
- 年龄在 18 岁以上;
- 精通意大利语;
- 没有认知困难和/或精神障碍;
- 不服用精神药物;
- 不属于单亲家庭。
排除标准:参考纳入标准。
学习计划
研究是如何设计的?
设计细节
- 观测模型:病例对照
- 时间观点:横截面
队列和干预
团体/队列 |
干预/治疗 |
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患有 ND 的儿童
年龄在 3 至 24 个月之间的神经发育障碍 (ND) 儿童(按时间顺序或在早产儿的情况下更正)。
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使用试剂盒制造商建议的方案从每个唾液样本的 0.4 ml 等分试样中提取基因组 DNA,使用 Qubit 2.0 (Invitrogen) 进行量化,并储存在 -20°C。
每种 DNA 的 250 ng 等分试样将使用 EZ DNA 甲基化闪电试剂盒(Zymo Research)进行甲基化分析。
样品的扩增及其用于 NGS 测序的制备将按照所述进行。
样本将在 NextSeq 500 (Illumina) 上进行测序。
单独处理的序列(PE 读数)将使用并行 Smith-Waterman 算法与参考序列独立比对。
只有与相同参考序列一致对齐的读数才会被保留。
在每个分析序列的每个 CpG 位点,四个碱基的频率将被评估并制成表格。
使用非侵入性方法收集尿液样本,并根据外泌体定量回收的准备程序进行制备:一旦解冻并在 4°C 下以 17,000 x g 离心 10 分钟,分离回收的上清液并以 200,000 x g 离心 1 4°C 小时。
分离外泌体颗粒,反复洗涤并重悬于缓冲液(NH4HCO3,0.1 mM ph=7.8)中。
使用 SPNTM 蛋白质测定试剂盒估算蛋白质浓度,每个样品(50 ± 0.5 μg 蛋白质)在 37 °C 下以 1:50 (w/w) 的酶/底物比例用胰蛋白酶消化过夜 (o/w)。
以 1:100 (w/w) 的酶:底物比例进行第二次胰蛋白酶消化 4 小时。
消化后的样品以 13,000 × g 离心 10 分钟,然后使用 PepClean C-18 柱进行纯化和浓缩。
获得的样品通过与高分辨率质谱联用的反相液相色谱法进行分析。
在观察环节中,将在半结构化环境中录制一段约 10 分钟的母子互动短片,以评估孩子的情绪调节和社交行为。
根据 Still Face 范式(Tronick 等人,1978 年),交互将分为 5 个不同的阶段:Play、Still#1、Reunion#1、Still#2、Reunion#2。
玩:请妈妈们与宝宝互动10分钟; Still:妈妈们将被要求保持不动,同时保持一张没有反应的无表情的脸,不要微笑、触摸或与孩子说话 2 分钟(Still#1:2 分钟;Still#2:2 分钟);团聚:妈妈们将被要求与自己的孩子一起继续玩 2 分钟(团聚#1:2 分钟;团聚#2:2 分钟)。
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典型发育儿童(TD)
典型发育年龄在 3 到 24 个月之间(按时间顺序)的儿童。
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使用试剂盒制造商建议的方案从每个唾液样本的 0.4 ml 等分试样中提取基因组 DNA,使用 Qubit 2.0 (Invitrogen) 进行量化,并储存在 -20°C。
每种 DNA 的 250 ng 等分试样将使用 EZ DNA 甲基化闪电试剂盒(Zymo Research)进行甲基化分析。
样品的扩增及其用于 NGS 测序的制备将按照所述进行。
样本将在 NextSeq 500 (Illumina) 上进行测序。
单独处理的序列(PE 读数)将使用并行 Smith-Waterman 算法与参考序列独立比对。
只有与相同参考序列一致对齐的读数才会被保留。
在每个分析序列的每个 CpG 位点,四个碱基的频率将被评估并制成表格。
使用非侵入性方法收集尿液样本,并根据外泌体定量回收的准备程序进行制备:一旦解冻并在 4°C 下以 17,000 x g 离心 10 分钟,分离回收的上清液并以 200,000 x g 离心 1 4°C 小时。
分离外泌体颗粒,反复洗涤并重悬于缓冲液(NH4HCO3,0.1 mM ph=7.8)中。
使用 SPNTM 蛋白质测定试剂盒估算蛋白质浓度,每个样品(50 ± 0.5 μg 蛋白质)在 37 °C 下以 1:50 (w/w) 的酶/底物比例用胰蛋白酶消化过夜 (o/w)。
以 1:100 (w/w) 的酶:底物比例进行第二次胰蛋白酶消化 4 小时。
消化后的样品以 13,000 × g 离心 10 分钟,然后使用 PepClean C-18 柱进行纯化和浓缩。
获得的样品通过与高分辨率质谱联用的反相液相色谱法进行分析。
在观察环节中,将在半结构化环境中录制一段约 10 分钟的母子互动短片,以评估孩子的情绪调节和社交行为。
根据 Still Face 范式(Tronick 等人,1978 年),交互将分为 5 个不同的阶段:Play、Still#1、Reunion#1、Still#2、Reunion#2。
玩:请妈妈们与宝宝互动10分钟; Still:妈妈们将被要求保持不动,同时保持一张没有反应的无表情的脸,不要微笑、触摸或与孩子说话 2 分钟(Still#1:2 分钟;Still#2:2 分钟);团聚:妈妈们将被要求与自己的孩子一起继续玩 2 分钟(团聚#1:2 分钟;团聚#2:2 分钟)。
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研究衡量的是什么?
主要结果指标
结果测量 |
措施说明 |
大体时间 |
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婴儿DNA甲基化状态
大体时间:1天,在招聘会上
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DNA 甲基化状态(即
将从婴儿获得的唾液样本中评估候选基因(例如,OXTR、SLC6A4、BDNF 和 DRD4)的百分比)。
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1天,在招聘会上
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婴儿行为调节
大体时间:1天,在招聘会上
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婴儿行为调节(即负面情绪)将从母婴互动的录像带中进行微观分析(即逐秒)编码。
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1天,在招聘会上
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次要结果测量
结果测量 |
措施说明 |
大体时间 |
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婴儿蛋白质组学模式
大体时间:1天,在招聘会上
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将评估候选蛋白质的相对数量和翻译后修饰的蛋白质组学模式,这些蛋白质被认为与婴儿的应激反应有关。
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1天,在招聘会上
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合作者和调查者
研究记录日期
研究主要日期
学习开始 (实际的)
初级完成 (估计的)
研究完成 (估计的)
研究注册日期
首次提交
首先提交符合 QC 标准的
首次发布 (实际的)
研究记录更新
最后更新发布 (实际的)
上次提交的符合 QC 标准的更新
最后验证
更多信息
与本研究相关的术语
其他研究编号
- RC2021_820
药物和器械信息、研究文件
研究美国 FDA 监管的药品
研究美国 FDA 监管的设备产品
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DNA甲基化分析的临床试验
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